【摘要】： 特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一種原因不明的,以彌漫性肺泡炎、肺泡單位結(jié)構(gòu)紊亂和最終導(dǎo)致肺纖維化為特征的進(jìn)行性間質(zhì)性肺疾病。其發(fā)病率和死亡率都很高,且確切機(jī)制尚不明確。目前IPF治療主要圍繞糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑/細(xì)胞毒藥物等,其療效并不十分滿意。因此,加強(qiáng)對(duì)肺纖維化發(fā)病機(jī)制的研究及尋找新的有效藥物,具有非常重要的臨床意義。 羅格列酮(rosiglitazone,RSG)屬于噻唑烷二酮類藥物,是過氧化物酶體增殖活化受體γ(peroxisome proliferator- activated receptor-gamma,PPAR-γ)的合成配體,臨床多用于糖尿病的治療。近年研究表明PPARγ及其配體除具有降血脂、血糖等代謝調(diào)節(jié)作用,還具有抑制中性粒細(xì)胞等抗炎活性,且能減緩臟器纖維化。作為PPARγ高親和力配體之一的RSG是否對(duì)肺纖維化具有作用,目前尚無報(bào)道。為此,本實(shí)驗(yàn)采用大鼠氣管內(nèi)注入鹽酸博萊霉素(bleomycin,BLM)的方法復(fù)制與人肺間質(zhì)纖維化病理過程相似的動(dòng)物模型,用RSG進(jìn)行治療,觀察其療效,并進(jìn)一步從RSG對(duì)肺纖維化大鼠肥大細(xì)胞、致纖維化作用因子TGF-β、CTGF的影響來探討其抗肺纖維化的作用機(jī)理,以期為臨床防治肺纖維化提出新的治療藥物并提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 1. RSG對(duì)BLM所致大鼠肺纖維化的影響 目的各種致病因素造成的肺組織炎癥損傷為肺纖維化的首發(fā)因素,炎癥誘發(fā)肺泡上皮正常重構(gòu)失敗,膠原等細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)成分堆積過多。文獻(xiàn)報(bào)道RSG對(duì)內(nèi)毒素所致的急性肺損傷具有保護(hù)作用,還可抑制肺成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原的分泌,從而我們推測(cè)它是否能通過抑制肺炎癥及減少膠原的產(chǎn)生對(duì)肺纖維化產(chǎn)生影響,本部分實(shí)驗(yàn)通過對(duì)肺組織形態(tài)學(xué)染色、膠原含量測(cè)定等系列指標(biāo)來觀察RSG對(duì)BLM所致大鼠肺纖維化的作用。 方法60只SD(♂)健康大鼠隨機(jī)分成二大組:14天和28天組。14天分為4組:Control組、B+NS14組、B+R14組、R14組,28天分為6組:Control組、B+NS28組、B+R14N14組、B+N14R14組、B+R28組、R28組。每組6只。除Control和R組外各組均向大鼠氣管內(nèi)一次性滴注BLM-A5(5 mg·kg-1)造模,Control和R組氣管內(nèi)注入等體積的生理鹽水(normal saline, NS)。造模后第一天分別給各組大鼠灌胃以NS、RSG。RSG溶于NS中,制成混懸液,按3 mg·kg-1·d-1給藥;NS為2ml·d-1。B+NS組為模型組,造模后給以NS;B+R組為治療組,造模后以按不同時(shí)間點(diǎn)給以RSG,其中B+R14N14組為前14天給RSG,后14天給NS;B+N14R14組為前14天給NS,后14天給RSG;B+R28組28天全程給藥;R組氣管內(nèi)注入NS后給予RSG。Control為正常對(duì)照組,氣管內(nèi)注入NS后以NS每日灌胃。各組分別于造模后第14、28天取材,常規(guī)固定包埋左肺用于形態(tài)學(xué)染色,冰凍保存右肺用于羥脯氨酸含量測(cè)定。所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,采用SPSS-13.0統(tǒng)計(jì)軟件,采用單因素方差分析,多個(gè)樣本均數(shù)間的兩兩比較用最小顯著差法,以P0.05作為判斷差異顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果RSG治療各組動(dòng)物一般生存狀態(tài)及肺組織肉眼外觀形態(tài)觀察均好于模型組。肺組織病理學(xué)觀察顯示,模型組14天和28天大鼠肺組織炎細(xì)胞浸潤(rùn)、間質(zhì)成纖維細(xì)胞增生明顯,肺泡炎和肺纖維化損傷程度分級(jí)明顯高于對(duì)照組(P0.01),RSG治療各組較模型組肺損傷程度明顯減輕(P0.01)。Masson染色顯示模型組被染為亮綠色的膠原纖維較對(duì)照組顯著增多(P0.01),并局部形成綠色的纖維團(tuán)塊,RSG治療各組膠原染色面積較模型組顯著減少(P 0.01)。