【摘要】： 特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一種原因不明的,以彌漫性肺泡炎、肺泡單位結構紊亂和最終導致肺纖維化為特征的進行性間質(zhì)性肺疾病。其發(fā)病率和死亡率都很高,且確切機制尚不明確。目前IPF治療主要圍繞糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑/細胞毒藥物等,其療效并不十分滿意。因此,加強對肺纖維化發(fā)病機制的研究及尋找新的有效藥物,具有非常重要的臨床意義。 羅格列酮(rosiglitazone,RSG)屬于噻唑烷二酮類藥物,是過氧化物酶體增殖活化受體γ(peroxisome proliferator- activated receptor-gamma,PPAR-γ)的合成配體,臨床多用于糖尿病的治療。近年研究表明PPARγ及其配體除具有降血脂、血糖等代謝調(diào)節(jié)作用,還具有抑制中性粒細胞等抗炎活性,且能減緩臟器纖維化。作為PPARγ高親和力配體之一的RSG是否對肺纖維化具有作用,目前尚無報道。為此,本實驗采用大鼠氣管內(nèi)注入鹽酸博萊霉素(bleomycin,BLM)的方法復制與人肺間質(zhì)纖維化病理過程相似的動物模型,用RSG進行治療,觀察其療效,并進一步從RSG對肺纖維化大鼠肥大細胞、致纖維化作用因子TGF-β、CTGF的影響來探討其抗肺纖維化的作用機理,以期為臨床防治肺纖維化提出新的治療藥物并提供實驗基礎。 1. RSG對BLM所致大鼠肺纖維化的影響 目的各種致病因素造成的肺組織炎癥損傷為肺纖維化的首發(fā)因素,炎癥誘發(fā)肺泡上皮正常重構失敗,膠原等細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)成分堆積過多。文獻報道RSG對內(nèi)毒素所致的急性肺損傷具有保護作用,還可抑制肺成纖維細胞Ⅰ型膠原的分泌,從而我們推測它是否能通過抑制肺炎癥及減少膠原的產(chǎn)生對肺纖維化產(chǎn)生影響,本部分實驗通過對肺組織形態(tài)學染色、膠原含量測定等系列指標來觀察RSG對BLM所致大鼠肺纖維化的作用。 方法60只SD(♂)健康大鼠隨機分成二大組:14天和28天組。14天分為4組:Control組、B+NS14組、B+R14組、R14組,28天分為6組:Control組、B+NS28組、B+R14N14組、B+N14R14組、B+R28組、R28組。每組6只。除Control和R組外各組均向大鼠氣管內(nèi)一次性滴注BLM-A5(5 mg·kg-1)造模,Control和R組氣管內(nèi)注入等體積的生理鹽水(normal saline, NS)。造模后第一天分別給各組大鼠灌胃以NS、RSG。RSG溶于NS中,制成混懸液,按3 mg·kg-1·d-1給藥;NS為2ml·d-1。B+NS組為模型組,造模后給以NS;B+R組為治療組,造模后以按不同時間點給以RSG,其中B+R14N14組為前14天給RSG,后14天給NS;B+N14R14組為前14天給NS,后14天給RSG;B+R28組28天全程給藥;R組氣管內(nèi)注入NS后給予RSG。Control為正常對照組,氣管內(nèi)注入NS后以NS每日灌胃。各組分別于造模后第14、28天取材,常規(guī)固定包埋左肺用于形態(tài)學染色,冰凍保存右肺用于羥脯氨酸含量測定。所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(x±s)表示,采用SPSS-13.0統(tǒng)計軟件,采用單因素方差分析,多個樣本均數(shù)間的兩兩比較用最小顯著差法,以P0.05作為判斷差異顯著性的標準。 結果RSG治療各組動物一般生存狀態(tài)及肺組織肉眼外觀形態(tài)觀察均好于模型組。