【摘要】： 目的:研究促紅細(xì)胞生成素(EPO)預(yù)處理對(duì)兔離體肺缺血再灌注損傷保護(hù)作用并探討其在缺血再灌注損傷過(guò)程中對(duì)肺保護(hù)的作用機(jī)制,從而為臨床肺保護(hù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:采用離體兔肺缺血再灌注損傷模型,將48只健康新西蘭大白兔隨機(jī)分成3組,即對(duì)照組(Control group,C組)、缺血再灌注組(Ischemia-reprefusion group,IR組)及EPO預(yù)處理組(Erythropoietin preconditioning group,EP組),每組16只。C組開(kāi)胸后未給予缺血處理,直接同種異體血灌注2h。EP組、IR組24h前經(jīng)靜脈分別注射給予5000u/kg EPO及等量的生理鹽水進(jìn)行預(yù)處理,用4℃低鉀右旋糖苷(LPD)液灌洗和保存肺,在4℃條件下保存6h。6h后以同種異體兔血再灌注2h。各組分別與缺血后1h(T1)、再灌注時(shí)(T2)、再灌注后1h(T3)、2h(T4)留取肺組織標(biāo)本待檢。檢測(cè)指標(biāo):1、TUNEL法檢測(cè)肺細(xì)胞的凋亡情況。2、烘干法檢測(cè)肺濕/干重比(W/D)。3、檢測(cè)肺組織中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。4、免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肺組織中caspase-3蛋白表達(dá)。5、分別用光鏡及透視電鏡觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)變化。 結(jié)果:1、TUNEL檢測(cè)結(jié)果示:再灌注后IR組、EP組細(xì)胞凋亡指數(shù)較C組增高(p0.05或p0.01),但EP組細(xì)胞AI與IR組相比明顯下降(p0.05)。2、與C組相比,剛開(kāi)始灌注時(shí)IR組、EP組肺組織W/D值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),再灌注后, IR組、EP組肺組織W/D值升高(p0.05或p0.01);與IR組相比,EP組肺組織W/D值下降(p0.05或p0.01)。3、與C組相比,在剛開(kāi)始灌注時(shí)及再灌注后,IR組肺組織中的MDA含量升高(p0.05或p0.01);EP組再灌注后,肺組織MDA含量升高(p0.05或p0.01);但與IR相比,EP組肺組織MDA含量降低(p0.05或p0.01)。與C組相比,剛開(kāi)始灌注及再灌注后,IR組肺組織SOD活力降低(p0.05或p0.01),EP組再灌注后SOD活力降低(p0.05);但與IR相比,肺組織SOD活力升高(p0.05)。4、肺組織中caspase-3表達(dá),剛開(kāi)始灌注時(shí),IR組與C組相比升高(p0.05);再灌注后,IR組、EP組顯著增高(p0.01或p0.05);2h后,EP組與IR組相比降低(p0.05)。光鏡下示:對(duì)照組僅有很少量的棕黃色陽(yáng)性產(chǎn)物,IR組及EP組發(fā)現(xiàn)大量的棕黃色陽(yáng)性產(chǎn)物,但EP組較IR組明顯較少。5、光鏡下:C組肺泡細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常;IR組肺組織出現(xiàn)彌漫改變,肺泡細(xì)胞腫脹,肺泡間質(zhì)水腫、充血及炎癥反應(yīng)明顯,肺毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血及白細(xì)胞聚集;EP組肺組織細(xì)胞損傷較IR組明顯減輕,肺泡腔內(nèi)滲出明顯減少,白細(xì)胞聚集減少。透視電鏡下:C組Ⅰ型、Ⅱ型肺泡細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常;IR組Ⅰ型肺泡細(xì)胞扁平,基底膜增厚,胞漿出現(xiàn)空泡;Ⅱ型肺泡細(xì)胞微絨毛減少,線粒體腫脹,線粒體嵴減少,嗜鋨性板層小體減少;內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,基底膜增厚,細(xì)胞間隙增寬,染色質(zhì)聚集,核變性壞死。EP組Ⅰ型及Ⅱ型肺泡細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常,核染色質(zhì)邊集,線粒體呈圓形或橢圓形,嵴清楚,微絨毛及板層小體結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯改變,少數(shù)線粒體可出現(xiàn)腫脹,內(nèi)皮細(xì)胞輕度腫脹,基底膜基本正常。 結(jié)論: 1、肺缺血再灌注所導(dǎo)致的損傷,主要表現(xiàn)為炎癥反應(yīng)所致的肺泡水腫、充血、結(jié)構(gòu)破壞,同時(shí)肺組織細(xì)胞凋亡也參與了肺缺血再灌注損傷過(guò)程。2、促紅細(xì)胞生成素對(duì)預(yù)處理對(duì)兔離體肺缺血再灌注損傷有明顯保護(hù)作用,其機(jī)制可能與其參與缺血再灌注后的抗炎、抑制細(xì)胞凋亡及抗氧化等作用有關(guān)。
【圖文】：

