【摘要】：目的:探討老年AECOPD患者外周血中Notch1基因、HES1蛋白的表達水平和Treg細胞的比例變化,以及Notch1信號通路在COPD免疫平衡中的作用。方法:選取2015年8月至2018年3月在湖南省人民醫(yī)院就診的40例AECOPD患者為研究對象,其中成年AECOPD組(15歲-64歲)和老年AECOPD組(≥65歲)各20例,另選取40例健康體檢者為對照組,其中成年對照組和老年對照組各20例。應(yīng)用密度梯度離心法分選出PBMC,并采用流式細胞術(shù)檢測外周血Treg細胞的比例;采用RT-PCR及Western Blot分別檢測Notch1在外周血中的相對表達量及HES1蛋白在外周血中的含量。采集正常人外周血,用免疫磁珠法分選Treg細胞,加入Notch抑制劑和Treg細胞共培養(yǎng),用流式細胞術(shù)測Treg細胞的比例。結(jié)果:(1)用流式細胞術(shù)檢測其外周血單個核細胞中Treg細胞比例,與成年對照組[0.06(0.00-0.12)]相比,成年AECOPD組[0.38(0.16-8.49)]外周血中Treg細胞比例明顯升高(P0.05);與老年對照組[0.12(0.07-1.32)]相比,老年AECOPD組[4.415(0.39-9.61)]外周血中Treg細胞比例均明顯升高(P0.05);與成年對照組[0.06(0.00-0.12)]相比,老年對照組[0.12(0.07-1.32)]外周血中Treg細胞比例明顯升高(P0.05);與成年AECOPD組[0.38(0.16-8.49)]相比,老年AECOPD組[4.415(0.39-9.61)]外周血中Treg細胞比例明顯升高(P0.05)。(2)采用Western Blot法檢測外周血中HES1的蛋白含量,成年AECOPD組外周血中HES1蛋白含量(29.49±8.96)較成年對照組(9.96±6.34)明顯升高(P0.01);老年AECOPD組外周血中HES1蛋白含量(37.49±11.86)較老年對照組(20.47±7.28)明顯升高(P0.01);老年對照組外周血中HES1蛋白含量(20.47±7.28)較成年對照組(9.96±6.34)明顯升高(P0.01);老年AECOPD組外周血中HES1蛋白含量(37.49±11.86)較成年AECOPD組(29.49±8.96)明顯升高(P0.05)。(3)采用RT-PCR檢測外周血中Notch1的相對表達量,成年AECOPD組外周血單個核細胞中Notch1的相對表達量(1.73±0.48)較成年對照組(1.03±0.13)明顯升高(P0.01);老年AECOPD組外周血單個核細胞中Notch1的相對表達量(2.09±0.52)較老年對照組(1.15±0.27)明顯升高(P0.01);老年對照組外周血單個核細胞中Notch1的相對表達量(1.15±0.27)較成年對照組(1.03±0.13)明顯升高(P0.01);老年AECOPD組外周血單個核細胞中Notch1的相對表達量(2.09±0.52)較成年AECOPD組(1.73±0.48)明顯升高(P0.05)。(4)相關(guān)關(guān)系:年齡與外周血血清中HES1蛋白含量呈正性相關(guān)(Pearson相關(guān)系數(shù)r=0.419,P0.01);年齡與外周血血清中Notch1相對表達量呈正性相關(guān)(Pearson相關(guān)系數(shù)r=0.226,P0.05)。第一秒用力呼氣量占預(yù)計值百分比與外周血血清中HES1蛋白呈負性相關(guān)(Pearson相關(guān)系數(shù)r=-0.710,P0.01)。第一秒用力呼氣量占預(yù)計值百分比與外周血血清中Notch1呈負性相關(guān)(Pearson相關(guān)系數(shù)r=-0.657,P0.01)。外周血Treg比例與外周血血清中HES1蛋白含量呈正性相關(guān)(Pearson相關(guān)系數(shù)r=0.635,P0.01);外周血Treg比例與外周血血清中Notch1相對表達量呈正性相關(guān)(Pearson相關(guān)系數(shù)r=0.686,P0.01)。(5)用流式細胞術(shù)檢測不同濃度抑制處理后的Treg細胞比例,與處理前比較,1u M濃度Notch1抑制劑處理組中的Treg細胞無明顯下降(P0.05),其余加入Notch抑制劑處理組中的Treg細胞比例明顯下降(P0.05);1u M與2.5u M濃度Notch1抑制劑組之間以及2.5u M與5u M濃度Notch1抑制劑組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),其他各組之間相互比較,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:Notch1可能通過激活Notch信號通路進而影響Treg細胞比例變化,從而在調(diào)控老年AECOPD中發(fā)揮作用;抑制Notch信號通路可能影響AECOPD的免疫平衡。
【圖文】：

流式檢測Treg細胞中比例

附圖 1.2 外周血中 Treg 在各組中的比例注：A 為成年對照組 B 為成年 AECOPD 組 C 為老年對照組 D 為老年 AECOPD 組；aP<0.05 與成年對照組比較；bP<0.05 與成年對照組比較；cP<0.05 與老年對照組比較；dP<0.05 與成年 COPD 組比較HES1β-actin1A1 B1 C1 D1附圖 2.1 WB 檢測 HES1 在各組間的表達
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R563.9

【參考文獻】

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本文編號：2707817