【摘要】： 一、研究背景 膿毒癥(sepsis)是外科學(xué)和危重病醫(yī)學(xué)中極為常見的一種并發(fā)癥,肺臟是膿毒癥時最易受損的器官之一。急性肺損傷(acute lung injury,ALI)主要表現(xiàn)為:低氧血癥、通氣-血流屏障障礙、肺水腫、肺部炎癥甚至呼吸困難。促炎性細(xì)胞因子如TNF-α、IL-1β等被認(rèn)為是激活細(xì)胞級聯(lián)反應(yīng)的主要介質(zhì),在急性肺損傷的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。 血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)是腎素—血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的主要活性物質(zhì),其作用主要體現(xiàn)在調(diào)節(jié)血管張力、血流及促進(jìn)細(xì)胞生長、增生等方面。在哺乳動物里,將AngⅡ受體主要分為血管緊張素Ⅱ1(AT1)和2(AT2)型兩種受體。目前已知的AngⅡ的生理作用大部分是通過AT1受體介導(dǎo)的。AT1受體的拮抗劑被廣泛用于治療高血壓、心血管和腎臟疾病。近年來發(fā)現(xiàn)AngⅡ還具有另一重要功能—致炎作用。它可引起血管通透性的增加,誘導(dǎo)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子、化學(xué)趨化因子和黏附分子等多種炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生。新近研究發(fā)現(xiàn),AT1受體拮抗劑能抑制諸如TNF-α、IL-6、IL-8、單核細(xì)胞趨化因子-1(MCP-1)、血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)、E-選擇素等細(xì)胞因子和黏附分子,在動脈粥樣硬化、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和腎炎等疾病中具有一定的治療作用。然而有關(guān)AT1受體在急性肺損傷中的作用,尚未見文獻(xiàn)報道。 本實驗的研究目的有二:一是觀察AT1受體在內(nèi)毒素誘導(dǎo)AL1中的作用。二是探討AT1受體拮抗劑對促炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生和核因子活化的影響。期望通過上述研究進(jìn)一步認(rèn)識急性肺損傷的發(fā)生機(jī)制,為其防治提供新的思路和方法。 二、研究目的 1.通過觀察AT1受體拮抗劑ZD7155對內(nèi)毒素誘導(dǎo)ALI小鼠肺組織促炎性細(xì)胞因子TNF-α和IL-β產(chǎn)生的影響,了解拮抗AT1受體對急性肺損傷的保護(hù)作用。 2.觀察ZD7155對血管緊張素Ⅱ受體和核轉(zhuǎn)錄因子變化的影響,探討AT1受體在內(nèi)毒素誘導(dǎo)急性肺損傷中作用的初步機(jī)制。 三、研究內(nèi)容 第一部分血管緊張素Ⅱ1型受體在內(nèi)毒素誘導(dǎo)急性肺損傷中的作用 24只BABL/C小鼠,隨機(jī)分為正常對照NS組、LPS組、LPS+ZD7155組,每組8只。用1%戊巴比妥鈉60 mg/kg行腹腔注射麻醉,仰臥固定消毒后,頸部正中切口逐層暴露氣管,以靜脈穿刺針經(jīng)環(huán)甲膜向心端刺入氣管,LPS組小鼠將LPS溶液(2mg/kg)在緩慢滴入氣管中,拔出穿刺針,將小鼠直立旋轉(zhuǎn),使藥液在肺內(nèi)分布均勻,縫合切口后觀察。正常對照組小鼠進(jìn)行相同麻醉和穿刺,以等量生理鹽水替代LPS。LPS+ZD7155組小鼠在滴注內(nèi)毒素前30分鐘腹腔注射ZD7155(10 mg/kg)。24 h后經(jīng)心臟取血處死,留取肺臟標(biāo)本,測定肺臟含水量,作肺臟病理學(xué)檢查和肺組織TNF-α和IL-1βmRNA檢測。 第二部分血管緊張素Ⅱ1型受體拮抗劑ZD 7155對內(nèi)毒素誘導(dǎo)急性肺損傷小鼠肺臟核因子活化的影響 88只BABL/C小鼠,隨機(jī)分為正常對照NS組8只、LPS組40只、LPS+ZD7155組40只,各組處理同第一部分實驗,LPS和ZD 7155預(yù)處理組于致傷后1h、3h、6h、12h、24h等5個時相點經(jīng)心臟取血處死動物。留取肺臟標(biāo)本,采用Westernblot法檢測肺臟AT1和AT2蛋白的表達(dá),EMSA法檢測核因子AP-1和NF-κB活性的改變,并采用免疫組化的方法判斷AT1表達(dá)。 