發(fā)布時(shí)間：2020-06-24 20:10

【摘要】：目的1.通過(guò)文獻(xiàn)查閱,考察中西藥聯(lián)合使用對(duì)臨床治療細(xì)菌感染性疾病的優(yōu)勢(shì)和特色;2.考察穿心蓮內(nèi)酯聯(lián)用阿奇霉素對(duì)肺炎克雷伯菌引起的感染性肺炎大鼠模型的體內(nèi)治療作用,為臨床兩藥聯(lián)合使用的必要性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù);3.考察穿心蓮內(nèi)酯單用及與阿奇霉素聯(lián)合使用對(duì)巨噬細(xì)胞炎癥因子IL-6釋放的抑制作用,初步從細(xì)胞水平探討穿心蓮內(nèi)酯與阿奇霉素的抗感染協(xié)同作用。方法1.以穿心蓮內(nèi)酯為研究切入點(diǎn),抗生素、合理使用、不良反應(yīng)、濫用、穿心蓮內(nèi)酯、聯(lián)用為關(guān)鍵字,采用文獻(xiàn)查閱研究法分析抗生素的使用現(xiàn)狀、穿心蓮內(nèi)酯聯(lián)用阿奇霉素在臨床治療細(xì)菌感染性肺炎方面的價(jià)值與優(yōu)勢(shì);2.采用牛津管法考察穿心蓮內(nèi)酯和阿奇霉素單獨(dú)或聯(lián)合使用在體外對(duì)肺炎克雷伯菌的抑制作用;3.將已增毒的肺炎克雷伯菌混懸液以氣管直接注入法構(gòu)建大鼠感染性肺炎模型。造模后3天后,以灌胃方式分別給予各組動(dòng)物40.5mg/kg·d穿心蓮內(nèi)酯(單用穿心蓮內(nèi)酯組)、4.5mg/kg·d阿奇霉素(單用阿奇霉素組)、40.5mg/kg·d穿心蓮內(nèi)酯+4.5mg/kg·d阿奇霉素(聯(lián)用高劑量組)、20.25mg/kg·d穿心蓮內(nèi)酯+4.5mg/kg·d阿奇霉素(聯(lián)用中劑量組)、10.125mg/kg·d穿心蓮內(nèi)酯+4.5mg/kg·d阿奇霉素(聯(lián)用低劑量組)進(jìn)行干預(yù);于給藥后第一天(即造模后第4天)對(duì)麻醉狀態(tài)大鼠行腹主動(dòng)脈采血,制備血清。每組取樣3日。血清使用液相懸浮芯片技術(shù)同時(shí)檢測(cè)TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A含量。并將造模后第3天及給藥第3天的各組動(dòng)物肺組織進(jìn)行病理檢測(cè)。分析比較藥物單用及聯(lián)用對(duì)細(xì)菌感染性肺炎治療作用的差異,并進(jìn)行相關(guān)藥效動(dòng)力學(xué)分析;4.采用LPS刺激小鼠巨噬細(xì)胞構(gòu)建炎癥細(xì)胞模型,加入不同劑量的藥物,單用穿心蓮內(nèi)酯組每孔分別加入不同劑量穿心蓮內(nèi)酯(穿心蓮內(nèi)酯的終濃度為4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/L);單用阿奇霉素組每孔加入不同劑量阿奇霉素(阿奇霉素的終濃度為2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125μmol/L);聯(lián)合用藥組加入穿心蓮內(nèi)酯與阿奇霉素(按照2㑳1的比例,終濃度分別為5.9968μmol/L、2.9984μmol/L、1.992μmol/L、0.7496μmol/L、0.3748μmol/L、0.1874μmol/L、0.0936μmol/L)。給藥后除空白組外30min后給予LPS刺激,4h后收集細(xì)胞上清液,用ELISA法檢測(cè)其中IL-6的含量。結(jié)果1.根據(jù)文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn),以穿心蓮內(nèi)酯磺化物為主要成分的制劑(喜炎平注射液)與阿奇霉素聯(lián)用已廣泛用于感染性肺炎的臨床治療,聯(lián)合使用具有縮短治愈時(shí)間、降低不良反應(yīng)、提高治療效率等優(yōu)勢(shì)。2.