【摘要】： 目的: 研究布地奈德(Budesonide,BUD)對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥、氣道重塑和肺表面活性物質(zhì)系統(tǒng)的影響,分析經(jīng)布地奈德干預(yù)后哮喘小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化、TGFβ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與哮喘小鼠氣道炎癥、氣道重塑、肺表面活性物質(zhì)系統(tǒng)的相互關(guān)系,探討布地奈德在哮喘治療中的作用機(jī)制。 方法: 雌性昆明小鼠40只隨機(jī)分為4組,每組10只。1、哮喘模型組(A組):昆明小鼠分別于第1、14天腹腔注射以生理鹽水(NS)溶解的卵蛋白(ovalbumin, OVA)50ug和氫氧化鋁1mg混懸液0.2ml致敏,第21天予以1%卵蛋白5ml霧化吸入激發(fā),每日一次,每次30分鐘,吸入14天。2、治療對(duì)照組(B組):致敏和激發(fā)方法同哮喘模型組,每次激發(fā)前1小時(shí)吸入NS 5ml,每日一次,每次30分鐘,吸入14天。3、BUD治療組(C組):致敏和激發(fā)方法同哮喘模型組,每次激發(fā)前1小時(shí)吸入NS溶解的BUD霧化液5ml(含BUD 1mg),每日一次,每次30分鐘,吸入14天。4、正常對(duì)照組(D組):昆明小鼠分別于第1、14天腹腔注射NS 0.2ml,第21天予以NS 5ml霧化吸入,每日一次,每次30分鐘,吸入14天。各組小鼠于末次吸入24小時(shí)后斷頸處死,采集標(biāo)本。采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定小鼠支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)TGF-β_1、IL-12、IL-13的含量。取小鼠肺組織行蘇木素-伊紅(HE)染色,過(guò)碘酸-雪呋(PAS)染色,Van Gieson(VG)染色,計(jì)算機(jī)圖像分析測(cè)定小鼠肺組織氣道周圍單位面積內(nèi)嗜酸性細(xì)胞個(gè)數(shù)表示氣道周圍嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)情況、單位基底膜長(zhǎng)度PAS染色陽(yáng)性面積表示氣道黏液分泌情況、單位基底膜長(zhǎng)度VG染色陽(yáng)性面積表示氣道周圍膠原增生情況。采用免疫組化圖像分析測(cè)定小鼠肺組織樹突狀細(xì)胞(dendritic cells,DC),TGF-β_1、TGFβ受體Ⅰ、TGFβ受體Ⅱ、Smad2/3、Smad4、Smad7以及肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白(surfactant associated proteins,SP)SP-A、SP-B的表達(dá)。透射電鏡下觀察肺泡II型細(xì)胞形態(tài)。 結(jié)果: 1、A組小鼠氣道嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)、黏液分泌、樹突狀細(xì)胞表達(dá)較D組增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與B組小鼠比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C組抑制了致敏小鼠OVA激發(fā)后引起的氣道周圍嗜酸性細(xì)胞明顯浸潤(rùn)、氣道黏液分泌亢進(jìn)、氣道周圍樹突狀細(xì)胞增多,與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、A組小鼠與B組比較,BALF中IL-12、IL-13、TGF-β_1的含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A組小鼠與D組小鼠比較, BALF中TGF-β_1和IL-13升高,而IL-12降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,C組抑制了致敏小鼠OVA激發(fā)后引起的BALF中IL-13的升高,與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;但未能抑制BALF中TGF-β_1的升高以及IL-12的降低,與A組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3、A組小鼠氣道膠原增多、TGF-β_1表達(dá)增多,與D組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與B組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C組抑制了致敏小鼠OVA激發(fā)后引起的氣道壁膠原增多,與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;但未能抑制氣道過(guò)多的TGF-β_1表達(dá),與A組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;C組膠原增生較D組增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A組氣道壁膠原增生程度與TGF-β_1的表達(dá)呈正相關(guān)。 4、A、B組小鼠氣道TGFβ/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C組下調(diào)了致敏小鼠OVA激發(fā)后引起的氣道過(guò)多的TGFβ受體Ⅰ的表達(dá),同時(shí)上調(diào)了Smad7的表達(dá),與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;對(duì)于TGFβ受體Ⅱ、Smad2/3、Smad4的表達(dá),C組與A組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A組氣道壁膠原增生程度與TGFβ受體Ⅰ的表達(dá)呈正相關(guān),與Smad7的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。 5、A、B組小鼠肺泡上皮SP-A、SP-B的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A、C組小鼠肺泡上皮SP-A、SP-B的表達(dá)較D組減少,與D組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C組肺泡上皮SP-A、SP-B的表達(dá)較A組增多,與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A組小鼠肺泡上皮SP-A、SP-B的表達(dá)與氣道周圍TGF-β_1、TGFβ受體Ⅰ的表達(dá)呈負(fù)相關(guān),與Smad7的表達(dá)呈正相關(guān)。 6、通過(guò)透射電鏡觀察,A、B組小鼠可見肺泡II型細(xì)胞板層小體和線粒體較少,而且有明顯排空和空泡化改變;C組肺泡II型細(xì)胞板層小體和線粒體較A組增多,排空和空泡化改變減輕;D組顯示肺泡II型細(xì)胞含豐富的板層小體和線粒體,結(jié)構(gòu)完整,無(wú)排空和空泡化改變。 結(jié)論: 1、布地奈德通過(guò)部分抑制哮喘小鼠IL-12/IL-13比例失衡調(diào)節(jié)哮喘Th1/Th2細(xì)胞平衡,并可抑制哮喘小鼠肺組織增多的嗜酸粒細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和粘液分泌發(fā)揮其抗氣道炎癥作用,布地奈德不能抑制哮喘小鼠肺組織過(guò)高的TGF-β_1的表達(dá)。 2、布地奈德可通過(guò)下調(diào)哮喘小鼠氣道TGFβ受體Ⅰ的表達(dá)和上調(diào)Smad7的表達(dá)抑制哮喘小鼠活化的TGFβ/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,進(jìn)而抑制TGF-β_1的致氣道重塑作用。布地奈德對(duì)哮喘小鼠氣道重塑的抑制作用是不完全的。 3、哮喘小鼠肺泡上皮SP-A、SP-B的表達(dá)減少,存在肺泡II型細(xì)胞的損傷,考慮與哮喘小鼠肺組織TGF-β_1過(guò)高的表達(dá)對(duì)肺泡II型細(xì)胞的抑制作用有關(guān)。布地奈德可抑制哮喘小鼠活化的TGFβ/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,減輕TGF-β_1對(duì)肺泡II型細(xì)胞和SP-A、SP-B的抑制作用。
【圖文】：

圖 3：A 組（哮喘模型組）氣道周圍有較多 EOS 浸潤(rùn)。（HE 染色×400）圖 4：B 組（治療對(duì)照組）氣道周圍 EOS浸潤(rùn)與 A 組相似。（HE 染色×400）

圖 3：A 組（哮喘模型組）氣道周圍有較多 EOS 浸潤(rùn)。（HE 染色×400）圖 4：B 組（治療對(duì)照組）氣道周圍 EOS浸潤(rùn)與 A 組相似。（HE 染色×400）
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2678539