【摘要】： 目的： 阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(obstructive sleep apnea syndrome，OSAS)是一種發(fā)病率較高的睡眠呼吸疾患，其心腦血管合并癥如高血壓、動脈粥樣硬化等對人體造成嚴重的危害。合并癥發(fā)生的原因主要是患者睡眠中頻繁發(fā)生的呼吸暫停，使機體處于一種間歇低氧(intermittenthypoxia，IH)／再氧合(re-oxygenation，ROX)交替出現(xiàn)的特殊內(nèi)環(huán)境，進而導致血管內(nèi)皮功能障礙。血管內(nèi)皮功能障礙表現(xiàn)為內(nèi)皮細胞分泌的血管活性物質(zhì)失調(diào)，主要包括一氧化氮(nitric oxide，NO)、內(nèi)皮素(endothelin，ET)及能促進血管內(nèi)皮細胞自身生長的血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)。目前有關(guān)OSAS相關(guān)心血管疾病的研究多局限于流行病學、臨床及動物實驗，而OSAS模式IH所致內(nèi)皮功能障礙的細胞學機制并不十分清楚，且IH的哪些因素與內(nèi)皮功能障礙嚴重程度密切相關(guān)尚未得到證實。鑒于上述原因，我們建立間歇低氧人臍靜脈內(nèi)皮細胞模型，從分子水平探討不同IH模式(即不同IH頻率、時限)下ET-1、NO系統(tǒng)及VEGF系統(tǒng)的變化，進一步明確間歇低氧相關(guān)心血管疾病發(fā)病的細胞學機制，從而為臨床治療提供實驗數(shù)據(jù)和理論基礎(chǔ)，對于預防和治療OSAS心腦血管合并癥，改善患者健康和生命的質(zhì)量有重要意義。 材料與方法： 實驗采用人臍靜脈內(nèi)皮細胞可傳代細胞株ECV304細胞系，分別暴露于不同的實驗條件，循環(huán)充入低氧氣體及正常氧濃度氣體，實驗分為四部分：第一部分間歇低氧組、間歇正常氧組與空白對照組比較；第二部分不同間歇低氧頻率組比較；第三部分不同間歇低氧時限組比較；第四部分間歇低氧組與持續(xù)低氧組比較。不同模式暴露完成后，分別測定下列指標： (1)ET系統(tǒng)：ET-1濃度(酶免疫測定)； (2)NO系統(tǒng)：NO濃度(硝酸還原酶法)，一氧化氮合酶(NOS)活性(化學比色法)，內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表達(逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)方法)； (3)VEGF系統(tǒng)：VEGF濃度(雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗)，VEGFR-2 KDR mRNA表達(逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)方法)。 結(jié)果： 1．ET-1： (1)間歇低氧組、間歇正常氧組及空白對照組比較：三組之間ET-1濃度有顯著差異(F=59.229，P=0.000)，其中間歇低氧組顯著高于間歇正常氧組及空白對照組，而間歇正常氧組及空白對照組間差異無顯著性； (2)不同間歇低氧頻率組：隨再氧合時間的延長，ET-1濃度呈增加趨勢，但當再氧合時間達到8min15s時ET-1濃度下降(F=109.056，P=0.000)； (3)不同間歇低氧時限組：不同間歇低氧時限組ET-1濃度無顯著差異(t=1.304，P=0.215)； (4)間歇低氧組與持續(xù)低氧組比較：相同累計低氧時間及程度的間歇低氧組ET-1濃度顯著高于持續(xù)低氧組(t=2.209，P=0.042)。 2．NO系統(tǒng)： (1)間歇低氧組、間歇正常氧組及空白對照組比較：三組之間NO濃度、NOS活性和eNOS mRNA水平有顯著差異(P＜0.05)，其中間歇低氧組顯著低于間歇正常氧組及空白對照組，而間歇正常氧組及空白對照組間差異無顯著性； (2)不同間歇低氧頻率組：隨再氧合時間的延長，NO濃度、NOS活性和eNOS mRNA水平呈降低趨勢，但當再氧合時間達到8min15s時升高(P＜0.05)； (3)不同間歇低氧時限組：不同間歇低氧時限組間NO濃度、NOS活性和eNOS mRNA水平無顯著差異(P＞0.05)； (4)間歇低氧組與持續(xù)低氧組比較：相同累計低氧時間及程度的間歇低氧組NO濃度、NOS活性和eNOS mRNA水平顯著低于持續(xù)低氧組(P＜0.05)。 3．VEGF系統(tǒng)： (1)間歇低氧組、間歇正常氧組及空白對照組比較：三組之間VEGF濃度和KDR mRNA水平有顯著差異(P＜0.05)，其中間歇低氧組顯著高于間歇正常氧組及空白對照組，而間歇正常氧組及空白對照組間差異無顯著性； (2)不同間歇低氧頻率組：隨再氧合時間的延長，VEGF濃度和KDRmRNA水平呈增加趨勢，但當再氧合時間達到8min15s時下降(P＜0.05)： (3)不同間歇低氧時限組：不同間歇低氧時限組間VEGF濃度和KDRmRNA水平無顯著差異(P＞0.05)； (4)間歇低氧組與持續(xù)低氧組比較：相同累計低氧時間及程度的間歇低氧組VEGF濃度和KDR mRNA水平顯著高于持續(xù)低氧組(P＜0.05)。 結(jié)論： OSAS模式IH可導致人臍靜脈內(nèi)皮細胞中ET-1水平升高，，NO系統(tǒng)下調(diào)，VEGF系統(tǒng)上調(diào)，且再氧合過程在其中發(fā)揮了重要作用。
【圖文】：

注:兩組比較 t=1.057，P二0.3174間歇低氧組與持續(xù)低氧組比較:相同累計低氧時間及程度的間歇低氧組 eNosmRNA顯著低于持續(xù)低氧組(見表3一12，圖3一4)。表3一12間歇低氧組與持續(xù)低氧組 eNOSmRNA比較(牙士:)組別例數(shù)eNOS間歇低氧組持續(xù)低氧組 0.952士 0.070 1.194士0.125注:兩組比較t二5.045，尸二0.000日日演p一aetinCNOS肖O公cr3t卜鑒氧低持續(xù)組歇低氧組間低氧頻組歇間率夯歇低氧組時間限岡氧低組歇時間限川低氧頻歇率組間氧歇低頻組率間陌歇低氧頻率組間嘆1對照組空白歇正間常氧組歇低氧組間心圖3一4eNOSmRNA表達36
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R56

【參考文獻】

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本文編號：2686087