【摘要】：目的支氣管哮喘(簡(jiǎn)稱哮喘)是由多種細(xì)胞因子參與的慢性氣道炎癥性疾病,其以氣道重構(gòu)和氣道炎癥為主要特征。氣道重構(gòu)是哮喘發(fā)病的重要環(huán)節(jié),但其發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確。人氣道平滑肌細(xì)胞(Human airway smooth muscle cells,HASMCs)增生是氣道重構(gòu)的一個(gè)重要因素。最新研究發(fā)現(xiàn),HASMCs不僅具有增生肥大的功能,而且在細(xì)胞因子與炎癥介質(zhì)的共同刺激下能合成分泌其他炎癥介質(zhì),作為免疫細(xì)胞參與哮喘的發(fā)病過(guò)程。Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)參與多種疾病過(guò)程,與哮喘密切相關(guān)。我們擬通過(guò)建立人體體外被動(dòng)致敏哮喘模型,觀察HASMCs在哮喘狀態(tài)下的增殖與分泌功能。通過(guò)檢測(cè)HASMCs的增殖反應(yīng)和分泌的細(xì)胞因子,更科學(xué)、全面地評(píng)價(jià)哮喘狀態(tài)下HASMCs的功能變化,以探討TLR4相關(guān)信號(hào)分子對(duì)HASMCs增殖和細(xì)胞因子合成分泌功能的影響。并且,嘗試探討傳統(tǒng)抗瘧中藥青蒿素與地塞米松對(duì)HASMCs TLR4、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(Transforming growth factor,TGF-β1)表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響以開(kāi)拓哮喘中藥治療的新思路。 方法通過(guò)培養(yǎng)原代HASMCs,建立人體體外被動(dòng)致敏哮喘模型,使用免疫細(xì)胞化學(xué)、MTT和ELISA等分子生物學(xué)技術(shù),用TNF-α、渥漫青霉素、PDTC和青蒿素等作為工具藥,探討TLR4、PI3K、NF-κB對(duì)HASMCs增殖與分泌合成功能的影響。 結(jié)果 1.與正常對(duì)照組相比,被動(dòng)致敏組HASMCs增殖反應(yīng)明顯增加(P0.01)、總蛋白合成量增高(P0.01)和IgE的分泌水平明顯增高(P0.01),成功建立了人體體外被動(dòng)致敏哮喘模型。 2.與正常對(duì)照組相比,被動(dòng)致敏組HASMCs分泌TGF-β1水平明顯增高,差異有顯著性(P0.01)。 3.與正常對(duì)照組相比較,TNF-α組細(xì)胞增殖反應(yīng)明顯增加(P0.01),TLR4明顯增高(P0.01),TGF-β1含量明顯增高(P0.01)。 4.與正常對(duì)照組相比,TLR4抗體組TLR4表達(dá)明顯減少(P0.01),細(xì)胞增殖反應(yīng)明顯減少(P0.01),TGF-β1含量明顯降低(P0.01)。 5.與正常對(duì)照組相比,TNF-α+渥漫青霉素組、TNF-α+PDTC組細(xì)胞增殖反應(yīng)明顯減少(P0.01),TGF-β1含量明顯降低(P0.01)。 6.與TNF-α+渥漫青霉素組、TNF-α+PDTC組相比,TNF-α+渥漫青霉素組+PDTC組細(xì)胞增殖反應(yīng)明顯減少(P0.05),TGF-β1含量明顯降低(P0.05)。 7.與正常對(duì)照組相比,TNF-α+青蒿素組、TNF-α+地塞米松組TLR4表達(dá)明顯減少(P0.01),細(xì)胞增殖反應(yīng)減少(P0.05),TGF-β1含量明顯降低(P0.01)。 結(jié)論 1.被動(dòng)致敏HASMCs過(guò)度增生、蛋白合成能力顯著增強(qiáng)和大量IgE的分泌,提示本實(shí)驗(yàn)成功建立了人體體外被動(dòng)致敏哮喘模型;微環(huán)境的顯著改變,可能是導(dǎo)致氣道重建的重要因素之一。 2.HASMCs增生是氣道重構(gòu)的一個(gè)顯著特征。TNF-α能夠激活HASMCs表面TLR4并且上調(diào)其的表達(dá),從而增強(qiáng)HASMCs的增殖和TGF-β1合成分泌功能。HASMCs的過(guò)度增殖和大量TGF-β1的釋放,可能是導(dǎo)致哮喘氣道重構(gòu)的病理學(xué)基礎(chǔ)之一。 3.TLR4抗體能夠抑制哮喘HASMCs的增殖和TGF-β1的合成分泌功能,可能具有逆轉(zhuǎn)或延緩哮喘氣道重構(gòu)的作用。 4.TLR4與PI3K、NF-κB具有調(diào)控HASMCs合成分泌TGF-β1的功能,同時(shí)抑制PI3K和NF-κB可以顯著抑制細(xì)胞增殖和減少炎癥因子的分泌,由此可見(jiàn)TLR4相關(guān)信號(hào)分子的激活可能是哮喘氣道重構(gòu)的發(fā)病機(jī)制之一。 5.青蒿素和地塞米松均可通過(guò)下調(diào)HASMCs表面TLR4表達(dá)從而抑制HASMCs增殖和分泌TGF-β1功能,也許對(duì)哮喘氣道重構(gòu)具有一定治療作用。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R562.25
【圖文】：

第4代HASMCs

第4代HASMCsFig.1-14thgenerationHASMCsFig.1-24thgenerationHASMCs

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蘇苗賞,李昌崇;Toll樣受體與支氣管哮喘免疫調(diào)控[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(兒科學(xué)分冊(cè));2005年02期

2 許淑云;徐永健;張珍祥;倪望;陳士新;;核因子κB在支氣管哮喘模型大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖中的作用[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年05期

3 云云;黃升海;;Toll樣受體3介導(dǎo)呼吸道合胞病毒感染人肺上皮細(xì)胞的炎性反應(yīng)及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2007年21期

4 劉道芳,魏偉,宋禮華;TLRs介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)信號(hào)通路及其藥物作用[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2005年06期

5 葉樂(lè)平;李昌崇;李紹波;范小芳;胡曉光;張維溪;李孟榮;;信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子6及其mRNA在哮喘大鼠氣道炎癥中的作用[J];中國(guó)病理生理雜志;2006年01期

6 劉瑾;陳俊文;徐永健;熊維寧;白晶;謝敏;崔江禹;鄭海茹;許淑云;;磷脂酰肌醇3激酶在支氣管哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞中的表達(dá)[J];中國(guó)病理生理雜志;2008年04期

7 徐妍;張煥萍;;TNF-α對(duì)哮喘模型大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖及ERK1/2活性的影響[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2009年07期

8 羅雅玲,賴文巖,徐健;人氣管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)[J];中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志;2002年02期

9 許淑云,徐永健,張珍祥,倪望,陳士新;核因子KB在被動(dòng)致敏的人氣道平滑肌細(xì)胞增殖中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用[J];中華內(nèi)科雜志;2004年12期

10 邵潔,王愚珍,李云珠,俞善昌,鄧偉吾;人氣道平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)與被動(dòng)致敏后的生物學(xué)特征[J];中國(guó)實(shí)用兒科雜志;2005年09期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張雅琴;減毒活菌卡介苗對(duì)支氣管哮喘小鼠Toll樣受體4表達(dá)和細(xì)胞因子水平的影響[D];江蘇大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2738415