【摘要】：背景 防御素(defensins)是一類廣泛存在于動植物體內(nèi)的富含半胱氨酸的陽離子內(nèi)源性抗微生物肽,它們的抗菌活性及廣泛表達(dá)提示它們在多種組織中參與先天免疫反應(yīng)。研究表明防御素作為T細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的化學(xué)增活素而對適應(yīng)性免疫系統(tǒng)起信號傳導(dǎo)作用。β-防御素-2(beta-defensin-2)是1997年在銀屑病患者皮膚中發(fā)現(xiàn)的一種由41個氨基酸殘基組成、富含半胱氨酸、具有3對二硫鍵的陽離子抗菌肽。它主要分布于皮膚和呼吸道上皮細(xì)胞,對多種病源微生物有高效的殺傷活力性,并且對樹突狀細(xì)胞和記憶型T細(xì)胞有強(qiáng)的趨化作用,在機(jī)體的免疫炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。國外文獻(xiàn)報道,重組β-防御素-2在體外對多種革蘭陽性及陰性菌有殺傷作用,而且目前未發(fā)現(xiàn)耐藥性。但其發(fā)揮殺傷作用依賴周圍離子環(huán)境,在過高的離子濃度下殺傷作用會減退。另外,它在體外可被IL-17A、IL-17F誘導(dǎo)表達(dá),但在體內(nèi)二者之間有何聯(lián)系目前還不得而知。肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)是一種常見的醫(yī)院內(nèi)感染致病菌。它引起的肺炎進(jìn)展快,易累及多肺葉、并且對多種抗生素耐藥,嚴(yán)重時可發(fā)生全身炎癥反應(yīng)綜合癥(Systemic inflammatory response syndrome, SIRS)或多器官功能障礙綜合征(Multiple organ dysfunction syndrome, MODS),成為臨床治療的棘手問題。國內(nèi)外學(xué)者正積極研究β-防御素-2在細(xì)菌感染中的免疫調(diào)控和殺菌作用,從而探索它在治療耐藥菌感染中的作用,改變單一使用抗生素治療耐藥菌感染的局面。 第一部分:構(gòu)建SD大鼠肺炎實驗?zāi)Ｐ?目的 直視下經(jīng)氣管滴入肺炎克雷伯菌標(biāo)準(zhǔn)株菌液建立SD大鼠肺炎實驗?zāi)Ｐ?為研究β-防御素-2及IL-17F在肺炎模型中的表達(dá)及二者之間的關(guān)系創(chuàng)造平臺。 方法 健康SPF級SD雄性大鼠50只,體重190-220g,7周齡,隨機(jī)分為兩組①肺炎組(n=25):氣管內(nèi)直接滴入肺炎克雷伯菌菌液(濃度相當(dāng)于0.9×109CFU/ml)0.2ml復(fù)制肺炎模型;②對照組(n=25):同樣方法滴入等量生理鹽水,肺炎組與對照組又分別按不同時間點分為5個小組,每組5只,接種后分別于4、12小時、1、3、5天分批處死動物,分別取每組大鼠左上肺及右上肺進(jìn)行組織勻漿菌落計數(shù)和病理學(xué)檢查。根據(jù)細(xì)菌學(xué)和病理學(xué)指標(biāo)對建立的肺炎模型進(jìn)行評價。 結(jié)果 1.肺炎組大鼠臨床癥狀明顯重于對照組。 2.病理結(jié)果:肺炎組大鼠肺組織大體觀察可見雙側(cè)多葉出現(xiàn)明顯充血、出血、水腫,鏡下可見肺泡結(jié)構(gòu)破壞,肺泡腔及間質(zhì)顯著充血及水腫,中性粒細(xì)胞浸潤明顯,3天組病變最為嚴(yán)重。對照組大鼠肺組織大體觀察可見表面光滑,色澤粉紅,質(zhì)軟,彈性良好,各時間點無明顯差異。 3.組織勻漿菌落計數(shù):肺炎組大鼠肺組織勻漿均可培養(yǎng)出菌落,4小時組計數(shù)最高,此后逐漸降低,第5天時已顯著降低,對照組所有大鼠均未培養(yǎng)出任何細(xì)菌。經(jīng)本院細(xì)菌室API細(xì)菌鑒定系統(tǒng)驗證培養(yǎng)出的菌落均為肺炎克雷伯菌標(biāo)準(zhǔn)株。 第二部分:β-防御素-2及IL-17F的測定 目的 測定大鼠β-防御素-2 (rat beta-defensin-2,rBD-2)及IL-17F(Interleukin-17F)在大鼠肺炎模型中的表達(dá),觀察其變化規(guī)律,探討兩者之間的相關(guān)性。 方法 分別取肺炎組及對照組大鼠右中肺提取總RNA保存于-80℃,采用FQ-PCR檢測β-防御素-2相對表達(dá)量,取下腔靜脈血,留血清ELISA法檢測IL-17F濃度。 結(jié)果 相同時間點β-防御素-2在肺炎組的表達(dá)顯著高于對照組(P0.05),其中肺炎組第3天與同組其他各時間點比較表達(dá)明顯高于其他各時間點(P 0.05)。IL-17F在肺炎組中的表達(dá)顯著高于對照組(P0.05),其中肺炎組第1天與同組其他各時間點比較表達(dá)明顯高于其他各時間點(P 0.05)。 結(jié)論 1.直視下氣管內(nèi)滴入肺炎克雷伯菌液可成功復(fù)制大鼠克雷伯菌肺炎模型。 2.β-防御素-2與IL-17F在大鼠肺炎模型中顯著表達(dá),分別于造模后第3天和第1天達(dá)到高峰。 3.IL-17F與β-防御素-2呈正相關(guān)性,R=0.732 P 0.05。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R563.1
【圖文】：

