【摘要】： 肺纖維化的發(fā)病率和病死率逐年增高,發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚。肺泡巨噬細(xì)胞在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中起重要作用。以往研究已證實(shí)在肺纖維化形成過程中肺泡巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞增多,但其在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中的作用及機(jī)制尚不清楚。轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)是肺纖維化中研究最深、最重要的細(xì)胞因子,并被認(rèn)為是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的細(xì)胞外基質(zhì)沉積促進(jìn)劑。在多種因素導(dǎo)致的肺纖維化中(包括博萊霉素、環(huán)磷酰胺和射線)均發(fā)現(xiàn)TGF-β1,含量增高。結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor,CTGF)是一種富含半胱氨酸的分泌性多肽,是介導(dǎo)TGF-β1致纖維化作用的重要的下游介質(zhì),與皮膚、肝、腎等組織器官纖維化有著重要聯(lián)系,但在肺纖維化中的作用研究不多。一氧化氮(NO)與肺纖維化的關(guān)系開始受到重視。誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)抑制劑氨基胍能顯著降低肺勻漿中iNOS活性,減少NO釋放,顯著延緩、減輕肺泡炎。在肺內(nèi)NO增多時(shí),肺內(nèi)iNOS免疫陽性細(xì)胞數(shù)量增多,肺泡巨噬細(xì)胞釋放NO的能力增強(qiáng)。羅格列酮(rosiglitazone,RSG)是過氧化物酶體增生物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)的特異性配體。PPARγ可以調(diào)節(jié)控制脂質(zhì)和糖代謝基因的核受體,其對泡沫細(xì)胞形成中的作用尚有爭議。 本研究用博萊霉素(Bleomycin,BLM)誘導(dǎo)大鼠肺纖維化,并以RSG進(jìn)行干預(yù),觀察肺泡泡沫細(xì)胞比例的變化,以及肺泡泡沫細(xì)胞較肺泡巨噬細(xì)胞TGF-β1、CTGF及iNOS表達(dá)的改變,探討泡沫細(xì)胞在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中的作用,以及RSG的影響。 1肺纖維化大鼠肺泡泡沫細(xì)胞比例的變化及RSG的影響 目的:治療劑量的RSG對肺纖維化大鼠肺泡泡沫細(xì)胞數(shù)量的影響。 方法將健康雄性SD大鼠60只分14天、28天兩大組。 14天組4組,每組6只。①sham14組:氣管滴注生理鹽水(normal sodium,NS)0.1ml,次日NS(1ml/d)灌胃14天。②R14組:氣管滴注NS 0.1ml,次日RSG(3mg/kg/d)灌胃14天。③B+NS14組:氣管滴注BLMA5 5mg/kg,次日NS(1ml/d)灌胃14天。④B+R14組:氣管滴注BLMA5 5mg/kg,次日RSG(3mg/kg/d)灌胃14天。各組于14天后取材。 28天組分為6組,每組6只①Sham28組:氣管滴注NS 0.1ml,次日NS(1ml/d)灌胃28天。②R28組:氣管滴注NS 0.1ml,次日RSG(3mg/kg/d)灌胃28天。③B+NS28組:氣管滴注BLMA5 5mg/kg,次日NS(1ml/d)灌胃28天。④B+R28組:滴注BLMA5 5mg/kg,次日RSG(3mg/kg/d)灌胃28天。⑤B+R14N14組:滴注BLMA5 5mg/kg,次日RSG(3mg/kg/d)灌胃14天,之后NS(1ml/d)灌胃14天。⑥B+N14R14組:滴注BLMA5 5mg/kg,次日14天NS(1ml/d)灌胃14天,之后RSG(3mg/kg/d)灌胃14天。各組于給藥后28d取材。 行支氣管肺泡灌洗術(shù)觀察支氣管肺泡灌洗液(broncho- alveolar lavage fluid,BALF)細(xì)胞總數(shù)及油紅O染色法估算BALF中泡沫細(xì)胞的比例。 結(jié)果:BALF中細(xì)胞總數(shù)各RSG組與其對應(yīng)Sham組相比細(xì)胞數(shù)量無明顯差異(P0.05)。