【摘要】：目的：通過觀察胰島素樣生長因子1(IGF-1)作用過的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)對博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化模型的影響,探討治療肺纖維化的新方法。 方法：體外分離、培養(yǎng)雄性6周齡SD大鼠的BMSC。將48只雄性成年SD大鼠(體重200-240g)隨機(jī)分為4組,陰性對照組(N),博萊霉素組(B),間充質(zhì)干細(xì)胞組(M),IGF處理組(I)。處理方法為：N組經(jīng)支氣管注入1ml生理鹽水,B、M、I組均經(jīng)支氣管注入1ml博萊霉素(5mg/kg)。在造模2d后,B組大鼠經(jīng)尾靜脈注入生理鹽水0.5ml,M組大鼠經(jīng)尾靜脈注入CM-Dil標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞0.5ml(細(xì)胞數(shù)為2×106),I組注入相同數(shù)量的標(biāo)記BMSC(經(jīng)過IGF-1培育48h)。在造模的第7d、14d、28d批量處死各組大鼠,留取肺組織進(jìn)行HE染色、Masson染色評價肺組織病理變化,冰凍切片觀察肺組織內(nèi)細(xì)胞定植情況、消化法測定肺組織羥脯氨酸(HYP)含量,RT-PCR方法檢測各組大鼠肺組織肝細(xì)胞生長因子(HGF) mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果：M、I組在顯微鏡下可見紅色熒光標(biāo)記的BMSC, I組不同時間點(diǎn)的IOD值均高于M組,且M、I組的熒光在28d時都有所衰減。M、I組的炎癥在實(shí)驗(yàn)早期便輕于B組,其中M組更明顯,至28天時M、I組炎癥評分與N組無統(tǒng)計學(xué)差異。B、M、I組肺纖維化評分在博萊霉素注入14d時都明顯高于N組(分別P0.01,P0.05,P0.05),28d時M,I組的肺纖維化程度輕于B組(分別P0.05,P0.01),但M、I兩組之間始終不存在統(tǒng)計學(xué)差異。B組的羥脯氨酸含量在整個實(shí)驗(yàn)階段均高于其他三個組(P均0.01),而I組的值始終與N組無差異(P均0.05),M組的值在早期大于I、N組,至28d降至與對照組間沒有統(tǒng)計學(xué)差異。N組、B組的HGFmRNA表達(dá)一直保持在較低水平,M、I組HGFmRNA的表達(dá)水平在第7d時沒有差異,均高于N、B組(P均0.01),至第14d時I組的值開始高于M組(P0.05),28d時這種差異更加明顯(P0.01) 結(jié)論：IGF-1可以促進(jìn)BMSC異體定植從而對肺損進(jìn)行更有效的修復(fù),機(jī)制可能是其增加了BMSC分泌的HGF量。
【圖文】：

4一5d后可以觀察到明顯的克隆集落，，(圖1)。8一10d原代細(xì)胞90%融合，此時傳代。經(jīng)過4代培養(yǎng)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中呈梭形漩渦狀排列，似成纖維細(xì)胞樣貼壁生長(圖2)。骨髓內(nèi)的造血干細(xì)胞等雜細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中通過多次換液和傳代已經(jīng)逐步被去除，細(xì)胞純化單一，可以用于實(shí)驗(yàn)。圖1雄性大鼠骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)5d，細(xì)胞旱集落簇集生長(xZOO)圖2雄性大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞第4d，細(xì)胞長梭狀漩渦排列 (x100)三、大鼠肺組織病理學(xué)改變1.HE染色:陰性對照組在實(shí)驗(yàn)始終都表現(xiàn)為完整的肺泡結(jié)構(gòu)，肺間質(zhì)無特殊改變(圖3)。注入博萊霉素后第7d，除N組外各組大鼠肺組織均出現(xiàn)炎癥反應(yīng)

三、大鼠肺組織病理學(xué)改變1.HE染色:陰性對照組在實(shí)驗(yàn)始終都表現(xiàn)為完整的肺泡結(jié)構(gòu)，肺間質(zhì)無特殊改變(圖3)。注入博萊霉素后第7d，除N組外各組大鼠肺組織均出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，I組肺泡炎評分小于B組(P<0.05)，M、B組間炎癥程度沒有差異。第14d，B組肺泡炎持續(xù)發(fā)展，肺泡間隔及肺泡內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤(圖4)，評分
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R563

【共引文獻(xiàn)】

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1 郭菲菲;劉曉萍;高勝利;馮智慧;;骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞的定向分化及體內(nèi)移植[J];世界華人消化雜志;2007年05期

2 龐榮清;周平;尹波;李雪梅;張永云;楊勇琴;曲璐;潘興華;;成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)方法的建立及生長特性分析[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2006年16期

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1 張勇;骨髓間質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性及對心肌缺血治療作用的初步研究[D];浙江大學(xué);2005年

2 吳惺;hTRAIL基因修飾成人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞靶向腦膠質(zhì)瘤基因治療的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

3 王海萍;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和P19細(xì)胞體外誘導(dǎo)向心肌分化及細(xì)胞移植修復(fù)梗死心肌的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

4 郭書權(quán);異基因組織工程骨修復(fù)豬脛骨干節(jié)段骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

本文編號：2694098