不同時間點肺炎組大鼠組織勻漿菌落計數(shù)不同時間點菌落計數(shù)（×105CFU/g）組別4h 12h 1d 3d 5d肺炎組 0.96 0.83 0.56 0.29 0.016對照組 均未培養(yǎng)出菌落1.3.3 肺組織病理改變1.肉眼觀察：對照組肺組織外觀色澤粉紅，表面光滑，未見明顯異常改變。肺炎組雙肺呈暗紅色，彌漫性充血、水腫，肺組織內(nèi)散在分布大小不等的實變灶，形狀不規(guī)則，色灰紅或灰黃色，可見點狀和片狀出血，彈性差。見圖 22.光鏡檢查：對照組支氣管粘膜上皮完整，肺小葉結(jié)構(gòu)清晰，肺泡腔結(jié)構(gòu)完整，肺泡壁無增厚，肺泡間質(zhì)無炎性浸潤。肺炎組肺泡萎陷，腔內(nèi)滲出、出血，肺組織結(jié)構(gòu)消失，細(xì)支氣管及其周圍肺泡腔內(nèi)充滿膿性滲出物及少量纖維素。肺泡間隔增寬、斷裂，肺泡間隔內(nèi)血管擴(kuò)張充血，炎癥細(xì)胞浸潤。見圖 2

不同時間點肺炎組大鼠組織勻漿菌落計數(shù)不同時間點菌落計數(shù)（×105CFU/g）組別4h 12h 1d 3d 5d肺炎組 0.96 0.83 0.56 0.29 0.016對照組 均未培養(yǎng)出菌落1.3.3 肺組織病理改變1.肉眼觀察：對照組肺組織外觀色澤粉紅，表面光滑，未見明顯異常改變。肺炎組雙肺呈暗紅色，彌漫性充血、水腫，肺組織內(nèi)散在分布大小不等的實變灶，形狀不規(guī)則，色灰紅或灰黃色，可見點狀和片狀出血，彈性差。見圖 22.光鏡檢查：對照組支氣管粘膜上皮完整，肺小葉結(jié)構(gòu)清晰，肺泡腔結(jié)構(gòu)完整，肺泡壁無增厚，肺泡間質(zhì)無炎性浸潤。肺炎組肺泡萎陷，腔內(nèi)滲出、出血，肺組織結(jié)構(gòu)消失，細(xì)支氣管及其周圍肺泡腔內(nèi)充滿膿性滲出物及少量纖維素。肺泡間隔增寬、斷裂，肺泡間隔內(nèi)血管擴(kuò)張充血，炎癥細(xì)胞浸潤。見圖 2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王荷花,韓明哲;NK細(xì)胞的免疫生物學(xué)特性[J];國外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊;2004年05期

2 魏海明,鄔鵬,田志剛;NK細(xì)胞識別的新模式——壓力誘導(dǎo)模式[J];中國腫瘤生物治療雜志;2005年02期

本文編號：2725029