R14組與Control組比較無差別。 羥脯氨酸含量(膠原含量)測(cè)定顯示:模型組肺組織羥脯氨酸含量與對(duì)照組比較顯著升高(P0.01),B+R14N14及B+N14R14組都較模型組降低,相比有顯著意義(P 0.01)。R28組羥脯氨酸含量較對(duì)照組無差別。 由以上結(jié)果可以得出,氣管滴注BLM能成功誘發(fā)大鼠肺纖維化模型,RSG(3 mg·kg~(-1)·d~(-1))對(duì)肺纖維化不同進(jìn)展期進(jìn)行干預(yù),均具有一定的治療作用。 2. RSG對(duì)肺纖維化大鼠肥大細(xì)胞的影響 目的傳統(tǒng)觀念認(rèn)為,肥大細(xì)胞(mast cells, MCs)參與IgE介導(dǎo)的過敏性反應(yīng)。近來多有文獻(xiàn)報(bào)道, MCs及其釋放的介質(zhì)在肺纖維化中發(fā)揮重要作用。本部分實(shí)驗(yàn)通過觀察RSG對(duì)肺纖維化大鼠MCs的影響,旨在探討MCs在肺纖維化中的作用及RSG抗肺纖維化的作用機(jī)制。 方法動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組及標(biāo)本采集同第一部分。肥大細(xì)胞用甲苯胺藍(lán)特殊染色。采用單盲法,每張切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍不重疊視野,準(zhǔn)確計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù),取平均值。 結(jié)果正常大鼠肺組織肥大細(xì)胞很少,主要分布于血管周圍疏松結(jié)締組織及胸膜附近;模型組14d肺組織MC數(shù)量較對(duì)照組明顯增多(P0.01),在實(shí)變的肺間質(zhì)及血管周圍分布密集,體積變大,胞漿內(nèi)充滿嗜堿性顆粒,且能觀察到細(xì)胞脫顆粒現(xiàn)象。至28d肺組織MC數(shù)量更多,光鏡下見肺間質(zhì)中尤以纖維化區(qū)域MC密集分布,脫顆粒現(xiàn)象活躍。血管旁結(jié)締組織增寬,其中散在MC增多,沿胸膜分布的MC也增多,肺泡腔中偶見MC。RSG治療各組MC數(shù)量較模型組明顯減少,僅在血管旁結(jié)締組織中增多,肺間質(zhì)中MC數(shù)量并不多(P0.05;P0.01),R組與Control組比較無差別。 以上結(jié)果表明,BLM誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化肺組織中肥大細(xì)胞明顯增多,提示肥大細(xì)胞與肺纖維化關(guān)系密切; RSG通過抑制肥大細(xì)胞增生從而減少其釋放的介質(zhì)而減緩纖維化,可能為其抗肺纖維化的作用機(jī)制之一。 3. RSG對(duì)肺纖維化大鼠TGF-β、CTGF的影響 目的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡是肺纖維化形成發(fā)展的重要機(jī)制之一。目前已知在參與肺纖維化形成的各種細(xì)胞因子中,轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是最重要的強(qiáng)效致纖維化作用因子,在ECM生成和沉積調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用。其下游作用因子結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor,CTGF)是近年發(fā)現(xiàn)的一種新的可刺激成纖維細(xì)胞增殖和分泌膠原的生長(zhǎng)因子,其過度表達(dá)與某些增生性及纖維化疾病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。二者均能刺激成纖維細(xì)胞(fibroblast,Fb)向肌成纖維細(xì)胞(myofibroblast,MFb)轉(zhuǎn)化。Fb轉(zhuǎn)化為MFb是肺纖維化發(fā)展的關(guān)鍵步驟。MFb表達(dá)平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA),因而α-SMA可作為判斷細(xì)胞表型改變或MFb的特征性標(biāo)志。文獻(xiàn)報(bào)道RSG能阻斷TGF-β誘導(dǎo)的人肺肌成纖維細(xì)胞分化和過量膠原產(chǎn)生,那么我們推測(cè)RSG防治肺纖維化的作用與TGF-β及CTGF有關(guān)。前面實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)RSG對(duì)肺纖維化中MC具有影響, MC表達(dá)TGF-β與CTGF,但在BLM誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化中它們之間關(guān)系如何尚無報(bào)道。