【摘要】：目的:探討Elafin在氣道上皮細胞系16HBE胞質(zhì)內(nèi)的抗炎機制及其對黏液高分泌的影響和相關(guān)的機制 方法:(1)體外培養(yǎng)人支氣管上皮細胞系16HBE細胞,將已構(gòu)建好的pEGFP-N1-Elafin載體轉(zhuǎn)染到細胞中,并以空質(zhì)粒載體作其對照,以外源性腫瘤壞死因子(TNF)-α作為刺激物共同孵育。將細胞分為3組:①空白對照組;②空質(zhì)粒載體+外源性TNF-α(10μg/L)組;③重組質(zhì)粒+外源性TNF-α(10μg/L)組。間接免疫熒光細胞化學法結(jié)合激光共聚焦顯微鏡檢測細胞核中核因子(NF)-κB的活性,ELISA檢測細胞上清液中炎性介質(zhì)(選取IL-1β、IL-8作為代表)的含量,Western blot檢測SUMO-1-p-IκBα含量。(2)給予外源性EGF作為刺激物共同孵育。將細胞分為3組:①空白對照組;②空質(zhì)粒載體+ EGF(25μg/L)組;③重組質(zhì)粒+EGF(25μg/L)組。RT-PCR和ELISA分別檢測細胞內(nèi)黏蛋白(MUC)5AC mRNA水平和MUC5AC含量。間接免疫熒光細胞化學法結(jié)合激光共聚焦顯微鏡檢測細胞核中核因子(NF)-κB的活性。Western blot檢測SUMO-1-p-IκBα含量。 結(jié)果:(1)重組質(zhì)粒組的細胞中NF-κB的活性和IL-1β、IL-8的生成量與空質(zhì)粒載體組細胞相比明顯降低而SUMO-1-p-IκBα的含量則顯著高于后者(P㩳0.01)。(2)轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒的細胞中MUC5AC mRNA水平、MUC5AC的含量(0.36±0.09)以及NF-κB的活性顯著低于轉(zhuǎn)染空載體的對照組細胞[MUC5AC的含量(0.55±0.07)](P㩳0.01),而SUMO-1-p-IκBα的含量則顯著高于后者(P㩳0.01)。 結(jié)論:(1)Elafin能夠通過促進IκBα的類泛素化阻止NF-κB的活化,下調(diào)前炎性介質(zhì)的生成,從而發(fā)揮其抗炎作用。(2) Elafin促進p-IκBα的類泛素化阻止NF-κB的活化,從而下調(diào)MUC5AC的生成。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R563.9
【圖文】：

ABC圖 1-1 Elafin 對 NF-κB 活化的影響Fig1-1 Effect of Elafin on NF-κB activity innuclearElafin inbits exogenous TNF-α-inducedNF-κB activity（Laser scanning confocalmicroscope,×400）.A.Blank control group;B.Empty plasmid+TNF-α group;C. pEGFP-N1- Elafin +TNF-α group

圖 1-2 Elafin 在胞質(zhì)內(nèi)對 IL-1β 和 IL-8 生成水平的影響Fig1-2 Effect of Elafin in cytoplasm on IL-1β and IL-8 productionElafin down-regulation of exogenous TNF-α-induced IL-1β and IL-8 productA.Blank control group; B. Empty plasmid+ TNF-α group; C. pEGFP-N1+TNF-α group050100150200A B CIL-IL-

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 吳小玲;周向東;;氣道黏液高分泌的信號傳導通路[J];基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床;2008年11期

2 吳雪梅;劉霞;王琛;謝紅;;核因子-κB特異性抑制劑小白菊內(nèi)酯在大鼠心肌組織的藥效時間[J];中國生化藥物雜志;2009年06期

3 李升錦;周向東;;呼吸道黏蛋白5AC基因轉(zhuǎn)錄表達的順式調(diào)控元件分析[J];中國生物工程雜志;2007年02期

4 楊捷;周向東;;天然內(nèi)生抗菌多肽elafin真核表達載體的構(gòu)建及在真核細胞的表達[J];中國抗生素雜志;2005年10期

本文編號：2741684