四、研究結(jié)果 第一部分 小鼠氣道內(nèi)滴注2 mg/kg的LPS后24h肺臟含水量較正常生理鹽水組明顯升高(81.08±1.78%vs 75.83±1.27%,P＜0.01),組織病理學(xué)檢查顯示:肺臟出現(xiàn)明顯的病理損害,同時肺臟TNF-α和IL-1βmRNA表達(dá)均顯著增強(qiáng)(0.65±0.08 vs0.10±0.02,P＜0.01;0.73±0.11 vs 0.09±0.02,P＜0.01),使用ATI受體拮抗劑ZD7155后肺臟含水量明顯下降(79.06±2.36%vs 81.08±1.78%,P＜0.05),肺臟的病理損害顯著減輕,同時肺臟TNF-α和IL-1βmRNA表達(dá)均明顯下降(0.29±0.05 vs 0.65±0.08P＜0.05;0.31±0.07 vs 0.73±0.11 P＜0.05)。 第二部分 正常NS對照組小鼠肺組織中肺泡內(nèi)吞噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)少量的AT1受體蛋白,在LPS致傷1h、3h后肺泡壁細(xì)胞和吞噬細(xì)胞、多形核白細(xì)胞等炎癥細(xì)胞上表達(dá)AT1受體蛋白,LPS致傷6h后,AT1表達(dá)于整個內(nèi)皮細(xì)胞床和間質(zhì)性吞噬細(xì)胞。傷后12h、24 h,AT1受體蛋白仍表達(dá)于上述肺泡細(xì)胞,表達(dá)量有所下降。Western blot結(jié)果顯示,與正常NS對照組相比較,用LPS滴注刺激后6h和24h的肺組織中AT1受體蛋白表達(dá)顯著升高,其與內(nèi)參照β-actin表達(dá)的相對比值分別為3.44:0.72和2.37:1.26(P均＜0.01)。LPS+ZD7155組AT1蛋白表達(dá)顯著低于LPS致傷組,其相對比值分別為1.90:3.44和153:2.37(P均＜0.01)。另外,LPS致傷組6h、24h的AT2受體蛋白表達(dá)顯著低于正常NS對照組,其相對比值分別為0.76:1.31和0.64:1.80(P均＜0.01)。LPS+ZD7155 AT2蛋白表達(dá)顯著高于LPS組,其相對比值分別為1.09:0.76和1.29:0.64(P均＜0.01)。EMSA結(jié)果顯示:NF-κB和AP-1的活化分別在LPS刺激后3h和6h達(dá)到最高峰。LPS刺激3h、6h后,肺組織細(xì)胞核中的NF-κB(52.33±4.8 vs 5.47±0.5,42.78±4.1 vs 5.47±0.5 P＜0.05)和AP-1(61.14±5.7 vs 2.53±0.2,73.25±7.1 vs 2.53±0.2 P＜0.05)活性都顯著高于正常NS對照組,預(yù)先使用ZD 7155能顯著抑制LPS刺激后肺組織的NF-κB活性(20.53±2.4 vs 52.33±4.8,18.51±1.7 vs 42.78±4.1 P＜0.05)和AP-1活性的升高(17.56±1.6vs 61.14±5.7,21.54±2.2 vs 73.25±7.1 P＜0.05)。 五、研究結(jié)論 1.AT1受體介導(dǎo)了肺臟促炎性細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的產(chǎn)生,在內(nèi)毒素誘導(dǎo)急性肺損傷的發(fā)生中起重要的調(diào)控作用。 2.AngⅡ通過與AT1受體的結(jié)合,引起肺臟核因子NF-κB和AP-1的活化和促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生,介導(dǎo)了內(nèi)毒素誘導(dǎo)的ALI的發(fā)生。
【圖文】：

圖l一1NS組小鼠肺臟(HEx400)1On娜histofogicfe川恤reswithhematoxylinandcosin仕e別比dmiee.(x400)

F堪.1一 1Puin1On娜histofogicfe川恤reswithhematoxylinandcosinSI滋iningofNS仕e別比dmiee.(x400)圖1一2急性肺損傷后24h肺臟病理改變(HEx400)Fig.l一 2Pullnon田 yhistofogiefeal雙 reswithhematoxylinandeosinStainingofmieeat 24hoursafterLPSe習(xí)為sure.(x400)
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R459.7;R563.8

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本文編號：2692359