【摘要】： 研究背景及目的 支氣管哮喘(哮喘)是一種復(fù)雜的多基因疾病,具有明顯的遺傳傾向,呈家族聚集性,它的發(fā)生、發(fā)展由患者遺傳易感性和環(huán)境暴露相互作用所決定。目前國內(nèi)外對(duì)哮喘已經(jīng)進(jìn)行了大量的研究,越來越多的研究者致力于該疾病的遺傳病因?qū)W研究,到目前為止已有大量研究試圖探查哮喘人群的易感基因,希望通過對(duì)哮喘易感基因的確定幫助人們更好的了解哮喘的病理發(fā)生,同時(shí)也為尋找有效的哮喘治療方案提供線索。ADAM 33(A disintegrin andmetalloproteinase33)基因單核甘酸多態(tài)性(singlenucleotide polymorphisms,SNPs)是近年來研究的較多的一個(gè)熱點(diǎn)。ADAM33蛋白最初在細(xì)胞膜上發(fā)現(xiàn),是一種膜錨定金屬蛋白水解酶,由于他們具有解整合素結(jié)構(gòu)域和金屬蛋白酶結(jié)構(gòu)域兩個(gè)功能區(qū),因而稱為解整合素一金屬蛋白酶。單核甘酸多態(tài)性是由基因組核苷酸水平上的變異引起的DNA序列多態(tài)性,包括單個(gè)堿基的轉(zhuǎn)換、顛倒及單個(gè)堿基的缺失和插入。2002年Van Eerdewegh等對(duì)來自于美國和英國的460個(gè)哮喘家系進(jìn)行了全基因掃描,確定染色體20p13上存在著與哮喘及氣道高反應(yīng)性(airwayhyperresponsiveness,AHR)密切相關(guān)的候選基因。隨后他們應(yīng)用相關(guān)分析法對(duì)這一區(qū)域的23個(gè)基因的135個(gè)SNPs進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)了有3個(gè)基因的24個(gè)SNPs與哮喘和AHR相關(guān),而其中有14個(gè)SNPs位于ADAM33基因上,且主要相關(guān)的SNPs位于ADAM33基因的3′端,因此確定ADAM33基因是與哮喘和A HR相關(guān)的易感基因。從遺傳學(xué)角度來說,遺傳具有種族特異性。在不同種族中,同一個(gè)SNP分布頻率不同,且對(duì)哮喘的影響也不盡相同。已有許多研究者通過病例對(duì)照分析,單體型分析及家系資料傳遞不平衡檢驗(yàn)(TDT)等方法,探討了ADAM33基因SNPs與哮喘易感性、病情嚴(yán)重程度、肺功能、變應(yīng)性體質(zhì)等各方面的關(guān)聯(lián),得出的結(jié)果不全部相同,并未見某種SNP位點(diǎn)在所有種族均有相關(guān)性的報(bào)道。ADAM33基因的功能和作用目前還不十分清楚,但根據(jù)它在間質(zhì)細(xì)胞的選擇性表達(dá),其活性的改變必然導(dǎo)致氣道平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞功能的異常,因此推測(cè)與AHR和氣道重塑有關(guān)。 人類ADAM33基因內(nèi)部共有179個(gè)SNP位點(diǎn),其中25個(gè)位于編碼區(qū)(5個(gè)為同義突變,20個(gè)為無義突變),該基因多態(tài)性與中國漢族人群的哮喘相關(guān)性報(bào)道較少,本研究采用病例對(duì)照研究方法,以中國漢族人群正常個(gè)體和哮喘患者為研究對(duì)象,采用直接測(cè)序的方法探討ADAM33基因多態(tài)性與中國漢族人群的哮喘之間的相關(guān)性。 材料與方法 根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病分會(huì)哮喘學(xué)組制定的哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn),在我院門診和住院部隨機(jī)收集了186份臨床診斷為哮喘的病例外周血作為哮喘組,150例健康體檢者的外周血作為正常對(duì)照組。其中哮喘組男性95人,女性91人,平均年齡47.78歲;有71名患者進(jìn)行過肺功能檢查;在186名患者中有159人外周血EOS升高,并有過敏性鼻炎病史。對(duì)照組中男性78人,女性72人,平均年齡41.92歲。經(jīng)詢問和查體確認(rèn)健康體檢者沒有哮喘類癥狀,如突然發(fā)作性氣喘,呼吸困難或長期慢性咳嗽等。所有研究對(duì)象均知情同意。兩組研究對(duì)象均為中國漢族人群,經(jīng)比較兩組對(duì)象年齡、性別均無顯著性差異。提取外周血DNA作研究對(duì)象,用PCR擴(kuò)增ADAM33基因的兩個(gè)SNP位點(diǎn)(S2、T2)后進(jìn)行直接測(cè)序。