發(fā)布時(shí)間：2020-07-02 17:19

【摘要】： 矽肺是因長(zhǎng)期吸入大量含游離二氧化硅(SiO2)的粉塵而導(dǎo)致的以肺間質(zhì)膠原沉積為特征的職業(yè)病,據(jù)我國(guó)第十屆職業(yè)性呼吸系統(tǒng)疾病國(guó)際會(huì)議(10th ICORD)新聞發(fā)布會(huì)公布的數(shù)字:塵肺病發(fā)病數(shù)占2003年全國(guó)報(bào)告各類職業(yè)病發(fā)病數(shù)的80%,矽肺所致的直接經(jīng)濟(jì)損失超過(guò)90億元。近年來(lái)矽肺病的流行呈現(xiàn)出群發(fā)性、低齡化以及致殘率高的新特點(diǎn),這給矽肺的防治工作帶來(lái)了新的挑戰(zhàn)。目前發(fā)現(xiàn)肺臟特異性的KL-6、cc-16、表面活性蛋白家族蛋白,以及細(xì)胞外基質(zhì)在矽塵暴露后有顯著的變化,但作為診斷指標(biāo)仍存在敏感性、特異性不足等缺點(diǎn),不同類型的肺間質(zhì)病之間這些指標(biāo)重疊較大;而支氣管肺泡灌洗液的化學(xué)及細(xì)胞學(xué)檢查僅能補(bǔ)充或排除影像學(xué)診斷。運(yùn)用新技術(shù)手段篩選高特異性、敏感性的標(biāo)志物將對(duì)矽肺的防治起重要的推動(dòng)。表面激光增強(qiáng)解吸離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜(SELDI-TOF-MS)技術(shù)的檢測(cè)靈敏度可達(dá)匹克級(jí),其與蛋白診斷指紋理論的結(jié)合在腫瘤、感染性疾病的診斷、生物標(biāo)記物與藥物靶點(diǎn)篩選,病理生理機(jī)制闡述等領(lǐng)域已有較多的文獻(xiàn)報(bào)道,本研究采用SELDI-TOF-MS技術(shù)篩選矽肺大鼠模型的血清生物標(biāo)志物,建立診斷指紋判別模型并探討其應(yīng)用價(jià)值。 研究目的 應(yīng)用表面增強(qiáng)激光解吸離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù),篩選大鼠矽肺模型早期診斷血清生物標(biāo)志物,并建立矽肺早期診斷(篩檢)的血清蛋白指紋。 研究方法 本研究采用清潔級(jí)Wistar大鼠128只,體重200-240克。隨機(jī)將大鼠分為對(duì)照組、染矽塵組。染矽塵組采用氣管暴露法每只大鼠氣管內(nèi)注入濃度為50mg/ml的矽塵混懸液1ml,對(duì)照組注入0.9%NaCl注射液。分別在7d、14d、28d、60d自腹主靜脈取血并分離血清、處死大鼠取肺臟器標(biāo)本。以HE染色觀察大鼠肺組織矽結(jié)節(jié),用組織芯片儀制作組織芯片微陣列,以天狼猩紅染色法結(jié)合偏振光顯微鏡觀察Ⅰ、Ⅲ型膠原,用Image-Pro Plus Version 4.5 for windowsTM圖象分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析膠原含量;以SELDI-TOF-MS技術(shù)檢測(cè)矽肺纖維化模型大鼠在CM10芯片上的血清蛋白指紋圖譜,以Ciphergen公司專用生物軟件分析處理質(zhì)譜數(shù)據(jù),篩選出潛在生物標(biāo)志物并建立矽肺纖維化模型大鼠的分類樹狀圖。 研究結(jié)果: 染矽塵組大鼠各時(shí)間點(diǎn)肺組織臟器系數(shù)均高于對(duì)照組,在14d、28d、60 d有顯著性差異(P0.01)。與對(duì)照組比較,Ⅰ型膠原呈直線上升趨勢(shì),在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有顯著性差異(P0.05),而Ⅲ型膠原僅在7d、14d時(shí)有顯著性差異(P0.05),在28d后上升陡然趨緩。 14d時(shí),分子量為4968.66 Da的蛋白或多肽在染矽塵模型組達(dá)到高峰,隨后漸降,在28 d與60 d時(shí)與對(duì)照組沒有顯著差異,而該蛋白在對(duì)照組則始終在基線上下漂移,該蛋白具有指示早期矽塵刺激后的炎癥反應(yīng)性能;分子量為9511.19 Da、9312.29 Da蛋白或多肽是28 d后模型組出現(xiàn)的升高峰,在染矽塵大鼠模型組呈漸增趨勢(shì),而在對(duì)照組始終維持在基線水平,與Ⅰ型膠原在染矽塵大鼠肺切片表達(dá)含量呈顯著相關(guān),是反映進(jìn)行性肺纖維化的潛在生物標(biāo)志物。用對(duì)照組和染矽塵大鼠模型組28 d、60 d的樣本作為學(xué)習(xí)樣本,作二分類診斷樹圖分析,診斷模型的敏感性與特異性分別為100%、83.33%;采用交叉驗(yàn)證策略驗(yàn)證的特異性與敏感性分別為81.26%和95%。 研究結(jié)論 矽肺纖維化模型大鼠血清中4968.66 Da的蛋白或多肽展現(xiàn)了矽塵刺激后的早期炎癥反應(yīng),而9511.19 Da和9312.29 Da的蛋白或多肽則具有指示進(jìn)行性肺纖維化的作用,對(duì)這些蛋白身份鑒定與功能研究并應(yīng)用于人類矽肺研究,將加速矽肺早期診斷方法的發(fā)展與病理生理機(jī)制的理解。大鼠血清蛋白指紋分類樹狀圖對(duì)診斷分類具有良好的敏感性與特異性。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R135.2
【圖文】：

