【摘要】： 目的 首先通過建立酒精中毒,觀察血漿、肺泡灌洗液中IL-6和VEGF變化和肺臟病理改變,探討酒精中毒對肺臟是否有損害。然后在酒精中毒基礎上用內(nèi)毒素誘導急性肺損傷模型,觀察肺組織中IL-6、VEGF、MCP-1和STAT_3變化,研究有慢性酒精中毒史是否對急性肺損傷有易感性。最后用卡托普利干預治療酒精中毒大鼠急性肺損傷,通過觀察血氣和肺濕/干比值等生理指標,以及肺臟病理改變和肺臟免疫組化結(jié)果,研究血管轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)對酒精中毒大鼠急性肺損傷的保護作用。 方法 首先Wistar大鼠按經(jīng)典的酒精性肝病的制作方法,用灌胃的方法建立酒精中毒模型,然后經(jīng)靜脈注射LPS誘導ALI/ARDS大鼠模型,隨后加入卡托普利干預治療。將70只大鼠隨機分三個實驗。實驗一:對照組和酒精中毒組;實驗二:(1)對照組,(2)LPS組,(3)酒精中毒+LPS組;后兩組分為2h和6h兩個時間點。實驗三:(1)對照組,(2)LPS組,(3)酒精中毒+LPS組,(4)Cap+LPS組,(5)Cap+酒精中毒+LPS組;觀察各組生理指標,在6h測定肺組織濕/干比值;通過蘇木精—伊紅(HE)染色;ELISA法測大鼠血漿和肺泡灌洗液中IL-6和VEGF含量以及肺組織中IL-6、VEGF和MCP-1含量變化;免疫組化法測定肺組織VEGF的表達以及Western Blotting測定STAT_3的活性。 結(jié)果 實驗一(1)動脈血氣分析:對照組和酒精中毒組無顯著差別。(2)酒精中毒組血漿和肺泡灌洗液IL-6的表達比較對照組明顯增加(p＜0.01)。酒精中毒組血漿VEGF較對照組明顯增加(p＜0.01),而肺泡灌洗液VEGF較對照組明顯降低(p＜0.01)。(3)酒精中毒組比較對照組肺泡有輕微的炎性細胞浸潤。實驗二(1)動脈血氣分析:在LPS組和酒精中毒+LPS組中各時間點氧分壓和氧合指數(shù)與對照組相比明顯降低,而酒精中毒+LPS組與LPS組相比顯著降低;PH值、二氧化碳分壓在2h的LPS組和酒精中毒+LPS組中與對照組比較有顯著差異。而LPS組與酒精中毒+LPS組相比差異無顯著性。(2)肺濕、干重、肺濕/干比值:LPS組和酒精中毒+LPS組各時間點肺濕、干重、肺濕/干比值均較對照組顯著增加;在2h時酒精中毒+LPS組與LPS組比較差異顯著(p＜0.05)。(3)LPS組和酒精中毒+LPS組肺組織VEGF的表達較對照組明顯降低(p＜0.01),酒精中毒+LPS組與LPS組比較差異顯著(p＜0.01);IL-6和MCP-1在對照組肺組織無表達,IL-6在LPS組和酒精中毒+LPS組比較對照組顯著增高(p＜0.01),在2h時酒精中毒+LPS組與LPS組比較差異顯著(p＜0.05);MCP-1在LPS組和酒精中毒+LPS組較對照組顯著增高(p＜0.01),酒精中毒+LPS組與LPS組比較有顯著差異(2h,p＜0.01;6h,p＜0.05)(4)Western blotting法測定磷酸化的STAT_3蛋白表達:LPS組(2h),LPS組(6h),酒精中毒+LPS組(2h),酒精中毒+LPS組(6h)較對照組活性增加。實驗三(1)動脈血氣分析:給大鼠腹腔注射Cap后,動脈血氧分壓、二氧化碳分壓、PH值和氧合指數(shù)與LPS組和LPS+酒精中毒組相比各時間點均有不同程度的改善。在LPS+酒精中毒組中氧分壓和氧合指數(shù)明顯降低。各組尤以2h降低明顯(p＜0.01)。(2)肺組織病理學變化肉眼觀察:對照組肺呈淡粉紅色,無充血、出血、水腫及壞死灶;LPS+酒精中毒組(6h)肺呈暗紅色,肺組織體積增大、明顯充血、水腫、并見廣泛的點狀或灶狀出血,切口有粉紅色泡沫樣液體滲出;Cap+LPS+酒精中毒組(6h)肺充血、出血、水腫明顯減輕,切面見少許泡沫樣液體溢出。光鏡觀察:對照組見肺組織結(jié)構(gòu)清晰、肺泡壁薄、光滑,肺泡隔均勻一致;LPS+酒精中毒組(6h)見肺灶性出血、肺泡和肺間質(zhì)水腫、大量炎性細胞浸潤、肺泡壁明顯增厚,部分切片可見灶性肺不張、肺氣腫,但均未見透明膜形成,考慮與病程短有關;Cap+LPS+酒精中毒組(6h)見肺泡腔內(nèi)滲出及炎性細胞浸潤明顯減輕。(3)肺濕、干重、肺濕/干比值:給Cap組6h肺濕、干重、肺濕/干比值較LPS組和LPS+酒精中毒組均有改善(p＜0.01和p＜0.05)。(4)在LPS組肺組織VEGF的表達較對照組明顯降低(p＜0.01),在酒精中毒+LPS組中大鼠的VEGF降低最顯著(P＜0.01),給予Cap組肺組織VEGF的表達比較LPS組和酒精中毒+LPS組顯著增高(p＜0.01)。MCP-1在對照組肺組織無表達,MCP-1在LPS組和酒精中毒+LPS組較對照組顯著增高(p＜0.01),給予Cap則明顯下降(p＜0.01)。肺組織VEGF與MCP-1的表達呈顯著正相關r=0.386,p＜0.05。(5)免疫組織化學結(jié)果:肺組織VEGF陽性染色為棕黃色。對照組:肺泡上皮細胞、氣道上皮細胞胞漿有棕黃色或黃色顆粒沉著。酒精中毒+LPS組(6h):肺泡上皮細胞、氣道上皮細胞胞漿有稀少的陽性反應物沉積,多為點樣沉積,著色較淡,但炎性細胞(主要為肺泡巨噬細胞、中性粒細胞)有較明顯的棕黃色或黃色顆粒沉著。Cap+LPS+酒精中毒組(6h):較LPS組肺泡上皮細胞、氣道上皮細胞胞漿染色要深,但炎性細胞染色明顯減弱。 結(jié)論 實驗一:(1)慢性酒精中毒可以對肺組織引起損害,使炎癥介質(zhì)水平上調(diào),但并不能引起急性肺損傷。(2)慢性酒精中毒對肺功能有一定影響,使氧分壓和氧合指數(shù)同步下降,雖無統(tǒng)計學意義,但慢性酒精中毒也可以造成輕微肺損害。導致肺臟氣體交換功能低下。實驗二:(1)從實驗我們可以看出,有慢性酒精中毒基礎的大鼠對急性肺損傷更加敏感,也就是說,有慢性酒精中毒基礎的大鼠易患急性肺損傷,而且損傷的程度較沒有慢性酒精中毒基礎的嚴重。(2)實驗表明,在急性肺損傷初始階段,即急性肺損傷2小時的損傷程度較6小時表現(xiàn)明顯加重。(3)實驗說明在LPS和酒精中毒時JAK/STAT信號通路調(diào)控機制發(fā)揮作用。實驗三:(1)Cap對ARDS的干預治療,從VEGF和MCP-1的表達,從病理切片和免疫組化觀察,提示Cap可明顯減輕了急性肺損傷的炎癥反應,而在酒精中毒基礎上的急性肺損傷程度也明顯減輕,說明Cap對肺有一定的保護作用。
【圖文】：

