發(fā)布時間：2020-07-01 16:28

【摘要】： 研究背景及目的 支氣管哮喘(哮喘)是一種復雜的多基因疾病,具有明顯的遺傳傾向,呈家族聚集性,它的發(fā)生、發(fā)展由患者遺傳易感性和環(huán)境暴露相互作用所決定。目前國內(nèi)外對哮喘已經(jīng)進行了大量的研究,越來越多的研究者致力于該疾病的遺傳病因?qū)W研究,到目前為止已有大量研究試圖探查哮喘人群的易感基因,希望通過對哮喘易感基因的確定幫助人們更好的了解哮喘的病理發(fā)生,同時也為尋找有效的哮喘治療方案提供線索。ADAM 33(A disintegrin andmetalloproteinase33)基因單核甘酸多態(tài)性(singlenucleotide polymorphisms,SNPs)是近年來研究的較多的一個熱點。ADAM33蛋白最初在細胞膜上發(fā)現(xiàn),是一種膜錨定金屬蛋白水解酶,由于他們具有解整合素結(jié)構(gòu)域和金屬蛋白酶結(jié)構(gòu)域兩個功能區(qū),因而稱為解整合素一金屬蛋白酶。單核甘酸多態(tài)性是由基因組核苷酸水平上的變異引起的DNA序列多態(tài)性,包括單個堿基的轉(zhuǎn)換、顛倒及單個堿基的缺失和插入。2002年Van Eerdewegh等對來自于美國和英國的460個哮喘家系進行了全基因掃描,確定染色體20p13上存在著與哮喘及氣道高反應(yīng)性(airwayhyperresponsiveness,AHR)密切相關(guān)的候選基因。隨后他們應(yīng)用相關(guān)分析法對這一區(qū)域的23個基因的135個SNPs進行了分析,發(fā)現(xiàn)了有3個基因的24個SNPs與哮喘和AHR相關(guān),而其中有14個SNPs位于ADAM33基因上,且主要相關(guān)的SNPs位于ADAM33基因的3′端,因此確定ADAM33基因是與哮喘和A HR相關(guān)的易感基因。從遺傳學角度來說,遺傳具有種族特異性。在不同種族中,同一個SNP分布頻率不同,且對哮喘的影響也不盡相同。已有許多研究者通過病例對照分析,單體型分析及家系資料傳遞不平衡檢驗(TDT)等方法,探討了ADAM33基因SNPs與哮喘易感性、病情嚴重程度、肺功能、變應(yīng)性體質(zhì)等各方面的關(guān)聯(lián),得出的結(jié)果不全部相同,并未見某種SNP位點在所有種族均有相關(guān)性的報道。ADAM33基因的功能和作用目前還不十分清楚,但根據(jù)它在間質(zhì)細胞的選擇性表達,其活性的改變必然導致氣道平滑肌細胞和成纖維細胞功能的異常,因此推測與AHR和氣道重塑有關(guān)。 人類ADAM33基因內(nèi)部共有179個SNP位點,其中25個位于編碼區(qū)(5個為同義突變,20個為無義突變),該基因多態(tài)性與中國漢族人群的哮喘相關(guān)性報道較少,本研究采用病例對照研究方法,以中國漢族人群正常個體和哮喘患者為研究對象,采用直接測序的方法探討ADAM33基因多態(tài)性與中國漢族人群的哮喘之間的相關(guān)性。 材料與方法 根據(jù)中華醫(yī)學會呼吸病分會哮喘學組制定的哮喘診斷標準,在我院門診和住院部隨機收集了186份臨床診斷為哮喘的病例外周血作為哮喘組,150例健康體檢者的外周血作為正常對照組。其中哮喘組男性95人,女性91人,平均年齡47.78歲;有71名患者進行過肺功能檢查;在186名患者中有159人外周血EOS升高,并有過敏性鼻炎病史。對照組中男性78人,女性72人,平均年齡41.92歲。經(jīng)詢問和查體確認健康體檢者沒有哮喘類癥狀,如突然發(fā)作性氣喘,呼吸困難或長期慢性咳嗽等。所有研究對象均知情同意。兩組研究對象均為中國漢族人群,經(jīng)比較兩組對象年齡、性別均無顯著性差異。提取外周血DNA作研究對象,用PCR擴增ADAM33基因的兩個SNP位點(S2、T2)后進行直接測序。