發(fā)布時間：2020-05-26 11:42

【摘要】： 目的:大量研究表明,再灌注可以觸發(fā)一系列損傷反應,引起相應臟器致命性損傷。人們發(fā)現(xiàn)肺移植、體外循環(huán)手術、肺動脈血栓內膜剝除術、肺栓塞溶栓治療等多種臨床情況下發(fā)生肺缺血后再灌注,肺損傷不但沒有減輕反而加重,臨床上將這種現(xiàn)象稱為肺缺血再灌注損傷(ischemia-reperfusion lung injury, IRLI)。其特征性變化是肺毛細血管內皮細胞受損,表現(xiàn)為肺血管通透性增加、肺血管阻力增加、肺動脈高壓等。目前,再灌注肺損傷的確切發(fā)生機制尚不十分清楚,可能與炎性介質、氧自由基、肺泡上皮和肺血管內皮損傷等多種因素有關。熱休克蛋白(heat shock protein, HSP)是細胞在遭受到熱或其他損傷因素(如缺血、缺氧、重金屬)作用后誘導生成的一組蛋白質。在維持組織細胞的自身穩(wěn)定和環(huán)境適應性及抵御外界損傷等方面具有保護作用。研究發(fā)現(xiàn),熱休克蛋白對心肌、肝臟、腦的缺血再灌注損傷有一定的保護作用,但對肺的缺血再灌注損傷的保護作用尚有待于進一步研究。本文旨在探討兔肺動脈栓塞缺血再灌注模型中血管內皮損傷時釋放的因子內皮素-1(endothelin-1, ET-1),一氧化氮(nitric oxide, NO),血管假血友病因子(von Wilebrand factor, vWF)的變化和熱休克蛋白(heat shock protein, HSP)的表達研究肺損傷的可能機制及熱休克蛋白的保護作用。 方法:選取健康新西蘭白兔30只,體重2.5~3.5kg,雌雄不拘。將Berman球囊漂浮導管的球囊置于左下肺動脈開口處,充盈球囊,堵塞左下肺動脈,建立肺動脈栓塞模型。然后球囊放氣,復制肺動脈栓塞缺血再灌注模型。隨機分為5組:(1)假手術組(n=6),(2)肺動脈栓塞1h組(n=6),(3)肺動脈栓塞2h組(n=6),(4)肺動脈栓塞2h再灌注1h組(n=6),(5)肺動脈栓塞2h再灌注2h組(n=6)。各組動物分別于栓塞前、栓塞1h、栓塞2h、栓塞2h再灌注1h、栓塞2h再灌注2h抽取靜脈血,抗凝、離心、取上清液,分裝后放入-20℃保存,分別采用放射免疫法測定血漿內皮素(ET)的含量,酶聯(lián)免疫法測定血管性假血友病因子(vWF)的含量,硝酸還原酶顯色法測定一氧化氮(NO)的含量。實驗動物分別在相應時間點處死,取少量左肺組織分別用4%多聚甲醛、4%戊二醛固定,采用免疫組織化學方法測定熱休克蛋白(HSP70)的表達及進行組織病理分析觀察組織超微結構變化。采用SPSS 11.5版統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。 結果:(1)血漿中ET-1、NO及NO/ET-1比值的變化:除假手術組外,肺栓塞1h組、肺栓塞2h組、肺栓塞2h再灌注1h組、肺栓塞2h再灌注2h組血漿中的ET-1、NO含量均高于栓塞前水平,有統(tǒng)計學意義。與假手術組相比,肺栓塞1h、2h血漿中ET-1、NO的含量明顯增多;再灌注后進一步增高,再灌注2h升高最為明顯。與栓塞前及假手術組相比,肺栓塞1h、栓塞2h、再灌注1h、再灌注2h血漿中NO/ET-1明顯降低。(2)各組血漿中vWF的含量變化:除假手術組外,肺栓塞1h組、肺栓塞2h組、肺栓塞2h再灌注1h組、肺栓塞2h再灌注2h組血漿中的vWF含量均高于栓塞前水平,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與假手術組相比,肺栓塞1h、2h血漿中vWF的含量明顯增多;再灌注1h后進一步增高,并于再灌注2h達到高峰。(3)肺缺血再灌注的發(fā)生,免疫組織化學染色顯示兔肺組織中HSP70陽性細胞主要在肺泡上皮細胞、部分支氣管上皮細胞內大量表達。與假手術相比,肺栓塞1h、2h、再灌注1h、2h時,兔肺組織HSP70的陽性面積均顯著增高(P0.05)。并且再灌注1h、2h組明顯高于栓塞1h、2h組,再灌注2h組高于再灌注1h組(P0.05)。(4)肺栓塞再灌注后透射電鏡顯示超微結構毛細血管內皮細胞腫脹、空泡化、部分胞漿溶解,核染色質濃縮,線粒體部分或大部分嵴和膜融合消失。 結論:(1)本實驗通過介入方法使用Berman球囊漂浮導管成功制作肺缺血再灌注動物模型,具有可控性強、重復性好的優(yōu)點,是基礎研究的理想動物模型。(2)肺電鏡超微結構變化提示肺缺血再灌注過程中存在血管內皮損傷。(3)ET-1、NO、vWF均可作為內皮細胞損傷的標志,本文結果顯示內皮細胞損傷及功能障礙參與肺缺血再灌注損傷。(4)HSP70在肺栓塞缺血再灌注過程中表達增加,推測HSP70參與了肺缺血再灌注損傷的保護。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R563.5

【參考文獻】

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