【摘要】：背景: 血管反應(yīng)是炎癥過(guò)程的中心環(huán)節(jié)。一些炎癥反應(yīng)特別是慢性炎癥可刺激血管生成,新生成的血管又有助于組織的炎癥反應(yīng),二者互為因果,形成惡性循環(huán),使得局部炎癥反應(yīng)更為強(qiáng)烈和持久。哮喘的本質(zhì)是氣道慢性炎癥性疾病,長(zhǎng)期反復(fù)發(fā)作將導(dǎo)致氣道結(jié)構(gòu)的不可逆性改變,稱為氣道重建。研究證實(shí),氣道血管生成/血管重建也是哮喘的一個(gè)重要病理特征。 目的: 通過(guò)觀察慢性哮喘小鼠氣道血管生成的變化,初步探討其在氣道重建中的意義,為哮喘氣道血管生成的深入研究提供依據(jù)。 方法: 1、慢性哮喘小鼠模型的建立 通過(guò)多次抗原致敏和反復(fù)抗原滴鼻激發(fā)建立慢性哮喘小鼠模型。24只BALB/c小鼠隨機(jī)分為3組,每組8只,即正常對(duì)照組、慢性哮喘組和地塞米松治療組。哮喘組第0、7、14天給予0.01%OVA(每10ml含OVA 1mg、氫氧化鋁8ml)200(l腹腔注射致敏,第21～30、48、62、74～76天0.2%OVA抗原液50(l滴鼻激發(fā),共15次;對(duì)照組同時(shí)給予等體積NS腹腔注射和滴鼻。地塞米松治療組每次激發(fā)前1h腹腔注射2mg/kg地塞米松;其余2組同時(shí)腹腔注射等體積NS。 末次激發(fā)后24h眼球取血處死動(dòng)物并留取血清,隨即行右側(cè)肺灌洗留取BALF,左肺及氣管置于10%中性福爾馬林溶液固定,24h內(nèi)完成石蠟包埋,常規(guī)制備病理切片行HE染色和抗Ⅷ因子免疫組化染色。 2、氣道血管密度的計(jì)算及形態(tài)學(xué)參數(shù)的測(cè)量 每個(gè)標(biāo)本觀察5張免疫組化切片,每張切片在顯微鏡(×1000)下于粘膜下層、粘膜固有層處血管盡可能多的區(qū)域選10個(gè)視野,計(jì)數(shù)50個(gè)視野(1mm2)中陽(yáng)性反應(yīng)的管腔樣結(jié)構(gòu)的總數(shù)作為血管密度(血管數(shù)/mm2)。 WP=6 于HE染色病理片上,采用德國(guó)Leica Q500MC 圖像分析系統(tǒng),測(cè)定不含軟骨的完整支氣管橫斷面的基底膜周徑Pbm((m)、管壁面積WAt((m2),計(jì)算WAt/Pbm((m2/(m)。 3、BALF中VEGF、Endostatin水平的檢測(cè) ELISA法檢測(cè)BALF中VEGF、Endostatin濃度。 結(jié)果: 1、氣管血管密度 慢性哮喘組明顯高于正常對(duì)照組(203.750±24.330/mm2 vs 99.000±20.667/mm2,P0.01)。 2、支氣管管壁面積/基底膜周徑(WAt/Pbm) 慢性哮喘組明顯高于正常對(duì)照組(17.09±1.60(m2/(m vs 12.71±1.05(m2/(m,P0.01)。慢性哮喘小鼠支氣管上皮細(xì)胞增生,基底膜增厚,平滑肌增生以及氣道內(nèi)分泌物積聚。 3、BALF中VEGF、Endostatin水平 慢性哮喘組VEGF、Endostatin濃度和VEGF/Endostatin比值均明顯高于正常對(duì)照組(133.821±14.238pg/ml vs 58.342±18.478pg/ml,3024.550±831.917pg/ml vs 1916.925±412.916pg/ml,均P0.01)。 4、氣管血管密度與WAt/Pbm及BALF中VEGF、Endostatin水平的關(guān)系 慢性哮喘小鼠氣道內(nèi)血管密度與WAt/Pbm(r=0.738,P0.05)、VEGF(r=0.701,P0.01)、VEGF/Endostatin(r=0.562,P0.05)均呈正相關(guān)。 5、地塞米松治療對(duì)慢性哮喘小鼠氣道血管生成的影響 地塞米松治療組WAt/Pbm〔(14.26±0.99)(m2/(m〕和血管密度(123.625±23.946/mm2)均明顯低于慢性哮喘組(均P0.01),高于正常對(duì)照組(均P0.05)。與慢性哮喘組相比,VEGF水平明顯降低(84.640±17.034pg/ml,P0.01),Endostatin水平(2541.450±402.662pg/ml)無(wú)明顯變化,VEGF/Endostatin比值明顯降低(P0.05)。 結(jié)論: 1、慢性哮喘小鼠氣道血管生成明顯增加,且與氣道壁厚度呈正相關(guān),提示血管生成可能在哮喘氣道重建中具有重要意義。 2、慢性哮喘小鼠BALF中VEGF、Endostatin、VEGF/Endostatin比值均明顯升高,且VEGF、VEGF/Endostatin比值與氣道血管密度呈正相關(guān),提示哮喘氣道血管生成可能 WP=7 與氣道內(nèi)血管生成促進(jìn)因子和抑制因子比例失衡有關(guān)。 3、糖皮質(zhì)激素能部分抑制慢性哮喘小鼠BALF中VEGF/Endostatin比值升高和氣道血管生成,并進(jìn)而改善慢性哮喘的氣道結(jié)構(gòu)重建。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R562.25
【圖文】：

