發(fā)布時(shí)間：2020-06-05 07:31

【摘要】： 目的 通過(guò)對(duì)大鼠肺的病理組織學(xué)檢查、肺泡灌洗液(BALF)的細(xì)胞學(xué)分析、血清IgE、卵蛋白(OVA)特異性IgE檢測(cè)以及氣道阻力的測(cè)定,探討泵霧化和超聲霧化兩種激發(fā)方式制備大鼠哮喘模型的優(yōu)劣以及不同濃度的卵蛋白激發(fā)對(duì)大鼠哮喘模型的影響。為進(jìn)一步改良大鼠哮喘模型使其更適于哮喘的發(fā)病機(jī)制研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 將40只SD大鼠分為5組：對(duì)照組(Control8只)、超聲霧化組(Ultra組8只)和泵霧化組(Pump組),其中泵霧化組按照卵蛋白激發(fā)濃度的不同分為Pump1組(激發(fā)濃度為1%8只),Pump2組(激發(fā)濃度為2%8只),Pump3組(激發(fā)濃度為4%8只)。Control組予lml生理鹽水腹腔注射,其余4組予10%OVA混合液lml(含OVA100mg、氫氧化鋁100mg及滅活百日咳桿菌苗5×109個(gè)作為免疫佐劑)致敏。2周后再以O(shè)VA進(jìn)行激發(fā),Pump各組置于自制的透明密閉有機(jī)玻璃筒(3.52cm2×π×19.5 cm)內(nèi),用PARI BOY高頻霧化器作為泵霧化器提供霧化動(dòng)力,分別霧化吸入1%,2%,4%OVA進(jìn)行激發(fā),10 min／次,每天1次,每周3次,共6周。Ultra組用超聲霧化器吸入2%OVA進(jìn)行激發(fā)。30 min／次,每天1次,每周3次,共6周。Control組以生理鹽水代替2% OVA泵入霧化進(jìn)行激發(fā),10 min／次,每天1次,每周3次,共6周。各組實(shí)驗(yàn)大鼠于末次激發(fā)24小時(shí)后(即第57天)腹腔注射10%水合氯醛5ml/kg麻醉,采用BUXCO測(cè)定氣道阻力,測(cè)定后腹腔靜脈采血lml,取血漿檢測(cè)IgE、SIgE含量。腹主動(dòng)脈放血處死,取右肺組織用于常規(guī)蘇木精—伊紅(HE)染色、Masson三色染色和AB-PAS染色檢測(cè),分析氣道炎癥和氣道重塑情況；做左肺支氣管肺泡灌洗,行BALF細(xì)胞學(xué)分析。 結(jié)果 1.各組動(dòng)物的一般觀察 激發(fā)過(guò)程中,Ultra組和Pump各組大鼠逐漸出現(xiàn)煩躁不安、抓耳撓腮、呼吸急促、呈點(diǎn)頭狀呼吸、活動(dòng)進(jìn)食減少或俯臥不動(dòng)、出現(xiàn)豎毛、毛發(fā)失去光澤甚至脫毛、反應(yīng)遲滯等哮喘樣癥狀。激發(fā)過(guò)程結(jié)束時(shí),Ultra組和Pump各組大鼠均出現(xiàn)呼吸急促、點(diǎn)頭狀呼吸、腹肌痙攣等表現(xiàn),而Control組大鼠激發(fā)前后一般觀察無(wú)明顯變化,呼吸平穩(wěn),運(yùn)動(dòng)敏捷。 2.病理組織學(xué)檢查 2.1病理切片 Control組肺組織病理學(xué)檢測(cè)未見氣道炎癥改變,肺內(nèi)支氣管管壁無(wú)增厚、支氣管管腔規(guī)則、粘膜上皮整齊,管腔內(nèi)無(wú)炎性滲出物,氣道周圍未見明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。Ultra與Pump各組支氣管周圍可見大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),包括：EOS、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等；炎性細(xì)胞主要在支氣管粘膜下層及粘膜外層、肺泡壁和小血管周圍等處浸潤(rùn),肺間質(zhì)可見EOS,支氣管內(nèi)可見粘液栓；氣道上皮有脫落、斷裂和增生,杯狀細(xì)胞和腺體增生,上皮下膠原和細(xì)胞外基質(zhì)沉積,平滑肌肥大、平滑肌細(xì)胞聚集增多,基底膜增厚且形態(tài)不規(guī)則。 2.2各組大鼠肺組織病理學(xué)的比較 1)支氣管周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分：與Control組相比較,Pump各組及Ultra組支氣管周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分顯著增高(P0.01);Pump各組與Ultra組以及Pump各組之間支氣管周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分無(wú)顯著差異(P0.05)。 