發(fā)布時(shí)間：2020-07-01 18:25

【摘要】：研究背景及目的 日常生活和臨床工作中常見飲食因素可誘發(fā)或加重咳嗽的現(xiàn)象,其中是否存在科學(xué)根據(jù)尚不明確。近年來研究發(fā)現(xiàn)酸刺激食管可以誘導(dǎo)氣道神經(jīng)源性炎癥,這一過程主要是通過非腎上腺素能非膽堿能神經(jīng)(nonadrenergic noncholinergic, NANC)通路及其神經(jīng)肽介導(dǎo)的,涉及的神經(jīng)肽主要為P物質(zhì)(Substance P, SP)等。研究表明食管與氣管之間存在迷走神經(jīng)介導(dǎo)的食管-支氣管反射通路。除了酸刺激,目前國(guó)內(nèi)外未見其他理化因素刺激食管對(duì)氣道炎癥影響的相關(guān)報(bào)道。本研究通過給豚鼠食管單次灌注不同理化性質(zhì)溶液,觀察其對(duì)氣道炎癥的影響,并探討食管-支氣管反射及其相關(guān)的氣道神經(jīng)源性炎癥的作用。 結(jié)果 1.冷、熱和乙醇溶液灌注豚鼠食管可以誘導(dǎo)氣道的血漿滲出,神經(jīng)內(nèi)肽酶抑制劑磷阿米酮顯著增加熱刺激食管誘導(dǎo)的氣道血漿滲出,SP受體拮抗劑FK888顯著抑制冷、熱和乙醇刺激食管誘導(dǎo)的氣道血漿滲出。 2.冷、熱和乙醇溶液灌注豚鼠食管引起氣道SP釋放增加,神經(jīng)內(nèi)肽酶抑制劑磷阿米酮顯著增加熱刺激食管引起的SP釋放,SP受體拮抗劑FK888顯著抑制冷、熱和乙醇刺激食管引起的SP釋放。表明冷、熱和乙醇刺激食管誘導(dǎo)氣道血漿滲出,與氣道神經(jīng)源性炎癥有關(guān),涉及SP釋放。 3.阻斷膽堿能和腎上腺素能神經(jīng)后,氣道血漿滲出和SP釋放并無顯著變化。同時(shí)證實(shí)NANC通路在介導(dǎo)冷、熱和乙醇刺激食管誘導(dǎo)氣道血漿滲出和SP釋放中發(fā)揮重要作用。 4.在雙側(cè)迷走神經(jīng)切斷后,冷、熱和乙醇刺激組氣道血漿滲出和SP釋放均被顯著抑制,提示迷走神經(jīng)在冷、熱和乙醇刺激食管誘導(dǎo)氣道血漿滲出和SP釋放中起重要作用。 結(jié)論 冷、熱和乙醇刺激食管可以誘導(dǎo)氣道血漿滲出及SP釋放,氣道的神經(jīng)源性炎癥是由NANC通路介導(dǎo),迷走神經(jīng)發(fā)揮重要作用。 第一部分不同理化性質(zhì)溶液灌注食管對(duì)氣道炎癥的影響 分題一食管灌注對(duì)氣道血漿滲出的影響目的:建立單次持續(xù)灌注食管的模型,觀察不同理化性質(zhì)溶液刺激豚鼠食管是否誘導(dǎo)氣道血漿滲出。 分組與方法: 1.分組:根據(jù)灌注液性質(zhì),將Hartley白化豚鼠分為5組:①空白組;②對(duì)照組(37℃NS);③冷刺激組(4℃NS);④熱刺激組(60℃NS);⑤乙醇刺激組(40%乙醇)。根據(jù)SP受體拮抗劑FK888和神經(jīng)內(nèi)肽酶抑制劑Phosphoramidon(磷阿米酮,PHOS)干預(yù),分為4組:⑥冷刺激+FK888拮抗劑組;⑦熱刺激+FK888拮抗劑組;⑧熱刺激+Phosphoramidon組;⑨乙醇刺激+FK888拮抗劑組。 2.實(shí)驗(yàn)方法:豚鼠食管持續(xù)灌注不同理化性質(zhì)溶液(1ml/min, 20min),食管灌注前注射阿托品及心得安分別阻斷膽堿能及腎上腺素能神經(jīng)通路,分別觀察氣管、主支氣管和細(xì)支氣管的血漿滲出,氣道血漿滲出采用伊文思藍(lán)(Evans Blue)法檢測(cè),并觀察分別應(yīng)用神經(jīng)內(nèi)肽酶抑制劑、SP受體拮抗劑對(duì)食管理化刺激誘導(dǎo)氣道血漿滲出的影響。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用單因素方差分析(ANOVA),SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。 結(jié)果 1.冷生理鹽水、熱生理鹽水及乙醇分別刺激食管均可顯著增加氣管、主支氣管和細(xì)支氣管的血漿滲出水平,與對(duì)照組各部位伊文思藍(lán)含量:[(12.52±3.86)pg/mg, (9.77±4.99)pg/mg, (11.39±3.99)pg/mg]比較;冷刺激組分別為:[(20.00±6.38)pg/mg, (18.43±7.60)pg/mg, (20.11±7.49)pg/mg, P均0.05];熱刺激組分別為[(27.152±4.72)pg/mg, P0.001, (23.33±4.02)pg/mg, P0.05, (28.95±5.13)pg/mg, P0.05)];乙醇刺激組分別為:[(21.91±5.97)pg/mg, P0.001, (19.54±4.96)pg/mg, P0.05, (20.86±5.90)pg/mg, P0.05)]。 