2.酒精中毒組血漿和肺泡灌洗液IL一6的表達比較對照組明顯增加，p<0.01。精中毒組血漿vEGF較對照組明顯增加，p<0.01，而肺泡灌洗液VEGF較對明顯降低，，p<0.01(表2)。表2，各組實驗大鼠血漿和肺泡灌洗液IL一6和VEGF的表達(x士S)組別鼠數(shù)IL一6(Pg/ml)VEGF(Pglml)血槳肺泡灌洗液對照組酒精中毒血槳716.8士5.6肺泡灌洗液12.15士5.4124.75士7.0228.34士6.22740.2士17.9**61.34士5.93**62.15士9.07**14.16士8.51*組夕卞:**D<0.01P<03.肺臟HE染色，酒精中毒組與對照組比較肺泡有輕微的炎性細胞浸潤。

2.酒精中毒組血漿和肺泡灌洗液IL一6的表達比較對照組明顯增加，p<0.01。精中毒組血漿vEGF較對照組明顯增加，p<0.01，而肺泡灌洗液VEGF較對明顯降低，p<0.01(表2)。表2，各組實驗大鼠血漿和肺泡灌洗液IL一6和VEGF的表達(x士S)組別鼠數(shù)IL一6(Pg/ml)VEGF(Pglml)血槳肺泡灌洗液對照組酒精中毒血槳716.8士5.6肺泡灌洗液12.15士5.4124.75士7.0228.34士6.22740.2士17.9**61.34士5.93**62.15士9.07**14.16士8.51*組夕卞:**D<0.01P<03.肺臟HE染色，酒精中毒組與對照組比較肺泡有輕微的炎性細胞浸潤。
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R595.6;R563.8

【參考文獻】

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本文編號：2687869