肺組織病理學觀察顯示,模型組14天和28天大鼠肺組織炎細胞浸潤、間質(zhì)成纖維細胞增生明顯,肺泡炎和肺纖維化損傷程度分級明顯高于對照組(P0.01),RSG治療各組較模型組肺損傷程度明顯減輕(P0.01)。Masson染色顯示模型組被染為亮綠色的膠原纖維較對照組顯著增多(P0.01),并局部形成綠色的纖維團塊,RSG治療各組膠原染色面積較模型組顯著減少(P 0.01)。R14組與Control組比較無差別。 羥脯氨酸含量(膠原含量)測定顯示:模型組肺組織羥脯氨酸含量與對照組比較顯著升高(P0.01),B+R14N14及B+N14R14組都較模型組降低,相比有顯著意義(P 0.01)。R28組羥脯氨酸含量較對照組無差別。 由以上結果可以得出,氣管滴注BLM能成功誘發(fā)大鼠肺纖維化模型,RSG(3 mg·kg~(-1)·d~(-1))對肺纖維化不同進展期進行干預,均具有一定的治療作用。 2. RSG對肺纖維化大鼠肥大細胞的影響 目的傳統(tǒng)觀念認為,肥大細胞(mast cells, MCs)參與IgE介導的過敏性反應。近來多有文獻報道, MCs及其釋放的介質(zhì)在肺纖維化中發(fā)揮重要作用。本部分實驗通過觀察RSG對肺纖維化大鼠MCs的影響,旨在探討MCs在肺纖維化中的作用及RSG抗肺纖維化的作用機制。 方法動物實驗分組及標本采集同第一部分。肥大細胞用甲苯胺藍特殊染色。采用單盲法,每張切片隨機選取10個高倍不重疊視野,準確計數(shù)陽性細胞數(shù),取平均值。 結果正常大鼠肺組織肥大細胞很少,主要分布于血管周圍疏松結締組織及胸膜附近;模型組14d肺組織MC數(shù)量較對照組明顯增多(P0.01),在實變的肺間質(zhì)及血管周圍分布密集,體積變大,胞漿內(nèi)充滿嗜堿性顆粒,且能觀察到細胞脫顆�，F(xiàn)象。至28d肺組織MC數(shù)量更多,光鏡下見肺間質(zhì)中尤以纖維化區(qū)域MC密集分布,脫顆�，F(xiàn)象活躍。血管旁結締組織增寬,其中散在MC增多,沿胸膜分布的MC也增多,肺泡腔中偶見MC。RSG治療各組MC數(shù)量較模型組明顯減少,僅在血管旁結締組織中增多,肺間質(zhì)中MC數(shù)量并不多(P0.05;P0.01),R組與Control組比較無差別。 以上結果表明,BLM誘導的大鼠肺纖維化肺組織中肥大細胞明顯增多,提示肥大細胞與肺纖維化關系密切; RSG通過抑制肥大細胞增生從而減少其釋放的介質(zhì)而減緩纖維化,可能為其抗肺纖維化的作用機制之一。 3. RSG對肺纖維化大鼠TGF-β、CTGF的影響 目的細胞因子網(wǎng)絡失衡是肺纖維化形成發(fā)展的重要機制之一。目前已知在參與肺纖維化形成的各種細胞因子中,轉化生長因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是最重要的強效致纖維化作用因子,在ECM生成和沉積調(diào)節(jié)中起關鍵作用。其下游作用因子結締組織生長因子(connective tissue growth factor,CTGF)是近年發(fā)現(xiàn)的一種新的可刺激成纖維細胞增殖和分泌膠原的生長因子,其過度表達與某些增生性及纖維化疾病的發(fā)生發(fā)展關系密切。二者均能刺激成纖維細胞(fibroblast,Fb)向肌成纖維細胞(myofibroblast,MFb)轉化。Fb轉化為MFb是肺纖維化發(fā)展的關鍵步驟。MFb表達平滑肌肌動蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA),因而α-SMA可作為判斷細胞表型改變或MFb的特征性標志。文獻報道RSG能阻斷TGF-β誘導的人肺肌成纖維細胞分化和過量膠原產(chǎn)生,那么我們推測RSG防治肺纖維化的作用與TGF-β及CTGF有關。