【摘要】：目的：機(jī)械通氣是治療急性呼吸衰竭(Acute Respiratory Failure, ARF)/急性呼吸窘迫綜合癥(Acute Respiratory Distress Syndrome, ARDS)的一種有效手段。但機(jī)械通氣在發(fā)揮治療作用的同時,也可能會導(dǎo)致呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷(Ventilator-induced Lung Injury, VILI)的發(fā)生,已有報道其發(fā)生率為13%～35%,病死率可達(dá)31%。常頻機(jī)械通氣(Conventional Mechanical Ventilation, CMV)治療時常有VILI發(fā)生,為減輕VILI并獲得更好的氧合,不斷研發(fā)了新型呼吸支持技術(shù)：高頻振蕩通氣(High Frequency Oscillatory Ventilation,HFOV)、部分液體通氣(Partial Liquid Ventilation, PLV)等。國內(nèi)外對成年動物VILI研究較多,與CMV比較,無論是HFOV,還是PLV都可以減輕VILI.隨著對VILI研究的深入,肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(TypeⅡAlveolar Epithelium Cell, AECⅡ)在VILI修復(fù)中的作用漸引起人們的高度重視,肺損傷后AECⅡ的數(shù)量、質(zhì)量是患兒能否盡快恢復(fù)的關(guān)健所在。到目前為止,尚未見CMV、HFOV、PLV三種通氣方式VILI共同研究的報告,特別是新生動物VILI研究的報告。采用完全隨機(jī)設(shè)計,對18只新生豬進(jìn)行CMV、HFOV、PLV三種方式通氣24小時,通過檢測支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid, BALF)中炎癥因子、肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A (Pulmonary Surfactant associated Protein, SP-A)表達(dá)水平,探討不同機(jī)械通氣方式與肺部炎癥反應(yīng)的關(guān)系。通過免疫熒光方法及電子顯微鏡等技術(shù)手段定量及定性觀察AECⅡ數(shù)量和形態(tài),探討不同機(jī)械通氣方式對AECⅡ的影響。 方法： 1.研究內(nèi)容：CMV、HFOV、PLV三種機(jī)械通氣方式對急性肺損傷(Acute Lung Injury, ALI)新生豬氧合指數(shù)(Oxygenation Index,OI)、血流動力學(xué),BALF炎癥因子、SP-A及AECⅡ形態(tài)學(xué)的影響 2.研究方法： 2.1動物預(yù)處理18只出生3天內(nèi)的新生豬經(jīng)麻醉后氣管切開、插管,連接MAQUET Servo-i呼吸機(jī),進(jìn)行壓力控制通氣。股動脈插管連續(xù)監(jiān)測動脈血壓變化。預(yù)處理操作結(jié)束后通氣30分鐘,測量血氣、動脈血壓、心率、并計算OI、平均動脈壓(MABP),作為基礎(chǔ)值。 2.2 AL I動物模型的建立所有模型建立過程均在CMV方式下進(jìn)行。經(jīng)氣管導(dǎo)管向氣管內(nèi)注入37℃生理鹽水35ml/kg,停留約10s吸出肺內(nèi)生理鹽水,間隔5mmin后重復(fù)操作。在吸入氧濃度為1.0的條件下直至動脈血氣分析PaO2100mmHg,并維持1h即認(rèn)為模型制備成功。 2.3實驗動物分組將18只新生豬隨機(jī)分為4組。 對照組(n=3)：ALI對照組,ALI模型制備成功后不予機(jī)械通氣,即處死動物。 CMV組(n=6)：動物均連接MAQUET Servo-i(?)乎吸機(jī),進(jìn)行壓力控制通氣,常頻機(jī)械通氣治療24h,處死動物。 HFOV組(n=6)：動物模型制備成功后,轉(zhuǎn)換為連接SLE5000呼吸機(jī),進(jìn)行高頻振蕩通氣治療24h,處死動物。 PLV組(n=3)：動物模型制備成功后,10分鐘內(nèi)向氣管導(dǎo)管內(nèi)灌注37℃的高氟化碳(Perfluorcarbon, PFC) 18ml/kg,并定時追加。連接MAQUET Servo-i呼吸機(jī),進(jìn)行壓力控制通氣24小時,處死動物。 2.4觀察指標(biāo) (1)建模前、ALI 0h、6h、12h、18h、24h分別監(jiān)測以下指標(biāo)：動脈血氣分析、動脈血壓及心率,并計算OI、P/F、MABP。 (2)用ELISA方法檢測支氣管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-8、IL-1、SP-A。 (3)用免疫熒光的方法觀察AECⅡ的數(shù)量、面積及熒光密度。 (4)透射電鏡檢測：觀察AECⅡ超微結(jié)構(gòu)改變。 結(jié)果： 1.機(jī)械通氣不同時間點OI值的改變：對照組、CMV組、HFOV組、PLV組四組實驗動物的OI值在ALI Oh均無顯著性差異(P0.05)。CMV組、HFOV組、PLV組實驗動物的OI值隨著治療時間延長呈持續(xù)性下降,其中HFOV組、PLV組動物的OI值從第6h起至24h結(jié)束,較CMV組動物下降更明顯,與CMV組比較有顯著性差異(P0.05)。PLV組OI值均較HFOV組低,在6h、18h兩時間點有顯著性差異(P0.05)。 2.