一次性氣管內(nèi)滴注BLM后,BALF中細(xì)胞總數(shù)增加,且細(xì)胞數(shù)量在肺纖維化炎癥期(滴注BLM 14天后)高于肺纖維化形成期(滴注BLM 28天后)(P0.01);給予RSG治療后,BALF中細(xì)胞總數(shù)除B+NS14R14組與模型組無明顯差異外,其余各組均明顯降低(P0.01)。 油紅O陽性細(xì)胞(即泡沫細(xì)胞)百分率RSG組、模型組、治療組與其sham組相比,油紅O陽性細(xì)胞百分率均顯著增高(P0.01)。各治療組與其對應(yīng)的模型組相比,油紅O陽性細(xì)胞百分率均顯著增高(P0.01)。B+NS14R14組與B+R14NS14組相比,油紅O陽性細(xì)胞百分率顯著降低(P0.01)。B+NS28組與B+NS14組相比,油紅O陽性細(xì)胞百分率顯著降低(P0.01)。 小結(jié):在BLM誘導(dǎo)大鼠肺纖維化形成過程中,BALF細(xì)胞總數(shù)增多,泡沫細(xì)胞比例增高。RSG部分抑制BLM引起的BALF細(xì)胞總數(shù)增多,且RSG增加BALF中泡沫細(xì)胞的比例,其作用在前14天更顯著。 2泡沫細(xì)胞和巨噬細(xì)胞TGF-β1、CTGF及iNOS表達(dá)差異及RSG的影響 目的:通過TGF-β1、CTGF及iNOS在肺泡沫細(xì)胞中表達(dá)的變化,來觀察RSG及泡沫細(xì)胞在肺纖維化中的作用。 方法:實(shí)驗(yàn)分組同第一部分。 以油紅O及免疫組織化學(xué)雙重染色法區(qū)別TGF-β1、CTGF及iNOS在泡沫細(xì)胞與巨噬細(xì)胞表達(dá)差異。 結(jié)果:TGF-β1免疫組織化學(xué)結(jié)果 肺纖維化的前14天表達(dá)TGF-β1細(xì)胞的數(shù)量和比例多于后14天。BALF中表達(dá)TGF-β1的泡沫細(xì)胞比例多于巨噬細(xì)胞。RSG促使巨噬細(xì)胞形成泡沫細(xì)胞使表達(dá)TGF-β1的細(xì)胞比例增加,其作用在前14天更顯著,但由于RSG部分抑制BLM引起的BALF細(xì)胞總數(shù)增多,使表達(dá)TGF-β1的細(xì)胞數(shù)量減少或無明顯變化。 CTGF免疫組織化學(xué)結(jié)果 肺纖維化的前14天表達(dá)CTGF細(xì)胞的比例低于后14天,而表達(dá)CTGF細(xì)胞的數(shù)量高于后14天。BALF中表達(dá)CTGF的泡沫細(xì)胞比例小于巨噬細(xì)胞。RSG促使巨噬細(xì)胞形成泡沫細(xì)胞且部分抑制BLM引起的BALF細(xì)胞總數(shù)增多使表達(dá)CTGF的細(xì)胞的數(shù)量和比例減少從而使表達(dá)CTGF細(xì)胞總數(shù)和比例下降,其作用在前14天更顯著 iNOS免疫組織化學(xué)結(jié)果 肺纖維化的前14天表達(dá)iNOS細(xì)胞的比例低于后14天,而表達(dá)iNOS細(xì)胞的數(shù)量高于后14天。BALF中表達(dá)iNOS的泡沫細(xì)胞比例小于巨噬細(xì)胞。RSG促使巨噬細(xì)胞形成泡沫細(xì)胞部分抑制BLM引起的BALF細(xì)胞總數(shù)增多使表達(dá)iNOS的細(xì)胞的數(shù)量和比例減少從而使表達(dá)iNOS細(xì)胞總數(shù)和比例且前14天給藥與后14天給藥相比更為明顯。 小結(jié):氣管內(nèi)一次性滴注BLM可引起B(yǎng)ALF中細(xì)胞TGF-β1、CTGF以及iNOS表達(dá)上調(diào)。泡沫細(xì)胞表達(dá)iNOS、CTGF數(shù)量及比例低于巨噬細(xì)胞。因而巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞的增多可能減輕肺纖維化程度。RSG通過提高BALF中泡沫細(xì)胞的數(shù)量和比例而部分抑制BLM引起的CTGF和iNOS表達(dá)上調(diào)并且通過減少BALF細(xì)胞數(shù)量,部分抑制TGF-β1、CTGF以及iNOS表達(dá)總量增加,而發(fā)揮抗纖維化作用。 結(jié)論:肺纖維化中,巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞與巨噬細(xì)胞相比,促纖維化作用減弱。RSG通過提高泡沫細(xì)胞比例及減少BALF細(xì)胞數(shù)量發(fā)揮抗纖維化作用
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R563.9

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2 楊s

本文編號：2736890