體外藥物敏感性實(shí)驗(yàn)(牛津管法)結(jié)果顯示,穿心蓮內(nèi)酯濃度在0.0244~50μg/ml范圍抑菌圈直徑均小于1.1cm,表明其在該濃度范圍內(nèi)單用無(wú)抑菌作用;阿奇霉素濃度在0.0244~50μg/ml范圍內(nèi)抑菌圈直徑在1.1~1.5cm,且其抑菌作用呈明顯劑量依賴(lài);兩者聯(lián)合使用,抑菌圈直徑與單用阿奇霉素抑菌圈直徑大小無(wú)顯著差異,結(jié)果表明兩藥無(wú)體外抗菌協(xié)同作用。3.穿心蓮內(nèi)酯、阿奇霉素單用或聯(lián)合使用對(duì)克雷伯菌引起的大鼠肺炎模型可見(jiàn)明顯的體內(nèi)治療作用。與模型組比較,穿心蓮內(nèi)酯在給藥第一天對(duì)TNF-α、IL-4、IFN-γ有顯著抑制作用(p0.05),在給藥第二天對(duì)IFN-γ有顯著抑制作用(p0.05);治療周期中,與模型組比較,穿心蓮內(nèi)酯AUC_(TNF-α)下降41.2%,AUC_(IFN-γ)下降42.93%,AUC_(IL-4)下降65.57%,AUCU_(IL-6)下降21%。阿奇霉素在給藥第一天對(duì)IFN-γ有顯著抑制作用(p0.05),但與模型組比較AUC_(IFN-γ)增長(zhǎng)了14.7%,且在給藥后對(duì)血清中TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A的產(chǎn)生呈抑制、誘導(dǎo)、再抑制作用,這可能與阿奇霉素殺滅細(xì)菌后細(xì)菌碎片進(jìn)一步激活免疫反應(yīng)而誘導(dǎo)炎癥因子產(chǎn)生有關(guān)。與模型組比較,聯(lián)用低劑量組在給藥第一天對(duì)IFN-γ和IL-4有顯著抑制作用(p0.05),且AUC_(IFN-γ)下降10.4%,AUC_(IL-4)下降49.25%;與各單用組比較,聯(lián)用低劑量組對(duì)TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10總釋放量有進(jìn)一步的抑制作用。與模型組比較,聯(lián)用中劑量組給藥第一天對(duì)IFN-γ有極顯著抑制作用(p0.01),對(duì)TNF-α、IL-4、IL-6有顯著抑制作用(p0.05),AUC_(IFN-γ)下降31.2%,AUC_(TNF-α)下降76%,AUC_(IL-4)下降66.73%,AUC_(IL-6)下降42%。與各單用組比較,聯(lián)用中劑量組對(duì)TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17總釋放量有進(jìn)一步的抑制作用。與模型組比較,聯(lián)用高劑量組在給藥第一天對(duì)IFN-γ有極顯著抑制作用(p0.01),對(duì)TNF-α、IL-4、IL-6有顯著抑制作用(p0.05),在給藥第二天對(duì)TNF-α和IFN-γ有抑制作用(p0.05),AUC_(IFN-γ)下降67.9%,AUC_(TNF-α)下降79%,AUC_(IL-4)下降18.58%,AUC_(IL-6)下降11%,與各單用組比較,聯(lián)用高劑量組對(duì)各炎癥因子的總釋放量均有進(jìn)一步的抑制作用。另與模型組比較,各給藥組對(duì)IL-1β、IL-10和IL-17A三炎癥因子有抑制作用趨勢(shì)。但與各單用組比較,聯(lián)用高劑量組對(duì)此三因子的總釋放量也呈進(jìn)一步抑制作用趨勢(shì)。4.在造模第3天,空白組HE染色鏡下未見(jiàn)明顯組織病理?yè)p傷,其余6組呈間質(zhì)性肺炎特征。均表現(xiàn)為肺泡中隔顯著增厚,輕度淤血以及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。支氣管腔內(nèi)有少量炎性細(xì)胞以及脫落壞死的支氣管上皮細(xì)胞,多量炎性細(xì)胞環(huán)繞血管或支氣管形成“管套”現(xiàn)象,局部區(qū)域固有結(jié)構(gòu)消失、多量上皮細(xì)胞增生伴隨多量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),部分支氣管腔內(nèi)見(jiàn)有較多量的紅細(xì)胞。