區(qū)哮喘的患病率、死亡率呈逐年增高趨勢(shì)，部分地區(qū)增加近 1 倍，對(duì)人類健康構(gòu)成大威脅。因此對(duì)哮喘進(jìn)行進(jìn)一步研究具有深遠(yuǎn)的意義[1、2]。目前認(rèn)為哮喘是由多種細(xì)胞（如嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞、中性粒、氣道上皮細(xì)胞等）和細(xì)胞組份參與的氣道慢性炎癥性疾病。這些細(xì)胞和細(xì)胞組份作用形成惡性循環(huán)，使氣道炎癥持續(xù)存在，成為哮喘的基本病理改變和反復(fù)發(fā)作的病理生理機(jī)制。在病程早期，解剖學(xué)上很少發(fā)生器質(zhì)性改變；長(zhǎng)期反復(fù)發(fā)作將導(dǎo)致結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，包括氣道上皮細(xì)胞脫落/增生、基底膜增厚、上皮下纖維化、平滑生/肥大、杯狀細(xì)胞增生/化生、粘液腺增生/肥大、血管生成/血管重建等，稱為氣道（圖 1），最終導(dǎo)致持續(xù)地氣道高反應(yīng)性和不可逆性氣道阻塞[1～6]。雖然以吸入性質(zhì)激素和β2受體激動(dòng)劑為基礎(chǔ)的治療可以使哮喘發(fā)作得到較好的控制，但即使在的早期使用亦不能有效阻止氣道重建的進(jìn)展[4、5]。因此近幾年其重要性受到廣泛，逐漸成為哮喘研究中的熱點(diǎn)。

第 頁(yè)20A、B. 正常對(duì)照組；C、D. 慢性哮喘組，支氣管周圍和氣管粘膜、粘膜下層炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)顯著，以淋巴細(xì)胞為主；支氣管管壁顯著增厚，上皮細(xì)胞增生，基底膜增厚，平滑肌增生，管腔內(nèi)分泌物積聚。氣管粘膜固有層、粘膜下層血管明顯增多并充血，血管內(nèi)可見(jiàn)較多紅細(xì)胞；E、F. 地塞米松治療組，較 C、D改善，但仍未恢復(fù)正常 A、C、E. 肺 HE×100 B、D、F. 氣管 HE×1000圖 5. 各組小鼠肺部及氣管病理改變

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 商艷,李強(qiáng),黃怡,白沖,劉忠令;不同劑量致敏原對(duì)小鼠過(guò)敏性哮喘模型的影響[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年01期

2 袁益明,王曾禮,董碧蓉;一氧化氮對(duì)哮喘大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)調(diào)控[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2002年05期

3 中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘學(xué)組;支氣管哮喘防治指南(支氣管哮喘的定義、診斷、治療及教育和管理方案)[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2003年03期

本文編號(hào)：2731563