機(jī)械通氣不同時間點HR、MABP的變化：CMV組、HFOV組、PLV組三組實驗動物的HR、MABP在各時間點及不同機(jī)械通氣方式均無明顯增加或下降,比較無顯著性差異(P0.05)。 3. BALF中SP-A及炎癥因子ELISA檢測結(jié)果：對照組、CMV組、HFOV組、PLV組四組TNF-α、IL-8、IL-1、SP-A總體均數(shù)有差異(P＜0.05)。多重比較：HFOV組IL-8、TNF-α表達(dá)水平比CMV組低、SP-A表達(dá)水平比CMV組高(P0.05)。PLV組IL-8、IL-1、TNF-α表達(dá)水平比CMV組低、SP-A表達(dá)水平比CMV組高(P0.05)。PLV組IL-8、TNF-α表達(dá)水平比HFOV組低(P0.05)。PLV組IL-1、SP-A表達(dá)水平與HFOV組比較無顯著性差異(P0.05)。 4.免疫熒光低倍鏡檢AECⅡ數(shù)量分析：對照組、CMV組、HFOV組、PLV組四組AECⅡ數(shù)量總體均數(shù)有差異(P0.05)。多重比較：對照組AECⅡ數(shù)量比HFOV組、CMV組多(P0.05)。PLV組AECⅡ數(shù)量比HFOV組、CMV組多(P0.05)。 5.AECⅡ免疫熒光面積分析：對照組、CMV組、HFOV組、PLV組四組熒光面積總體均數(shù)有差異(P0.05 P=0.013)。多重比較：對照組AECⅡ免疫熒光面積比HFOV組、CMV組小(P0.05)。 6.AECⅡ免疫熒光密度分析：對照組、CMV組、HFOV組、PLV組四組熒光密度總體均數(shù)有差異(P0.05)。多重比較：對照組AECⅡ免疫熒光密度比CMV組高(P0.05)。HFOV組、PLV組AECⅡ免疫熒光密度比CMV組高(P＜0.05)。 7.透射電鏡觀察AECⅡ：對照組：AECⅡ與基膜、AECⅠ連接緊密,細(xì)胞核和核邊界基本正常,細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)均勻,部分嗜鋨性板層小體(osmiophilic multilamellar body,LB)密度下降、空泡化,但仍可見部分LB密度均勻、板層狀結(jié)構(gòu)排列平行,細(xì)胞游離面微絨毛清晰可見。 CMV組：AECⅡ部分游離但未完全脫落,部分AECⅡ細(xì)胞核體積變小,核內(nèi)染色質(zhì)不均勻,呈邊集現(xiàn)象,核仁模糊可見,LB繞細(xì)胞核排列、密度下降、數(shù)目減少,板層結(jié)構(gòu)模糊不清,微絨毛明顯減少。 HFOV組：AECⅡ與基膜、AECⅠ連接尚緊密,AECⅡ細(xì)胞核形態(tài)尚規(guī)整,核內(nèi)染色質(zhì)呈邊集現(xiàn)象,核仁可見,LB繞細(xì)胞核排列、數(shù)目較CMV組稍多,有的呈部分空泡化改變,仍可見板層狀結(jié)構(gòu),微絨毛減少。 PLV組：細(xì)胞核比CMV組、HFOV組大,核內(nèi)染色質(zhì)均勻,LB密度勻、數(shù)目多,少許空泡化,板層結(jié)構(gòu)平行排列,微絨毛保存較好,無明顯減少,還能觀察到游離、脫落AECⅡ。結(jié)論： 1.OI值：CMV、HFOV、PLV三種機(jī)械通氣方式治療新生豬ALI 24小時后,PLV組在6、18h兩個時間點OI值改善較HFOV組明顯,在所有時間點改善OI值均較CMV優(yōu)；HFOV組在所有時間點改善OI值比CMV組明顯。表明PLV、HFOV改善氧合較CMV優(yōu),PLV改善氧合較HFOV稍優(yōu)。 2. BALF炎癥因子及SP-A濃度：CMV組、HFOV組、PLV組三種機(jī)械通氣方式治療新生豬ALI24小時后,PLV組IL-8、TNF-α表達(dá)水平比HFOV組低,IL-8、TNF-α、IL-1表達(dá)水平較CMV組低；HFOV組IL-8、TNF-α表達(dá)水平較CMV組低。PLV組、HFOV組SP-A表達(dá)水平較CMV組高,據(jù)此可證明PLV肺部炎癥反應(yīng)較CMV、HFOV輕,HFOV肺部炎癥反應(yīng)較CMV稍輕。 3.形態(tài)學(xué)：免疫熒光顯微鏡觀察AECⅡ數(shù)量、熒光面積、熒光密度及電子顯微觀察AECⅡ細(xì)胞核、LB等結(jié)果顯示：三種機(jī)械通氣方式中,PLV對AECⅡ損傷較HFOV、CMV輕。 4.CMV組、HFOV組、PLV組三種不同的機(jī)械通氣方式,對新生豬血流動力學(xué)影響較小。
【圖文】：

較CMV組動物下降的更明顯，與CMV組比較有顯著性差異(P<0.05)。PU擴(kuò)組01值均較HFOV組低，在6h、18h兩時間點有顯著性差異(P<0.05)。見表3及圖1。

CMV組、HFOV組、PLV組三組實驗動物的HR、MABP在各時間點及不同機(jī)械通氣方式均無明顯增加或下降，比較無顯著性差異(P>0.05)。三組的HR變化見表4及圖2，MABP變化見表5及圖3。組別CMV組HFOV組PLV組表4不同通氣方式下各時間點HR的變化(次/分，x士S) Oh6h1Zh1sh24h166.3士 9.07173.6士 17.4165.33士 20.65164.8士 12.7165.33士22.25176.3士 14.3166.5士 15.0176.17士19，， 03186.0士 22.3171.00士29.20169.4士 10.5171.4士 15.1174.10士 17.51179.6士 19.6176.44士22.14
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R563.8

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2708552