通過SPSS13.0計算,兩樣本均數(shù)的比較采用t檢驗,遺傳H-W平衡定律檢驗根據(jù)遺傳公式計算,組間等位基因型或等位基因的比較采用χ2檢驗,不同病情嚴重程度之間采用非參數(shù)檢驗,肺功能之間比較采用方差分析;用單變量logistic回歸分析SNPs與哮喘的相對危險度,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果 1、哮喘組和對照組年齡之間比較采用t檢驗,t值為0.486,P值為0.627,結(jié)果如表1所示,兩組之間年齡無顯著性差異。 2、哮喘組和對照組性別之間的比較采用X2檢驗,X2值為0.028,P值為0.866,結(jié)果如表2所示,兩組之間性別無顯著性差異。 3、ADAM33基因T2位點CC、CT、TT基因型在哮喘組的分布頻數(shù)分別為139、47、0。根據(jù)Hardy-weinberg平衡檢驗公式X2=(O-C)2/C計算X2值為3.74,P值大于0.05,基因型分布符合Hardy-weinberg平衡定律。同理計算S2位點X2值為2.01,P值大于0.05,基因型分布符合Hardy-weinberg平衡定律,結(jié)果見表3。在對照組中分別對T2、S2位點根據(jù)Hardy-weinberg平衡檢驗公式X2=(O-C)2/C計算X2值分別為0.998和1.43,P值均大于0.05,結(jié)果見表4,基因型分布也符合Hardy-weinberg平衡定律,說明兩樣本具有很好的均衡性。 4、對T2位點,未檢測到TT基因型,主要的原因可能是樣本量不足。病例組和對照組中,等位基因T的頻率分別為12.6%和7.6%,見表12,經(jīng)X2檢驗P=0.026,見表5;對S2位點,病例組和對照組中,等位基因C的頻率分別為24.8%和16.3%,見表12,經(jīng)X2檢驗P=0.021,見表5。說明兩SNP位點病例組和對照組的基因型構(gòu)成差別有統(tǒng)計學意義,表明T2,S2位點SNPs與哮喘易感性有關(guān)。 5、根據(jù)病情嚴重程度把哮喘患者分為輕、中、重3組,經(jīng)非參數(shù)檢驗分析,T2位點Z值為-0.13,P=0.897,見表6;S2位點X2值為0.419,P=0.811,見表7。結(jié)果表明T2,S2位點多態(tài)性與哮喘病情嚴重度無統(tǒng)計學相關(guān)。 6、通過logistic回歸計算兩位點單核甘酸多態(tài)性對哮喘的相對危險度,T2位點的OR值為1.867,P值為0.027;S2位點的OR值為0.444,P值為0.024;結(jié)果如表8所示,說明兩SNPs位點能顯著增加哮喘發(fā)生的危險性。 7、根據(jù)患者的外周血常規(guī)檢測和詢問有無使用藥物史,把患者分為EOS增高和EOS不增高兩組,通過X2檢驗分析2組對象的基因型構(gòu)成,T2位點X2=2.316,P=0.128;S2位點X2=4.404,P=0.111;結(jié)果表明兩SNPs位點基因型構(gòu)成與EOS改變無統(tǒng)計學關(guān)聯(lián),單核甘酸多態(tài)性不能影響EOS。 8、方差分析計算基因型構(gòu)成和肺功能指標FEV1實/預、FEV1/FVC和FVC實/預的關(guān)聯(lián),T2位點的P值分別為0.432,0.546,0.538;S2位點的P值分別為0.640,0.427,0.738,表明T2,S2位點的SNPs與肺功能指標無顯著相關(guān)性。 結(jié)論 被檢測的ADAM33基因的T2,S2位點SNPs與中國漢族人群支氣管哮喘的易感性有顯著相關(guān)性,罕見等位基因能增加哮喘發(fā)生的危險,但與變應(yīng)性體質(zhì)和肺功能沒有顯著相關(guān)性。今后的工作將通過進一步擴大病例數(shù)和選取更多的位點來探討ADAM33基因單核甘酸多態(tài)性與中國漢族人群支氣管哮喘的關(guān)聯(lián)和在哮喘發(fā)病機制中的作用。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R562.25

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 揭志軍,蔡映云;一種新的哮喘易感基因——ADAM33基因[J];國外醫(yī)學.呼吸系統(tǒng)分冊;2005年09期

本文編號：2737006