前面實驗已經(jīng)證實RSG對肺纖維化中MC具有影響, MC表達TGF-β與CTGF,但在BLM誘導的大鼠肺纖維化中它們之間關系如何尚無報道。順著這一研究思路,本部分實驗采用肺組織連續(xù)切片,用免疫組織化學方法及甲苯胺蘭染色觀察RSG對BLM致肺纖維化大鼠肺組織中TGF-β_1、CTGF、α-SMA、MC的表達情況,以期能更好地研究四者在肺纖維化中的作用及它們之間的相互關系,進一步闡明RSG抗肺纖維化的作用機制。 方法動物實驗分組及標本采集同第一部分。用免疫組織化學方法觀察大鼠肺組織中TGF-β_1、CTGF、α-SMA的表達情況,MC用甲苯胺蘭染色。采用單盲法,每張切片隨機選取10個高倍不重疊視野,JEDA-801D形態(tài)學圖像分析系統(tǒng)自動選取染為棕黃色的陽性區(qū)域,計算平均光密度值及陽性區(qū)域面積百分比。 結果TGF-β_1:對照組及R組大鼠肺間質(zhì)未見明顯表達,僅在支氣管上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞弱表達。模型組TGF-β_1表達明顯增多,主要位于支氣管上皮細胞、成纖維細胞、肥大細胞、血管內(nèi)皮細胞、肺泡巨噬細胞等細胞的胞漿中,與Control組相差非常顯著(P0.01)。B+R治療各組TGF-β_1表達部位同模型組,但表達明顯減少(P0.05,P0.01),R組TGF-β_1表達較Control組無差別。 CTGF:對照組及R組大鼠肺組織中CTGF表達弱到無,僅在支氣管上皮細胞弱表達。模型組CTGF表達明顯增多,部位與TGF-β_1趨于一致,主要位于支氣管上皮細胞、成纖維細胞、肥大細胞、Ⅱ型肺泡上皮細胞及肺泡巨噬細胞中,與對照組相差顯著(P0.01)。B+R治療各組CTGF表達部位同模型組,但表達水平明顯減弱(P0.05,P0.01),R組CTGF表達較Control組無差別。 α-SMA:對照組及R組α-SMA表達在肺血管內(nèi)壁及支氣管壁平滑肌上,肺實質(zhì)未見明顯表達。模型組除血管壁及支氣管壁平滑肌表達α-SMA外,肺泡壁、增厚的肺泡間隔中表達也明顯增多,與對照組相差顯著(P0.01)。B+R治療各組α-SMA表達也增多,但介于對照組及模型組之間,與模型組比較有意義(P0.05,P0.01),R組α-SMA表達與Control組比較無差別。 BLM所致肺纖維化大鼠肺組織中TGF-β_1、CTGF、α-SMA表達明顯上調(diào),MFb、MC大量表達TGF-β_1、CTGF,提示TGF-β_1、CTGF、MFb、MC四者相互聯(lián)系、相互影響,與肺纖維化發(fā)生發(fā)展關系密切。RSG通過抑制肺組織Fb轉化為MFb,降低CTGF蛋白的表達,進一步影響TGF-β、的活性,從而減少ECM過度沉積,可能是RSG防治肺纖維化的作用機制之一。 結論 1.氣管滴注BLM能成功誘發(fā)大鼠肺纖維化模型,RSG3mg·kg~(-1)·d~(-1)對不同進展期肺纖維化進行干預,均具有一定的治療作用。 2. BLM所致肺纖維化大鼠肺組織中肥大細胞明顯增加,RSG通過抑制肥大細胞增生從而減少其釋放的介質(zhì)而減緩纖維化,可能為其抗肺纖維化的作用機制之一。 3. BLM所致肺纖維化大鼠肺組織中TGF-β_1、CTGF、α-SMA表達明顯上調(diào),MFb、MC大量表達TGF-β_1、CTGF,提示TGF-β_1、CTGF、MFb、MC四者相互聯(lián)系、相互影響,與肺纖維化發(fā)生發(fā)展關系密切。RSG通過抑制肺組織Fb轉化為MFb,降低CTGF蛋白的表達,進一步影響TGF-β的活性,從而減少ECM過度沉積,可能是RSG防治肺纖維化的作用機制之一。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R563.9