2.與熱刺激組比較,神經(jīng)內(nèi)肽酶抑制劑磷阿米酮可以顯著增加熱生理鹽水灌注食管引起的氣管、主支氣管、細(xì)支氣管血漿滲出,熱刺激+PHOS組各部位伊文思藍(lán)含量分別為: [(137.71±52.54)pg/mg, (88.48±33.22)pg/mg, (58.82±36.37)pg/mg,氣管、主支氣管P均0.001,細(xì)支氣管P0.05]。 3.與各單純刺激組比較,SP受體拮抗劑FK888可以顯著抑制冷、熱和乙醇刺激誘導(dǎo)的氣管和主支氣管血漿滲出:冷刺激+FK888組分別為:[(12.04±3.65)pg/mg和(11.50±2.57)pg/mg, P均0.01] ;熱刺激+FK888組:[(18.86±5.45)pg/mg和(14.3±2.54)pg/mg, P均0.05];乙醇刺激+FK888組:[(13.2±3.33)pg/mg和(9.35±4.42)pg/mg, P均0.05]。細(xì)支氣管P均0.05。 結(jié)論:冷、熱和乙醇溶液灌注豚鼠食管可以誘導(dǎo)氣道的血漿滲出,神經(jīng)內(nèi)肽酶抑制劑顯著增加熱刺激食管誘導(dǎo)氣道血漿滲出,SP受體拮抗劑顯著抑制冷、熱、乙醇刺激食管誘導(dǎo)的氣道血漿滲出,提示該刺激效應(yīng)可能與氣道神經(jīng)肽的釋放相關(guān)。 分題二食管灌注對(duì)氣道SP含量的影響 目的:觀察不同理化性質(zhì)溶液刺激食管時(shí)氣道P物質(zhì)(SP)含量的變化,進(jìn)一步探討刺激效應(yīng)與神經(jīng)源性炎癥的關(guān)系。 方法:動(dòng)物模型同第一部分分題一,采用ELISA方法檢測(cè)各組右主支氣管的SP含量。 結(jié)果 1.與對(duì)照組主支氣管SP含量: [(8.69±2.21)pg/mg]比較,冷刺激組[(14.90±2.57)pg/mg, P0.05];熱刺激組[(15.10±1.61)pg/mg, P0.001];乙醇刺激組[(16.04±4.57)pg/mg, P0.001]均顯著提高,冷生理鹽水、熱生理鹽水及乙醇分別刺激食管均可顯著增加主支氣管SP釋放, 2.與熱刺激比較,神經(jīng)內(nèi)肽酶抑制劑phosphoramidon可以顯著增加熱生理鹽水灌注食管引起主支氣管SP釋放( 20.41±2.83, P 0.05)。 3.與各單純刺激組比較,SP受體拮抗劑FK888可以顯著抑制冷、熱和乙醇誘導(dǎo)的主支氣管SP釋放增多:冷刺激組為[(8.65±3.55)pg/mg, P0.01];熱刺激組[(10.66±2.54)pg/mg, P0.05];乙醇刺激組[(9.81±2.94)pg/mg, P0.05]。 結(jié)論:冷、熱生理鹽水和乙醇灌注食管引起的氣道血漿滲出增多,與氣道SP釋放增加引起的神經(jīng)源性炎癥有關(guān)。 第二部分不同理化性質(zhì)溶液灌注食管誘導(dǎo)氣道炎癥的機(jī)制探討 分題一非腎上腺素能非膽堿能通路在氣道炎癥中的作用 目的:通過觀察阻斷膽堿能和腎上腺素能神經(jīng)通路和未阻斷這兩條通路時(shí)各刺激組氣道血漿滲出和SP含量變化,明確非腎上腺素能非膽堿能通路在不同理化性質(zhì)溶液灌注食管誘導(dǎo)氣道炎癥中的作用。 分組與方法: 1.分組:根據(jù)是否阻斷膽堿能和腎上腺素能通路分為7組:①對(duì)照組(37℃NS);②冷刺激組(4℃NS);③熱刺激組(60℃NS);④乙醇刺激組(40%乙醇),⑤冷刺激+阿托品+心得安組(4℃NS);⑥熱刺激+阿托品+心得安組(60℃NS);⑦乙醇刺激+阿托品+心得安組(40%乙醇)。 2.實(shí)驗(yàn)方法:動(dòng)物模型同上。 結(jié)果: 1.