順著這一研究思路,本部分實(shí)驗(yàn)采用肺組織連續(xù)切片,用免疫組織化學(xué)方法及甲苯胺蘭染色觀察RSG對(duì)BLM致肺纖維化大鼠肺組織中TGF-β_1、CTGF、α-SMA、MC的表達(dá)情況,以期能更好地研究四者在肺纖維化中的作用及它們之間的相互關(guān)系,進(jìn)一步闡明RSG抗肺纖維化的作用機(jī)制。 方法動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組及標(biāo)本采集同第一部分。用免疫組織化學(xué)方法觀察大鼠肺組織中TGF-β_1、CTGF、α-SMA的表達(dá)情況,MC用甲苯胺蘭染色。采用單盲法,每張切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍不重疊視野,JEDA-801D形態(tài)學(xué)圖像分析系統(tǒng)自動(dòng)選取染為棕黃色的陽性區(qū)域,計(jì)算平均光密度值及陽性區(qū)域面積百分比。 結(jié)果TGF-β_1:對(duì)照組及R組大鼠肺間質(zhì)未見明顯表達(dá),僅在支氣管上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞弱表達(dá)。模型組TGF-β_1表達(dá)明顯增多,主要位于支氣管上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、肥大細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞等細(xì)胞的胞漿中,與Control組相差非常顯著(P0.01)。B+R治療各組TGF-β_1表達(dá)部位同模型組,但表達(dá)明顯減少(P0.05,P0.01),R組TGF-β_1表達(dá)較Control組無差別。 CTGF:對(duì)照組及R組大鼠肺組織中CTGF表達(dá)弱到無,僅在支氣管上皮細(xì)胞弱表達(dá)。模型組CTGF表達(dá)明顯增多,部位與TGF-β_1趨于一致,主要位于支氣管上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、肥大細(xì)胞、Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞及肺泡巨噬細(xì)胞中,與對(duì)照組相差顯著(P0.01)。B+R治療各組CTGF表達(dá)部位同模型組,但表達(dá)水平明顯減弱(P0.05,P0.01),R組CTGF表達(dá)較Control組無差別。 α-SMA:對(duì)照組及R組α-SMA表達(dá)在肺血管內(nèi)壁及支氣管壁平滑肌上,肺實(shí)質(zhì)未見明顯表達(dá)。模型組除血管壁及支氣管壁平滑肌表達(dá)α-SMA外,肺泡壁、增厚的肺泡間隔中表達(dá)也明顯增多,與對(duì)照組相差顯著(P0.01)。B+R治療各組α-SMA表達(dá)也增多,但介于對(duì)照組及模型組之間,與模型組比較有意義(P0.05,P0.01),R組α-SMA表達(dá)與Control組比較無差別。 BLM所致肺纖維化大鼠肺組織中TGF-β_1、CTGF、α-SMA表達(dá)明顯上調(diào),MFb、MC大量表達(dá)TGF-β_1、CTGF,提示TGF-β_1、CTGF、MFb、MC四者相互聯(lián)系、相互影響,與肺纖維化發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。RSG通過抑制肺組織Fb轉(zhuǎn)化為MFb,降低CTGF蛋白的表達(dá),進(jìn)一步影響TGF-β、的活性,從而減少ECM過度沉積,可能是RSG防治肺纖維化的作用機(jī)制之一。 結(jié)論 1.氣管滴注BLM能成功誘發(fā)大鼠肺纖維化模型,RSG3mg·kg~(-1)·d~(-1)對(duì)不同進(jìn)展期肺纖維化進(jìn)行干預(yù),均具有一定的治療作用。 2. BLM所致肺纖維化大鼠肺組織中肥大細(xì)胞明顯增加,RSG通過抑制肥大細(xì)胞增生從而減少其釋放的介質(zhì)而減緩纖維化,可能為其抗肺纖維化的作用機(jī)制之一。 3. BLM所致肺纖維化大鼠肺組織中TGF-β_1、CTGF、α-SMA表達(dá)明顯上調(diào),MFb、MC大量表達(dá)TGF-β_1、CTGF,提示TGF-β_1、CTGF、MFb、MC四者相互聯(lián)系、相互影響,與肺纖維化發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。RSG通過抑制肺組織Fb轉(zhuǎn)化為MFb,降低CTGF蛋白的表達(dá),進(jìn)一步影響TGF-β的活性,從而減少ECM過度沉積,可能是RSG防治肺纖維化的作用機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R563.9

