【摘要】：目的支氣管哮喘(簡稱哮喘)是由多種細胞因子參與的慢性氣道炎癥性疾病,其以氣道重構(gòu)和氣道炎癥為主要特征。氣道重構(gòu)是哮喘發(fā)病的重要環(huán)節(jié),但其發(fā)病機制至今尚未完全明確。人氣道平滑肌細胞(Human airway smooth muscle cells,HASMCs)增生是氣道重構(gòu)的一個重要因素。最新研究發(fā)現(xiàn),HASMCs不僅具有增生肥大的功能,而且在細胞因子與炎癥介質(zhì)的共同刺激下能合成分泌其他炎癥介質(zhì),作為免疫細胞參與哮喘的發(fā)病過程。Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)參與多種疾病過程,與哮喘密切相關(guān)。我們擬通過建立人體體外被動致敏哮喘模型,觀察HASMCs在哮喘狀態(tài)下的增殖與分泌功能。通過檢測HASMCs的增殖反應(yīng)和分泌的細胞因子,更科學、全面地評價哮喘狀態(tài)下HASMCs的功能變化,以探討TLR4相關(guān)信號分子對HASMCs增殖和細胞因子合成分泌功能的影響。并且,嘗試探討傳統(tǒng)抗瘧中藥青蒿素與地塞米松對HASMCs TLR4、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming growth factor,TGF-β1)表達及細胞增殖的影響以開拓哮喘中藥治療的新思路。 方法通過培養(yǎng)原代HASMCs,建立人體體外被動致敏哮喘模型,使用免疫細胞化學、MTT和ELISA等分子生物學技術(shù),用TNF-α、渥漫青霉素、PDTC和青蒿素等作為工具藥,探討TLR4、PI3K、NF-κB對HASMCs增殖與分泌合成功能的影響。 結(jié)果 1.與正常對照組相比,被動致敏組HASMCs增殖反應(yīng)明顯增加(P0.01)、總蛋白合成量增高(P0.01)和IgE的分泌水平明顯增高(P0.01),成功建立了人體體外被動致敏哮喘模型。 2.與正常對照組相比,被動致敏組HASMCs分泌TGF-β1水平明顯增高,差異有顯著性(P0.01)。 3.與正常對照組相比較,TNF-α組細胞增殖反應(yīng)明顯增加(P0.01),TLR4明顯增高(P0.01),TGF-β1含量明顯增高(P0.01)。 4.與正常對照組相比,TLR4抗體組TLR4表達明顯減少(P0.01),細胞增殖反應(yīng)明顯減少(P0.01),TGF-β1含量明顯降低(P0.01)。 5.與正常對照組相比,TNF-α+渥漫青霉素組、TNF-α+PDTC組細胞增殖反應(yīng)明顯減少(P0.01),TGF-β1含量明顯降低(P0.01)。 6.與TNF-α+渥漫青霉素組、TNF-α+PDTC組相比,TNF-α+渥漫青霉素組+PDTC組細胞增殖反應(yīng)明顯減少(P0.05),TGF-β1含量明顯降低(P0.05)。 7.與正常對照組相比,TNF-α+青蒿素組、TNF-α+地塞米松組TLR4表達明顯減少(P0.01),細胞增殖反應(yīng)減少(P0.05),TGF-β1含量明顯降低(P0.01)。 結(jié)論 1.被動致敏HASMCs過度增生、蛋白合成能力顯著增強和大量IgE的分泌,提示本實驗成功建立了人體體外被動致敏哮喘模型;微環(huán)境的顯著改變,可能是導(dǎo)致氣道重建的重要因素之一。 2.HASMCs增生是氣道重構(gòu)的一個顯著特征。TNF-α能夠激活HASMCs表面TLR4并且上調(diào)其的表達,從而增強HASMCs的增殖和TGF-β1合成分泌功能。HASMCs的過度增殖和大量TGF-β1的釋放,可能是導(dǎo)致哮喘氣道重構(gòu)的病理學基礎(chǔ)之一。 3.TLR4抗體能夠抑制哮喘HASMCs的增殖和TGF-β1的合成分泌功能,可能具有逆轉(zhuǎn)或延緩哮喘氣道重構(gòu)的作用。 4.TLR4與PI3K、NF-κB具有調(diào)控HASMCs合成分泌TGF-β1的功能,同時抑制PI3K和NF-κB可以顯著抑制細胞增殖和減少炎癥因子的分泌,由此可見TLR4相關(guān)信號分子的激活可能是哮喘氣道重構(gòu)的發(fā)病機制之一。 5.青蒿素和地塞米松均可通過下調(diào)HASMCs表面TLR4表達從而抑制HASMCs增殖和分泌TGF-β1功能,也許對哮喘氣道重構(gòu)具有一定治療作用。
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R562.25
【圖文】：

第4代HASMCs

第4代HASMCsFig.1-14thgenerationHASMCsFig.1-24thgenerationHASMCs

【參考文獻】

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本文編號：2738415