【摘要】： 目的：觀察尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)抑制劑氨氯吡咪對(duì)大鼠COPD模型病理及病理生理改變的影響，探討uPA系統(tǒng)成分在COPD發(fā)病中的作用。 方法：健康2級(jí)雄性Wistar大鼠24只隨機(jī)分為3組，1組為正常對(duì)照組，另外2組用氣管內(nèi)注入脂多糖加煙熏法制作大鼠COPD模型，其中1組為模型組，另1組給予口服氨氯吡咪，為氨氯吡咪組。7周后檢測(cè)各組大鼠的(1)肺功能；(2)支氣管肺泡灌洗液(BALF)細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類；(3)肺組織切片天狼猩紅染色觀察支氣管肺組織的膠原沉積；(4)肺組織切片免疫組化染色觀察uPA、尿激酶型纖溶酶原激活物受體(uPAR)、纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的蛋白定位和表達(dá)；(5)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組大鼠肺組織uPA、uPAR、PAI-1及MMP-9 mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：(1)肺功能：模型組呼氣阻力(Re)顯著高于對(duì)照組[(4.17±0.72)mmHg．s~(-1)．g~(-1) vs(1.95±0.56) mm Hg．s~(-1)．g~(-1)，P＜0.01]和氨氯吡咪組[(4.17±0.72) mm Hg．s~(-1)．g~(-1) vs(1.61±0.25)，P＜0.01]，0.3s用力呼氣容積／用力肺活量(FEV_(0.3)／FVC％)、呼氣峰流速(PEF)均顯著低于對(duì)照組[分別為(51.80±3.86)％vs(95.34±2.80)％、(15.37±1.76)ml／s vs(31.57±5.17)ml／s，P均＜0.01]和氨氯吡咪組[分別為(51.80±3.86)％vs(98.46±0.94)％、(15.37±1.76)ml／s vs (41.65±3.21) ml／s，P均＜0.01]； (2) BALF炎性細(xì)胞：模型組BALF中白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞百分比[分別為(6.64±1.43)×10~6／ml、(3.43±1.04)％、(5.35±2.53)％]顯著高于對(duì)照組[分別為(2.14±0.68)×10~6／ml、(1.13±1.59)％、(1.27±1.18)％]和氨氯吡咪組[分別為(4.17±1.18)×10~6／ml、(1.05±0.20)％、(2.52±1.60)％](P均＜0.001)；對(duì)照組和氨氯吡咪組炎性細(xì)胞間比較無明顯差異； (3)膠原定量分析：模型組Ⅰ型膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)在氣道壁過度沉積，膠原面積顯著高于對(duì)照組[(67050±14710)VS(11797±2806)，P＜0.001]和氨氯吡咪組[(67050±14710)VS(17113±5945)，P＜0.001]；而對(duì)照組和氨氯吡咪組間膠原定量分析無顯著差異； (4) uPA、uPAR、PAI-1及MMP-9的蛋白表達(dá)：主要表達(dá)在肺內(nèi)的炎性細(xì)胞(巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞)、氣道上皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。模型組大鼠支氣管肺組織uPA、uPAR、PAI-1及MMP-9的蛋白表達(dá)[分別為(0.166±0.010)、(0.158±0.024)、(0.171±0.012)、(0.159±0.007)]顯著高于對(duì)照組[分別為(0.137±0.015)、(0.122±0.009)、(0.144±0.005)、(0.128±0.133)]和氨氯吡咪組[分別為[(0.126±0.004)、(0.120±0.010)、(0.122±0.004)、(0.131±0.006)](P均＜0.001)，且uPAR蛋白表達(dá)與中性粒細(xì)胞百分比成正相關(guān)(r=0.754，P=0.031)。氨氯吡咪組uPA、PAI-1蛋白表達(dá)顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。 (5) uPA、uPAR、PAI-1及MMP-9 mRNA的表達(dá)：模型組大鼠肺組織uPA、uPAR、PAI-1及MMP-9 mRNA的表達(dá)[分別為(4.37±1.85)×10~(-5)、(4.40±1.55)×10~(-5)、(6.61±4.07)×10~(-5)、(5.91±2.52)×10~(-5)]顯著高于對(duì)照組[分別為(1.30±1.08)×10~(-5)、(2.39±2.05)×10~(-5)、(1.89±0.74)×10~(-5)、(1.85±0.72)×10~(-5)](P＜0.05)。氨氯吡咪組大鼠肺組織uPA、MMP-9 mRNA的表達(dá)下降，顯著低于模型組(P＜0.05)；uPAR、PAI-1 mRNA水平也有所降低，但與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 結(jié)論：①氣管內(nèi)滴注脂多糖加煙熏法所致COPD大鼠模型支氣管肺組織內(nèi)uPA、uPAR、PAI-1及MMP-9的蛋白和基因表達(dá)均顯著高于正常對(duì)照組； ②應(yīng)用uPA抑制劑氨氯吡咪可下調(diào)uPA系統(tǒng)成分及MMP-9的表達(dá)，顯著減輕COPD大鼠氣道炎癥和病理結(jié)構(gòu)改變。提示uPA系統(tǒng)成分可能是COPD病理過程中炎癥反應(yīng)和組織重塑中具有關(guān)聯(lián)作用的重要物質(zhì)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R563.9
【圖文】：

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【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2729429