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉維佳;韓婧;姚紅梅;李萬成;;羅格列酮對(duì)大鼠肺纖維化的作用[J];貴州醫(yī)藥;2011年03期

2 劉維佳;韓婧;張湘燕;李萬成;;肺纖維化中過氧化物酶體增殖物激活受體γ的參與機(jī)制研究[J];廣東醫(yī)學(xué);2011年14期

3 張曉光;劉新民;;PPAR-γ激動(dòng)劑羅格列酮能抑制纖維連接蛋白誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年07期

4 劉華雷;穆維新;沈亞欣;崔世杰;王綿;劉光;秦明垎;耿志強(qiáng);;糖尿病大鼠肺組織中TGF-β_1的表達(dá)變化及羅格列酮的作用[J];河北醫(yī)藥;2011年07期

5 蔣莉;張國(guó)俊;邢麗華;陳奎生;高冠民;王華啟;王建輝;;羅格列酮對(duì)肺纖維化大鼠TGF-β_1表達(dá)的影響[J];山東醫(yī)藥;2008年19期

6 石俊青;謝敏;;PPARγ與肺纖維化[J];四川醫(yī)學(xué);2008年02期

7 劉維佳;劉琳;張湘燕;饒珊珊;;過氧化物酶體增殖物激活受體γ及其配體調(diào)節(jié)大鼠肺纖維化的作用機(jī)制[J];山東醫(yī)藥;2011年21期

8 黃暉,劉鵬鷹;羅格列酮治療2型糖尿病的臨床療效[J];廣東醫(yī)學(xué);2004年10期

9 王煉煉,丘彥,白曉蘇,桂文武,幸貴邦,劉宏,房磊臣;羅格列酮改善PCOS患者的生殖和內(nèi)分泌功能[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2005年03期

10 張寅飛;;二甲雙胍和羅格列酮在代謝綜合征中療效比較[J];上海醫(yī)學(xué);2006年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 陳曉麗;肖奇明;;羅格列酮聯(lián)合地塞米松上調(diào)GR減緩博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第三屆全國(guó)間質(zhì)性肺病暨彌漫性泛細(xì)支氣管炎學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 賀夏紅;肖奇明;胡成平;;羅格列酮和地塞米松對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)肺纖維化中Caveolin-1表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第三屆全國(guó)間質(zhì)性肺病暨彌漫性泛細(xì)支氣管炎學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

3 趙清;魏盟;趙炳輝;;磁共振影像評(píng)估羅格列酮對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的影響及機(jī)制的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第11次心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

4 肖淑華;魏廣力;陸榕;劉昌孝;;羅格列酮Beagle狗的生物利用度試驗(yàn)[A];中國(guó)制藥工業(yè)藥理學(xué)會(huì)20周年學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2002年

5 白悅心;袁慧娟;孫良閣;翟紹忠;栗夏蓮;李金發(fā);張會(huì)娟;余勤;鄭麗麗;;羅格列酮治療多囊卵巢綜合征[A];全國(guó)首屆代謝綜合征的基礎(chǔ)與臨床專題學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

6 施輝;潘金林;蔣季杰;錢桐蓀;;羅格列酮對(duì)高糖培養(yǎng)的大鼠系膜細(xì)胞增殖及p27表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

7 辛建保;向菲;汪世灝;馬萬里;;黃芪對(duì)肺纖維化大鼠MMP-2和TIMP-1的表達(dá)的影響[A];第七次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合呼吸病學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文匯編（一）[C];2004年

8 肖新華;周云;張煥莉;祖旭宇;鐘警;曹仁賢;劉江華;文格波;;羅格列酮和腫瘤壞死因子α對(duì)脂肪細(xì)胞線粒體生物合成相關(guān)基因及ZAG表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

9 楊s

本文編號(hào)：2723340