給藥第3天,鏡下可觀察空白組肺組織未見(jiàn)明顯病理?yè)p傷,模型組肺組織呈化膿性肺炎樣表現(xiàn),各給藥組樣本表現(xiàn)為不同程度的肺泡隔增寬、肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張充血、終末支氣管內(nèi)蛋白及細(xì)胞碎片等病理?yè)p傷。但聯(lián)合用藥組與單用組病理學(xué)變化無(wú)顯著組間差異。5.經(jīng)ELISA法檢測(cè)巨噬細(xì)胞釋放IL-6含量時(shí),穿心蓮內(nèi)酯的濃度在1.25μM、2.5μM、5μM、10μM、20μM下,能夠抑制在炎癥反應(yīng)時(shí)巨噬細(xì)胞釋放IL-6;阿奇霉素在0.625μM、1.25μM、2.5μM、5μM和10μM濃度下,能夠抑制巨噬細(xì)胞釋放IL-6。而穿心蓮內(nèi)酯與阿奇霉素給藥劑量為2:1時(shí),在濃度為1.847μM、3.748μM、7.496μM、14.992μM和29.984μM范圍內(nèi),對(duì)IL-6有抑制作用。計(jì)算對(duì)IL-6抑制率為5%、10%、20%、40%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%下的CI值,各CI值分別為9.728、6.098、3.766、2.201、1.480、1.216、1.095、0.976、0.856、0.730、0.693,表明兩者藥物在低聯(lián)用劑量區(qū)間呈現(xiàn)拮抗作用,聯(lián)用劑量在1.085~1.251μM范圍內(nèi)呈加和作用,聯(lián)用劑量大于1.251μM時(shí)呈協(xié)同作用。結(jié)論1.中西藥聯(lián)合使用對(duì)感染性肺炎治療效果確切,具有臨床應(yīng)用優(yōu)勢(shì);2.穿心蓮內(nèi)酯雖無(wú)協(xié)同阿奇霉素的抗菌作用。但穿心蓮內(nèi)酯聯(lián)用阿奇霉素相比兩者的單獨(dú)使用,能夠進(jìn)一步抑制細(xì)菌感染性肺炎大鼠血清中的多種炎癥因子生成,表明合用能發(fā)揮協(xié)同抗炎作用,從而顯著改善肺炎癥狀。同時(shí)阿奇霉素單用數(shù)據(jù)提示,抑菌后細(xì)菌構(gòu)件可能誘發(fā)機(jī)體更為強(qiáng)烈的免疫反應(yīng);合用穿心蓮內(nèi)酯后,對(duì)這一現(xiàn)象有改善作用。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明合用在高劑量區(qū)間,穿心蓮內(nèi)酯合用阿奇霉素具有抗炎協(xié)同作用。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R563.1
【圖文】：

DIKMA 公司）；檢測(cè)波長(zhǎng)：225nm；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；流動(dòng)相：甲醇：水=60:40.圖 1.1 穿心蓮內(nèi)酯高效液相色譜圖1.1.2 受試菌株肺炎克雷伯菌（Klebsiella Pneumoniae）臨床分離株，于 2016 年 10 月從四川省中醫(yī)院（成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，三級(jí)甲等）住院患者痰液中分離得到。該菌株在分離單位經(jīng) Vitek60 和 Viket32 全自動(dòng)細(xì)菌分析儀（法國(guó)生物梅里埃公司）鑒定，確定為肺炎克雷伯菌（Klebsiella Pneumoniae）。經(jīng)分離得到的細(xì)菌涂抹于 MH-A 平板表面，37℃恒溫孵育過(guò)夜，待長(zhǎng)出菌團(tuán)后，選擇長(zhǎng)勢(shì)良好的菌團(tuán)涂布于新鮮 LB 瓊脂平板表面增菌，相同孵育條件至

成都中醫(yī)藥大學(xué) 2019 屆碩士學(xué)位論文的平板蓋上培養(yǎng)皿蓋后，小心放入 37℃孵育箱將牛津管取出后，測(cè)量各組抑菌圈大小。含有 DMSO 不含藥，抑菌圈直徑為 1.1cm，其見(jiàn)表 1-4.

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本文編號(hào)：2728297