通過SPSS13.0計(jì)算,兩樣本均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn),遺傳H-W平衡定律檢驗(yàn)根據(jù)遺傳公式計(jì)算,組間等位基因型或等位基因的比較采用χ2檢驗(yàn),不同病情嚴(yán)重程度之間采用非參數(shù)檢驗(yàn),肺功能之間比較采用方差分析;用單變量logistic回歸分析SNPs與哮喘的相對(duì)危險(xiǎn)度,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1、哮喘組和對(duì)照組年齡之間比較采用t檢驗(yàn),t值為0.486,P值為0.627,結(jié)果如表1所示,兩組之間年齡無顯著性差異。 2、哮喘組和對(duì)照組性別之間的比較采用X2檢驗(yàn),X2值為0.028,P值為0.866,結(jié)果如表2所示,兩組之間性別無顯著性差異。 3、ADAM33基因T2位點(diǎn)CC、CT、TT基因型在哮喘組的分布頻數(shù)分別為139、47、0。根據(jù)Hardy-weinberg平衡檢驗(yàn)公式X2=(O-C)2/C計(jì)算X2值為3.74,P值大于0.05,基因型分布符合Hardy-weinberg平衡定律。同理計(jì)算S2位點(diǎn)X2值為2.01,P值大于0.05,基因型分布符合Hardy-weinberg平衡定律,結(jié)果見表3。在對(duì)照組中分別對(duì)T2、S2位點(diǎn)根據(jù)Hardy-weinberg平衡檢驗(yàn)公式X2=(O-C)2/C計(jì)算X2值分別為0.998和1.43,P值均大于0.05,結(jié)果見表4,基因型分布也符合Hardy-weinberg平衡定律,說明兩樣本具有很好的均衡性。 4、對(duì)T2位點(diǎn),未檢測(cè)到TT基因型,主要的原因可能是樣本量不足。病例組和對(duì)照組中,等位基因T的頻率分別為12.6%和7.6%,見表12,經(jīng)X2檢驗(yàn)P=0.026,見表5;對(duì)S2位點(diǎn),病例組和對(duì)照組中,等位基因C的頻率分別為24.8%和16.3%,見表12,經(jīng)X2檢驗(yàn)P=0.021,見表5。說明兩SNP位點(diǎn)病例組和對(duì)照組的基因型構(gòu)成差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明T2,S2位點(diǎn)SNPs與哮喘易感性有關(guān)。 5、根據(jù)病情嚴(yán)重程度把哮喘患者分為輕、中、重3組,經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)分析,T2位點(diǎn)Z值為-0.13,P=0.897,見表6;S2位點(diǎn)X2值為0.419,P=0.811,見表7。結(jié)果表明T2,S2位點(diǎn)多態(tài)性與哮喘病情嚴(yán)重度無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)。 6、通過logistic回歸計(jì)算兩位點(diǎn)單核甘酸多態(tài)性對(duì)哮喘的相對(duì)危險(xiǎn)度,T2位點(diǎn)的OR值為1.867,P值為0.027;S2位點(diǎn)的OR值為0.444,P值為0.024;結(jié)果如表8所示,說明兩SNPs位點(diǎn)能顯著增加哮喘發(fā)生的危險(xiǎn)性。 7、根據(jù)患者的外周血常規(guī)檢測(cè)和詢問有無使用藥物史,把患者分為EOS增高和EOS不增高兩組,通過X2檢驗(yàn)分析2組對(duì)象的基因型構(gòu)成,T2位點(diǎn)X2=2.316,P=0.128;S2位點(diǎn)X2=4.404,P=0.111;結(jié)果表明兩SNPs位點(diǎn)基因型構(gòu)成與EOS改變無統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián),單核甘酸多態(tài)性不能影響EOS。 8、方差分析計(jì)算基因型構(gòu)成和肺功能指標(biāo)FEV1實(shí)/預(yù)、FEV1/FVC和FVC實(shí)/預(yù)的關(guān)聯(lián),T2位點(diǎn)的P值分別為0.432,0.546,0.538;S2位點(diǎn)的P值分別為0.640,0.427,0.738,表明T2,S2位點(diǎn)的SNPs與肺功能指標(biāo)無顯著相關(guān)性。 結(jié)論 被檢測(cè)的ADAM33基因的T2,S2位點(diǎn)SNPs與中國漢族人群支氣管哮喘的易感性有顯著相關(guān)性,罕見等位基因能增加哮喘發(fā)生的危險(xiǎn),但與變應(yīng)性體質(zhì)和肺功能沒有顯著相關(guān)性。今后的工作將通過進(jìn)一步擴(kuò)大病例數(shù)和選取更多的位點(diǎn)來探討ADAM33基因單核甘酸多態(tài)性與中國漢族人群支氣管哮喘的關(guān)聯(lián)和在哮喘發(fā)病機(jī)制中的作用。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 揭志軍,蔡映云;一種新的哮喘易感基因——ADAM33基因[J];國外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊(cè);2005年09期

本文編號(hào)：2737006