【摘要】：目的：利用二維凝膠電泳—肽質(zhì)量指紋譜的蛋白質(zhì)組學(xué)方法,建立健康老年人、慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)患者肌萎縮及非萎縮的二維凝膠電泳(2-DE)圖譜,識別、鑒定與COPD外周骨骼肌萎縮相關(guān)的結(jié)構(gòu)蛋白,探討COPD外周肌萎縮的發(fā)病機(jī)制。 方法：將27例入選者分為健康組(9例)、COPD骨骼肌萎縮組(9例)COPD骨骼肌非萎縮組(9例),首先進(jìn)行肺功能、身體組成、血?dú)夥治觥⒐伤念^肌最大主動收縮力測定。然后利用二維凝膠電泳分離COPD外周骨骼肌萎縮、非萎縮患者及正常健康老年人的股四頭肌外側(cè)肌組織的總蛋白質(zhì),使用圖像掃描獲取2-DE圖譜,將PDQuest圖像軟件比較電泳圖譜中的異常蛋白質(zhì)點(diǎn),根據(jù)蛋白點(diǎn)在2倍以上上調(diào)或者2倍以下下調(diào)的點(diǎn)為第一選點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn),結(jié)合2-DE圖譜,通過圖譜中膠點(diǎn)的深淺和大小識別選取有差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)；應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)儀得到相應(yīng)的肽質(zhì)量指紋譜(PMF),最后借助Mascot軟件結(jié)合NCBInr數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索鑒定相關(guān)結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)。 結(jié)果：1.COPD骨骼肌萎縮患者臨床特點(diǎn)：COPD骨骼肌萎縮組較COPD骨骼肌非萎縮組病程長,COPD骨骼肌萎縮組在在體重,體質(zhì)量指數(shù)、去脂肪指數(shù)、股四頭肌周徑、股四頭肌最大主動收縮力均較健康對照組、COPD骨骼肌非萎縮組低(均P＜0.01),COPD骨骼肌非萎縮組與健康對照組在體重、去脂肪指數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.36),COPD骨骼肌非萎縮組在體質(zhì)量指數(shù)、股四頭肌周徑、股四頭肌最大主動收縮力較健康對照組低(P0.05)。COPD骨骼肌萎縮組在肺功能測定FEV1/PRE%、FEV1/FVC%較健康對照組、COPD骨骼肌非萎縮組低(P0.05),COPD骨骼肌非萎縮組較健康組低(P0.05)。三組在血?dú)夥治鼋Y(jié)果Pa02有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.01),而PaCO2方面無差異,COPD骨骼肌萎縮組Pa02較健康對照組、COPD骨骼肌非萎縮組低(均P0.01)。 2.獲得分辨率和重復(fù)性均較好的二維凝膠電泳圖譜,鑒定出可能與COPD肌萎縮發(fā)生密切相關(guān)的8種相關(guān)結(jié)構(gòu)蛋白及其肽質(zhì)量指紋圖譜：它們分別是骨骼肌α肌動蛋白、心肌α肌動蛋白解離亞型c、心肌α肌動蛋白解離亞型b、肌球蛋白輕鏈-6B、心肌肌球蛋白調(diào)節(jié)輕鏈-2、β心肌解離c亞型肌球蛋白多肽7、骨骼肌肌球蛋白1/3輕鏈3f亞型、肌紅蛋白。 3.在健康與萎縮組：與健康組相比,心肌解離c亞型肌球蛋白多肽7在COPD發(fā)生萎縮表現(xiàn)為上調(diào)；健康與非萎縮組：與健康組比較,肌紅蛋白在COPD非萎縮表現(xiàn)為上調(diào)；萎縮與非萎縮組：相對于萎縮組而言,心肌α肌動蛋白解離亞型c在非萎縮表現(xiàn)為上調(diào),而骨骼肌α肌動蛋白在非萎縮表現(xiàn)為下調(diào)；通過對健康與萎縮、非萎縮三組一起比較后發(fā)現(xiàn)：與健康組相比,肌球蛋白輕鏈-6B、心肌肌球蛋白調(diào)節(jié)輕鏈-2、骨骼肌肌球蛋白1/3輕鏈3f亞型、肌紅蛋白及亞型、在萎縮與非萎縮組均表現(xiàn)為上調(diào),僅心肌α肌動蛋白解離亞型b表現(xiàn)為下調(diào),而且心肌肌球蛋白調(diào)節(jié)輕鏈-2、心肌α肌動蛋白解離亞型b、肌紅蛋白亞型在非萎縮組中上調(diào)或下調(diào)的變化幅度更為明顯,骨骼肌肌球蛋白1/3輕鏈3f亞型與肌球蛋白輕鏈-6B在萎縮組中變化較明顯。 結(jié)論：COPD常伴有明顯外周骨骼肌功能障,其實(shí)質(zhì)包括相關(guān)結(jié)構(gòu)蛋白數(shù)量及質(zhì)量的改變,相關(guān)結(jié)構(gòu)蛋白的改變與外周骨骼肌障礙相關(guān),在COPD病程的不同階段,上述結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)數(shù)量上有顯著的變化,可能是COPD患者在長期缺氧、氧化應(yīng)激、水鹽電解質(zhì)酸堿平衡紊亂、營養(yǎng)不良及全身炎癥反應(yīng)多因素共同作用下的結(jié)果。蛋白質(zhì)組學(xué)為研究COPD患者外周肌萎縮的機(jī)制提供理論基礎(chǔ)和研究方向。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R563.9
【圖文】：

圖2所示為COPD骨骼肌萎縮組股四頭肌外側(cè)肌肉標(biāo)本裂解蛋白質(zhì)分離得到的2一DE圖譜，分離到558個蛋白點(diǎn)，分布在PH:3一10范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量14.4一97KD范圍內(nèi)。(2)COPD骨骼肌萎縮與COPD骨骼肌非萎縮組

圖3所示為COPD骨骼肌萎縮組股四頭肌外側(cè)肌肉標(biāo)本裂解蛋白質(zhì)分離得到的2一DE圖譜，分離到引0個蛋白點(diǎn)，分布在PH:3一10范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量14.4一97KI〕范圍內(nèi)。25

圖4所示為COPD骨骼肌非萎縮組股四頭肌外側(cè)肌肉標(biāo)本裂解蛋白質(zhì)分離得到的2一DE圖譜，分離到355個蛋白點(diǎn)，分布在PH:3一10范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量14.4一97KI〕范圍內(nèi)。(3)COPD骨骼肌非萎縮與健康對照組26

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本文編號：2747898