圖 1 組織芯片微陣列圖Fig . 1 . The tissue microarray for immunotissuechemistry staining2.2 不同時(shí)間點(diǎn)大鼠肺組織標(biāo)本肉眼觀與大鼠肺系數(shù)的變對(duì)照組，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)雙肺組織呈粉紅色，灌洗時(shí)彈性回縮良好。染7d 時(shí)，雙肺彌漫性出血、腫脹，以左下、右上肺較為嚴(yán)重，切面有泡沫出。14d 時(shí)，雙肺海綿樣改變，肺包膜緊張，體積增大，有片狀出血。2可見較大的不規(guī)則形結(jié)節(jié)，肺組織硬度增加，灌洗時(shí)彈性減弱。60d 時(shí)結(jié)肺表面，并有融合病灶，肺組織硬度進(jìn)一步增加。如表 1 所示，染矽塵組大鼠各時(shí)間點(diǎn)肺組織臟器系數(shù)均高于對(duì)照組性差異（P＜0.01）。表 1 對(duì)照組與染矽塵大鼠模型組不同時(shí)間點(diǎn)肺系數(shù)比較（ x ±S）Tab 1. The lung coefficient on four time-point between model and control gr7d 14d 28d 60對(duì)照組 6.61±0.87 6.06±1.22 6.86±0.42 5.26±

肺泡隔仍有較多的淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及少數(shù)中性粒細(xì)胞侵潤(rùn)，伴有較多的成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞增生并平行排列，肺泡壁增厚，可見膠原纖維積聚，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，出現(xiàn)斑片狀纖維化。細(xì)胞結(jié)節(jié)數(shù)量多，體積大。28d 時(shí)，肺泡壁顯著增厚，肺泡結(jié)構(gòu)大部遭到破壞，部分肺泡腔消失，由膠原纖維和成纖維細(xì)胞占據(jù)，肺組織廣泛纖維化，可見纖維性結(jié)節(jié)。60d 時(shí)纖維組織明顯增生，形成巨大的纖維性矽結(jié)節(jié)。表明大鼠的矽肺模型建立成功（見圖 2）。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 尹輝;劉奉朝;;SELDI-TOF-MS技術(shù)在檢測(cè)乳腺癌腫瘤標(biāo)志物中的應(yīng)用[J];醫(yī)療衛(wèi)生裝備;2007年01期

2 王開正;姜偉;白克鎮(zhèn);鄧劍;蔡美珠;;精神分裂癥患者血清中發(fā)現(xiàn)特征蛋白[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年02期

3 韓娟;戴淑真;王斌;徐冰;劉海霞;;子宮內(nèi)膜癌患者的血清蛋白質(zhì)譜分析[J];中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志;2006年08期

4 劉池波;梁勇;陳晉廣;潘春琴;燕東亮;王海寶;周開宇;;SELDI-TOF-MS技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2010年01期

5 劉池波;梁勇;;蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在胃癌診斷中的應(yīng)用及臨床意義[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2007年11期

6 陳勝;胡艷紅;祁明信;丁媛;;SELDI-TOF-MS聯(lián)合蛋白質(zhì)芯片技術(shù)在病理性近視早期診斷中的應(yīng)用[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年05期

7 張妍;劉華林;王斌;錢冬萌;閆志勇;丁守怡;宋旭霞;宋廣輝;;利用SELDI-TOF-MS技術(shù)研究巨細(xì)胞病毒感染致嬰兒肝炎綜合征的血清蛋白標(biāo)志物[J];世界華人消化雜志;2005年21期

8 余家密;陳強(qiáng);葉韻斌;;SELDI蛋白芯片技術(shù)在腫瘤早期診斷中研究進(jìn)展[J];中國(guó)腫瘤;2007年06期

9 葉能勝;何為;許丹科;;多壁碳納米管對(duì)質(zhì)譜分析中的血清蛋白富集作用研究[J];分析試驗(yàn)室;2008年03期

10 盧秀波;王利;王家祥;婁衛(wèi)華;余捷凱;鄭樹;;血清蛋白質(zhì)指紋圖譜在甲狀腺癌診斷中的應(yīng)用[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2006年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 許艷紅;王文靜;羅全勇;;血清SELDI-TOF-MS技術(shù)篩選乳頭狀甲狀腺癌肺轉(zhuǎn)移灶~(131)I攝取功能的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)核醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2011年

2 劉村;陶國(guó)偉;董召剛;馬U

本文編號(hào)：2738466