【摘要】： 第一部分哮喘患者肺部γδT淋巴細(xì)胞比例和增殖活性的變化 目的1、探討哮喘患者肺部γδT淋巴細(xì)胞數(shù)量的變化。 2、探討哮喘患者肺部γδT淋巴細(xì)胞增殖活性的變化。 3、評估磁性細(xì)胞分選器(MACS)純化支氣管肺泡灌洗液中γδT淋巴細(xì)胞的效果。 方法1、收集哮喘和對照患者的支氣管肺泡灌洗液。 2、顯微鏡下觀察支氣管肺泡灌洗液中的細(xì)胞密度。 3、對支氣管肺泡灌洗液中的細(xì)胞進(jìn)行分類計數(shù)。 4、利用流式細(xì)胞術(shù)檢測支氣管肺泡灌洗液中γδT細(xì)胞的比例。 5、用磁性細(xì)胞分選器純化支氣管肺泡灌洗液中的γδT淋巴細(xì)胞。 6、通過臺盼蘭染色、熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)來評估MACS純化支氣管肺泡灌洗液中γδT淋巴細(xì)胞的效果。 7、對純化的γδT淋巴細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),通過MTT比色法檢測γδT淋巴細(xì)胞的增殖活性。 結(jié)果1、在純化細(xì)胞之前,對支氣管肺泡灌洗液中的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù),哮喘患者組支氣管肺泡灌洗液中的細(xì)胞密度為(22.5±4.5)×10~4個/毫升,高于對照組的(18.8±3.7)×10~4個/毫升,差異不顯著(t=1.665、P＞0.05)。 2、顯微鏡下對細(xì)胞進(jìn)行分類計數(shù),哮喘組的巨噬細(xì)胞比例為(81±4)%,低于對照組的(86±2)%,有統(tǒng)計學(xué)差異(t=3.122、P＜0.01);哮喘組的淋巴細(xì)胞比例為(15±3)%,高于對照組的(13±2)%,但無統(tǒng)計學(xué)差異(t=1.490、P＞0.05);哮喘組嗜酸性粒細(xì)胞的比例(3%)高于對照組(＜1%);而中性粒細(xì)胞的比例(1%)也略高于對照組(＜1%)。 3、流式細(xì)胞術(shù)檢測表明,哮喘患者組支氣管肺泡灌洗液中γδT淋巴細(xì)胞的百分率為(6.39±0.71)%,高于對照組的(2.62±0.37)%,差異顯著(t=12.449、P＜0.01)。 4、MACS純化支氣管肺泡灌洗液中的γδT淋巴細(xì)胞后,在熒光顯微鏡下觀察,γδT細(xì)胞的比例明顯增加,其它細(xì)胞基本消失。流式細(xì)胞術(shù)檢測表明,γδT淋巴細(xì)胞的比例＞93%。臺盼蘭染色表明,細(xì)胞存活率＞95%。 5、MTT法檢測γδT淋巴細(xì)胞的增殖活性,哮喘患者組的OD值為0.201±0.024,高于對照組的0.155±0.032,差異具有顯著性(t=3.042、P＜0.05)。 結(jié)論1、哮喘患者肺部γδT淋巴細(xì)胞的比例明顯升高。 2、哮喘患者肺部γδY淋巴細(xì)胞的增殖活性顯著增強。 3、MACS可以有效地純化支氣管肺泡灌洗液中的γδT淋巴細(xì)胞,且不會對γδT淋巴細(xì)胞造成明顯損傷。 目的通過觀察哮喘患者肺部γδT淋巴細(xì)胞所分泌細(xì)胞因子的變化，探討肺部γδT細(xì)胞對哮喘患者氣道炎癥的影響。 方法1、留取7例哮喘和7例對照患者的支氣管肺泡灌洗液。2、用磁性細(xì)胞分選器(MACS)純化其中的γδT細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)。3、ELISA法檢測γδT細(xì)胞分泌到培養(yǎng)基中IFN-γ和IL-4的濃度。 結(jié)果1、哮喘組γδT細(xì)胞分泌的IFN-γ濃度為95．1+55．8(pg／m1)，低于對照組的100．9+67．8(pg／m1)，但差異不顯著(P0．05)。2、哮喘組γδT細(xì)胞分泌的IL-4濃度為18．9±3．1(pg／m1)，，高于對照組的14．1±3．0(pg／m1)，差異顯著(P0．05)。 結(jié)論1、哮喘患者肺部γδT細(xì)胞分泌的IFN-γ無明顯變化。2、哮喘患者肺部γδT細(xì)胞可以通過加強分泌IL-4來增強Th2應(yīng)答，達(dá)到加劇Th1／Th2失衡，加重氣道炎癥的目的。
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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2 李超乾,徐永健,楊丹蕾,陳仕新,倪望,張珍祥;支氣管哮喘大鼠γδT細(xì)胞分布和凋亡的變化[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2003年05期

3 李超乾,徐永健,楊丹蕾,劉先勝,熊維寧,陳仕新,倪望,張珍祥;γδT細(xì)胞與哮喘特異性致敏原皮下脫敏療法的研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2003年08期

4 中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組;支氣管哮喘防治指南(支氣管哮喘的定義、診斷、治療及教育和管理方案)[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2003年03期

5 李超乾,徐永健,張珍祥,楊丹蕾,劉先勝,熊維寧;卡介苗預(yù)防哮喘大鼠模型形成及其與γδT細(xì)胞關(guān)系的研究[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2002年03期

本文編號：2701461