2)支氣管管壁周圍EOS變化：與Control組比較,Pump各組及Ultra組支氣管管壁周圍EOS顯著增高(P0.01);Pump各組與Ultra組以及Pump各組之間支氣管管壁周圍EOS無(wú)顯著差異(P0.05)。 3)與Control組比較,Pump各組及Ultra組的氣道平滑肌面積、杯狀細(xì)胞占上皮細(xì)胞百分比、膠原沉積面積明顯增高(P0.01)；而與Ultra組比較,Pump各組的氣道平滑肌面積、杯狀細(xì)胞占上皮細(xì)胞百分比、膠原沉積面積增高(P0.01)；而Pump各組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3各組大鼠BALF細(xì)胞數(shù)比較 1)BALF細(xì)胞細(xì)胞總數(shù)分析：相對(duì)于Control組,Pump各組及Ultra組BALF細(xì)胞總數(shù)顯著增高(P0.01)；但Pump各組與Ultra組以及Pump各組之間無(wú)顯著差異(P0.05)。 2)各細(xì)胞分類比較：與Control組相比,Pump各組及Ultra組各細(xì)胞分類中EOS,淋巴細(xì)胞、顯著增高,尤以EOS為主(P0.01)；巨噬細(xì)胞顯著降低(P0.01)；但Pump各組與Ultra組以及Pump各組之間無(wú)顯著差異(P0.05)。 4各組大鼠血清總IgE、SIgE比較 Ultra組和Pump各組血清總IgE和SIgE水平明顯高于Control組(P0.01); Pump各組血清總IgE和SIgE水平均高于Ultra組(P0.01)；而Pump各組之間無(wú)顯著差異(P0.05)。 5各組大鼠氣道阻力(Raw)的變化值比較 1)氣霧吸入組胺激發(fā)能導(dǎo)致Ultra組及Pump各組的Raw值增加,氣道阻力隨著組胺用量的逐漸增加而逐漸增強(qiáng)。 2)Ultra組及Pump各組大鼠Raw值均大于Control組(P0.01),提示Ultra組及Pump各組大鼠的氣道反應(yīng)性明顯增高；Pump各組大鼠Raw值較Ultra組大鼠的氣道反應(yīng)性均明顯增高(P0.05)；而Pump各組之間無(wú)顯著差異(P0.05)。 結(jié)論 1)通過(guò)卵蛋白(OVA)與免疫佐劑氫氧化鋁、滅活百日咳桿菌致敏,OVA超聲霧化或泵霧化激發(fā)均能夠成功復(fù)制哮喘大鼠模型。 2)使用改良后泵霧化激發(fā)的方式復(fù)制哮喘大鼠模型優(yōu)于傳統(tǒng)的超聲霧化激發(fā)方式。 3)在一定范圍下,卵蛋白泵霧化激發(fā)濃度對(duì)模型制作無(wú)明顯影響。
【圖文】：

Pulllp組氣道平滑肌面積、杯狀細(xì)胞占上皮細(xì)胞百分比、膠原沉積面積增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);而PulnP各組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見表3一2，圖3一2，圖3一3，圖3一6)圖3一1肺組織病理切片HE染色 x100A:Contr。l組，僅有及少量的炎性細(xì)胞，支氣管壁完整;B:ultra組，可見大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管壁破壞，C:PumPI組，可見大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管壁破壞嚴(yán)重，氣道上皮脫落， D:PumPZ組，可見大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管壁破壞嚴(yán)重，氣道上皮脫落 .E:PumP3組

Pulllp組氣道平滑肌面積、杯狀細(xì)胞占上皮細(xì)胞百分比、膠原沉積面積增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);而PulnP各組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見表3一2，圖3一2，圖3一3，圖3一6)圖3一1肺組織病理切片HE染色 x100A:Contr。l組，，僅有及少量的炎性細(xì)胞，支氣管壁完整;B:ultra組，可見大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管壁破壞，C:PumPI組，可見大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管壁破壞嚴(yán)重，氣道上皮脫落， D:PumPZ組，可見大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管壁破壞嚴(yán)重，氣道上皮脫落 .E:PumP3組
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2697715