【摘要】：目的:研究STAT6 反義寡核苷酸對哮喘小鼠脾淋巴細(xì)胞的影響作用。 方法:實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分組:正常鼠空白組(A 組)、正常鼠OVA 組(B 組)、哮喘空白組(C 組)、哮喘OVA 組(D 組)、哮喘治療組(E 組)。正常設(shè)計(jì)并人工合成一段互補(bǔ)于小鼠STAT6 mRNA 翻譯起始區(qū)271～290 的反義寡核苷酸片段,全鏈硫代修飾。用卵白蛋白和氫氧化鋁復(fù)制哮喘模型,用淋巴細(xì)胞分離液分離脾淋巴細(xì)胞,進(jìn)行體外培養(yǎng)并導(dǎo)入由陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染劑Geneshuttle 攜帶的反義寡核苷酸,分別用RT-PCR 及免疫細(xì)胞化學(xué)觀察脾淋巴細(xì)胞中STAT6 mRAN 的轉(zhuǎn)錄及STAT6 蛋白的表達(dá)水平,同時(shí)采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測定脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-4 的濃度。 結(jié)果:D 組脾淋巴細(xì)胞中STAT6 mRNA 表達(dá)水平(2.26±0.52)明顯高于A 組(1.16±0.48)、B 組(1.34±0.36) 、C 組(1.20±0.24)、E 組(1.17±0.43),均具有顯著性差異(P 均0.01),STAT6 ASODN 轉(zhuǎn)染后,E 組脾淋巴細(xì)胞中STAT6 mRNA 表達(dá)水平顯著低于D 組(P 0.01);免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示導(dǎo)入反義寡核苷酸后,E 組STAT6 蛋白的表達(dá)明顯減少;D 組脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-4 分泌水平(43.68±5.5 pg/ml)明顯高于A 組(24.1±7.7 pg/ml)、B 組(29.63±8.9 pg/ml) 、C 組(28.49±6.3 pg/ml)、E組(26.47±8.4 pg/ml),均具有顯著性差異(P 均0.01),STAT6 ASODN 轉(zhuǎn)染后, E 組培養(yǎng)上清中IL-4 分泌水平顯著低于D 組(P0.01)。 結(jié)論:STAT6 ASODN 可特異性抑制哮喘鼠脾淋巴細(xì)胞中STAT6 mRNA 的轉(zhuǎn)錄及STAT6 蛋白的表達(dá),并且能特異性抑制脾淋巴細(xì)胞中IL-4 的分泌,為反義技術(shù)治療哮喘提供了依據(jù)。
【圖文】：

各組細(xì)胞RT-PCR電泳圖譜

正常小鼠（HE×400）
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R562.25

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本文編號：2691888