與對(duì)照組相比較,未阻斷與阻斷膽堿能和腎上腺素能神經(jīng)通路的冷、熱和乙醇刺激組氣道血漿滲出顯著增加,氣管、主支氣管和細(xì)支氣管伊文思藍(lán)含量分別為:對(duì)照組[(12.52±3.86)pg/mg, (9.77±4.99)pg/mg, (11.39±3.99)pg/mg];冷刺激組:[(21.31±6.73)pg/mg, (17.6±3.01)pg/mg, (27.14±7.54)pg/mg, P均0.05];熱刺激組:[(27.89±13.61)pg/mg, (22.81±7.85)pg/mg, (27.01±10.26)pg/mg, P均0.05] ;乙醇刺激組: [(23.72±6.65)pg/mg, (20.56±3.22)pg/mg, (33.5±14.34)pg/mg, P均0.05)]。應(yīng)用阿托品和心得安的冷、熱和乙醇刺激組伊文思藍(lán)含量見第一部分分題一。 2.與對(duì)照組相比較,未阻斷以及阻斷膽堿能和腎上腺素能神經(jīng)通路的冷、熱和乙醇刺激組主支氣管SP含量均顯著增加,SP含量分別為:對(duì)照組[(8.69±2.21)pg/mg];冷刺激組:[(15.41±2.83)pg/mg, P0.05];熱刺激組:[(13.70±1.22)pg/mg, P0.05];乙醇刺激組:[(15.35±3.19)pg/mg, P0.05)]。應(yīng)用阿托品和心得安的冷、熱和乙醇刺激組SP含量見第一部分分題二。 3.應(yīng)用阿托品和心得安的冷、熱和乙醇刺激組與未干預(yù)組氣管、主支氣管及細(xì)支氣管氣道血漿滲出無顯著差異,各刺激組P均0.05;同時(shí)主支氣管的SP含量組間亦無顯著差異,P均0.05。 結(jié)論:冷、熱和乙醇刺激豚鼠食管誘導(dǎo)氣道血漿滲出和SP釋放與膽堿能和腎上腺素能神經(jīng)通路無關(guān),氣道的神經(jīng)源性炎癥由非腎上腺素能非膽堿能通路介導(dǎo)。 分題二迷走神經(jīng)在氣道炎癥中的作用 目的:通過切斷豚鼠雙側(cè)迷走神經(jīng),觀察迷走神經(jīng)在不同理化性質(zhì)溶液灌注食管誘導(dǎo)氣道炎癥中的作用。 分組與方法: 1.分組:總共分為7組:①對(duì)照組(37℃NS);②冷刺激組(4℃NS);③熱刺激組(60℃NS);④乙醇刺激組(40%乙醇);⑤冷刺激+迷切組(4℃NS);⑥熱刺激+迷切組(60℃NS);⑦乙醇刺激+迷切組(40%乙醇)。 2.動(dòng)物模型同上,依分組需要食管灌注前5min切斷雙側(cè)迷走神經(jīng)。 結(jié)果: 1.與單純刺激組比較(分布見第一部分),迷走神經(jīng)切斷后各刺激組氣管、主支氣管和細(xì)支氣管伊文思藍(lán)含量分別為:冷刺激組[(11.62±6.01)pg/mg, (11.20±5.92)pg/mg, (33.65±14.84)pg/mg,氣管和主支氣管P均0.05,細(xì)支氣管P0.05];熱刺激組[(20.25±2.09)pg/mg, (13.75±4.14)pg/mg, (20.12±8.08)pg/mg, P均0.05] ;乙醇刺激組[(13.41±5.60)pg/mg, (11.57±6.11)pg/mg, (22.52±7.77)pg/mg,氣管和主支氣管P均0.05,細(xì)支氣管P0.05]。 2.與單純刺激組比較(分布見第一部分),迷走神經(jīng)切斷后各刺激組主支氣管SP含量分別為:冷刺激組: [(8.09±1.49)pg/mg, P0.05] ;熱刺激組[(5.26±2.00)pg/mg, P 0.05];乙醇刺激組[(9.05±1.93)pg/mg, P0.05)]。 結(jié)論:迷走神經(jīng)在冷、熱和乙醇刺激豚鼠食管誘導(dǎo)氣道炎癥中發(fā)揮著重要作用,進(jìn)一步證實(shí)了非腎上腺素能非膽堿能通路的作用。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R562

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉春麗;賴克方;陳如沖;羅煒;姚衛(wèi)民;鐘南山;;迷走神經(jīng)在鹽酸灌注食管誘導(dǎo)的氣道神經(jīng)源性炎癥中的作用[J];廣東醫(yī)學(xué);2007年07期

2 王昭金,王延清;VR1受體在大鼠食管傳入纖維的表達(dá)[J];解剖學(xué)報(bào);2005年06期

3 Edward WINNER;張靜文;Mary PROCTOR;於峻;;哇巴因刺激肺慢適應(yīng)感受器(英文)[J];生理學(xué)報(bào);2005年06期

4 劉春麗;賴克方;陳如沖;羅煒;姚衛(wèi)民;鐘南山;;鹽酸灌注豚鼠食管誘導(dǎo)氣道血管微滲漏和神經(jīng)源性炎癥[J];中華哮喘雜志(電子版);2007年02期

本文編號(hào)：2737116