【摘要】：目的糖蛋白A主導(dǎo)重復(fù)序列(Glycoprotein A repetitions predominant,GARP)是近年來發(fā)現(xiàn)的表達(dá)于活化調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cells,Treg)上的特異性標(biāo)記物。通過檢測慢性阻塞性肺疾病急性加重期(Acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease AECOPD)患者、肺功能正常吸煙者以及健康非吸煙者外周循環(huán)中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞GARP表達(dá)的情況,評估Treg細(xì)胞的功能變化,探討使用這一新的標(biāo)記物是否會(huì)得出與以往研究不同的結(jié)論,分析GARP在COPD急性加重過程中的作用機(jī)制,探討GARP的變化對效應(yīng)T細(xì)胞活化的影響,為吸煙引起COPD急性加重的發(fā)生機(jī)制提供免疫方面的依據(jù)。方法選取住院AECOPD患者20例、體檢肺功能正常的吸煙者20例以及健康非吸煙者20例,采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR(Real Time PCR)技術(shù)檢測外周血Foxp3和GARP mRNA的表達(dá)水平。流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytomertry,FCM)檢測外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、活化調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、效應(yīng)T細(xì)胞(Teff)的表達(dá)水平。外周血細(xì)胞因子IL-10、TGF-β的表達(dá)水平用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測。結(jié)果1.Real Time PCR結(jié)果顯示:AECOPD組外周血Foxp3 mRNA水平明顯高于健康非吸煙組,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。吸煙組外周血Foxp3 mRNA水平高于健康非吸煙組,低于AECOPD組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05。AECOPD組外周血GARP mRNA水平明顯高于吸煙組和健康非吸煙組,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而吸煙組和健康非吸煙組之間無明顯差異,P0.05。2.FCM結(jié)果顯示:⑴效應(yīng)T細(xì)胞的比例:無論是CD4~+CD69~+T效應(yīng)細(xì)胞還是CD8~+CD69~+T效應(yīng)細(xì)胞,在AECOPD組、吸煙組以及健康非吸煙組之間都沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05。CD4~+HLA-DR~+T和CD8~+HLA-DR~+T效應(yīng)細(xì)胞的比例在健康非吸煙組、吸煙組和AECOPD組之間呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢,AECOPD組與健康非吸煙組、吸煙組相比顯著升高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而吸煙組和健康非吸煙組相比無明顯變化,P0.05。⑵Treg細(xì)胞的比例:CD4~+CD25~+CD127~(low)Foxp3~+T細(xì)胞的比例在健康非吸煙組、吸煙組和AECOPD組呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢,AECOPD組與其他兩組比較明顯升高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而吸煙組與健康非吸煙組相比無差異,P0.05。⑶活化Treg細(xì)胞的比例:CD4~+Foxp3~+GARP~+T細(xì)胞的比例在AECOPD組顯著增高,與另兩組比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05,而吸煙組與健康非吸煙組相比無差異,P0.05。3.ELISA結(jié)果顯示:⑴IL-10的分泌水平:AECOPD組血清IL-10含量明顯高于吸煙組和健康非吸煙組,P0.001。吸煙組和健康非吸煙組比較無明顯差異,P0.05。⑵TGF-β的分泌水平:血清TGF-β含量在AECOPD組顯著升高,與另兩組比較均有明顯差異,P0.001。吸煙組和健康非吸煙組相比無明顯差異,P0.05。結(jié)論以GARP作為活化Treg的特異性標(biāo)記物,與以往用Foxp3標(biāo)記Treg細(xì)胞得到的結(jié)果一致,AE COPD患者體內(nèi)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量增多。但是GARP反應(yīng)的是活化Treg的量,比Foxp3更能反應(yīng)Treg細(xì)胞在COPD急性加重過程中的作用機(jī)制。在COPD急性加重過程中,炎癥反應(yīng)加劇,效應(yīng)T細(xì)胞數(shù)量急劇升高,代償性引起Treg細(xì)胞活化數(shù)量增多,抑制炎癥反應(yīng),對COPD急性加重的預(yù)后產(chǎn)生有利的影響。
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R563.9
【圖文】：

圖 1. RNA 電泳圖根據(jù) RNA 電泳圖可以判定從 PBMC 中提取的 RNA 是完整的。2.2 Real Time PCR 檢測外周血 Foxp3 mRNA 的表達(dá)水平

RealTimePCR檢測外周血Foxp3mRNA的擴(kuò)增、溶解曲線

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 包鶴齡;方利文;王臨虹;;1990-2014年中國40歲及以上人群慢性阻塞性肺疾病患病率Meta分析[J];中華流行病學(xué)雜志;2016年01期

2 邱潔;張雅囡;陳娟;羅濤;于獻(xiàn)華;王繼春;譚海;陸學(xué)蘭;張錦;;寧夏回族自治區(qū)慢性阻塞性肺疾病流行病學(xué)調(diào)查分析[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2013年04期

本文編號(hào)：2716149