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉維佳;韓婧;姚紅梅;李萬成;;羅格列酮對大鼠肺纖維化的作用[J];貴州醫(yī)藥;2011年03期

2 劉維佳;韓婧;張湘燕;李萬成;;肺纖維化中過氧化物酶體增殖物激活受體γ的參與機制研究[J];廣東醫(yī)學;2011年14期

3 張曉光;劉新民;;PPAR-γ激動劑羅格列酮能抑制纖維連接蛋白誘導的肺成纖維細胞向肌成纖維細胞轉化[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2010年07期

4 劉華雷;穆維新;沈亞欣;崔世杰;王綿;劉光;秦明垎;耿志強;;糖尿病大鼠肺組織中TGF-β_1的表達變化及羅格列酮的作用[J];河北醫(yī)藥;2011年07期

5 蔣莉;張國俊;邢麗華;陳奎生;高冠民;王華啟;王建輝;;羅格列酮對肺纖維化大鼠TGF-β_1表達的影響[J];山東醫(yī)藥;2008年19期

6 石俊青;謝敏;;PPARγ與肺纖維化[J];四川醫(yī)學;2008年02期

7 劉維佳;劉琳;張湘燕;饒珊珊;;過氧化物酶體增殖物激活受體γ及其配體調(diào)節(jié)大鼠肺纖維化的作用機制[J];山東醫(yī)藥;2011年21期

8 黃暉,劉鵬鷹;羅格列酮治療2型糖尿病的臨床療效[J];廣東醫(yī)學;2004年10期

9 王煉煉,丘彥,白曉蘇,桂文武,幸貴邦,劉宏,房磊臣;羅格列酮改善PCOS患者的生殖和內(nèi)分泌功能[J];重慶醫(yī)科大學學報;2005年03期

10 張寅飛;;二甲雙胍和羅格列酮在代謝綜合征中療效比較[J];上海醫(yī)學;2006年07期

相關會議論文 前10條

1 陳曉麗;肖奇明;;羅格列酮聯(lián)合地塞米松上調(diào)GR減緩博萊霉素誘導的大鼠肺纖維化[A];中華醫(yī)學會第三屆全國間質(zhì)性肺病暨彌漫性泛細支氣管炎學術會議論文匯編[C];2010年

2 賀夏紅;肖奇明;胡成平;;羅格列酮和地塞米松對博萊霉素誘導肺纖維化中Caveolin-1表達的影響[A];中華醫(yī)學會第三屆全國間質(zhì)性肺病暨彌漫性泛細支氣管炎學術會議論文匯編[C];2010年

3 趙清;魏盟;趙炳輝;;磁共振影像評估羅格列酮對動脈粥樣硬化的影響及機制的研究[A];中華醫(yī)學會第11次心血管病學術會議論文摘要集[C];2009年

4 肖淑華;魏廣力;陸榕;劉昌孝;;羅格列酮Beagle狗的生物利用度試驗[A];中國制藥工業(yè)藥理學會20周年學術會議論文集[C];2002年

5 白悅心;袁慧娟;孫良閣;翟紹忠;栗夏蓮;李金發(fā);張會娟;余勤;鄭麗麗;;羅格列酮治療多囊卵巢綜合征[A];全國首屆代謝綜合征的基礎與臨床專題學術會議論文匯編[C];2004年

6 施輝;潘金林;蔣季杰;錢桐蓀;;羅格列酮對高糖培養(yǎng)的大鼠系膜細胞增殖及p27表達的影響[A];中華醫(yī)學會腎臟病學分會2006年學術年會論文集[C];2006年

7 辛建保;向菲;汪世灝;馬萬里;;黃芪對肺纖維化大鼠MMP-2和TIMP-1的表達的影響[A];第七次全國中西醫(yī)結合呼吸病學術交流大會論文匯編（一）[C];2004年

8 肖新華;周云;張煥莉;祖旭宇;鐘警;曹仁賢;劉江華;文格波;;羅格列酮和腫瘤壞死因子α對脂肪細胞線粒體生物合成相關基因及ZAG表達的影響[A];中華醫(yī)學會第十次全國內(nèi)分泌學學術會議論文匯編[C];2011年

9 楊s

本文編號：2723340