T1 T2 T3 T4時(shí)間點(diǎn) C 組相比，*p<0.05，，**p<0.01；與同時(shí)間點(diǎn) IR 相比，#p<0.05。圖 5:各組不同時(shí)間點(diǎn)肺組織 caspase-3 表達(dá)察 caspase-3 表達(dá)caspase-3 陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物為棕黃色，主要分布在胞漿中，在肺胞及支氣管粘膜上皮細(xì)胞可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。泡細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及支氣管粘膜上皮細(xì)胞的胞漿中可見(jiàn)正常細(xì)胞無(wú)差別；IR 組肺泡細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及支氣管核中含有大量棕黃色陽(yáng)性產(chǎn)物，范圍較正常細(xì)胞明顯擴(kuò)大；性產(chǎn)物，但較 IR 組明顯減少，范圍也縮�。ㄒ�(jiàn)圖 6）。

圖 6-2：再灌注 2h 后 IR 組 caspase-3 表達(dá)（×400） 圖 6-3：再灌注 2h 后 EP 組 caspase-3 表達(dá)（×400）5. 肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察5.1、光鏡下病理形態(tài)學(xué)觀察再灌注 2h 后，C 組肺泡細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常，肺泡壁光滑，肺泡間質(zhì)均勻一致無(wú)明顯充血、水腫及炎癥反應(yīng)，肺泡腔內(nèi)無(wú)明顯滲出。IR 組肺組織出現(xiàn)彌漫改變肺泡細(xì)胞腫脹，肺泡間質(zhì)水腫、充血及炎癥反應(yīng)明顯，肺泡腔內(nèi)充滿滲出液及大量癥細(xì)胞，肺毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血及白細(xì)胞聚集。EP 組肺組織細(xì)胞損傷較 IR 組明顯輕，肺泡腔內(nèi)滲出明顯減少，肺毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血減輕，白細(xì)胞聚集減少（見(jiàn)圖 7
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R563

【參考文獻(xiàn)】

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1 ;Nonhematopoietic erythropoietin derivative protects cardiomyocytes from hypoxia/reoxygenation-induced apoptosis[J];Journal of Nanjing Medical University;2008年02期

2 胡楊;鄭啟新;秦文;;促紅細(xì)胞生成素對(duì)大鼠脊髓損傷后caspase-3表達(dá)及神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[J];生物骨科材料與臨床研究;2008年06期

3 朱光旭,楊珂,霍江濤;缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及其調(diào)控[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè));2001年03期

4 劉長(zhǎng)江;于春雷;張弘;;促紅細(xì)胞生成素對(duì)腦創(chuàng)傷患者外周血LPO、SOD的影響[J];中國(guó)廠礦醫(yī)學(xué);2008年06期

5 吳天順,任先軍,滕曉華,呂根法,張松濤,李杰,劉永才;促紅細(xì)胞生成素對(duì)脊髓缺血再灌注損傷保護(hù)作用及其機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)矯形外科雜志;2005年09期

6 劉亞,蔡錦方,李振貴;重組人促紅細(xì)胞生成素對(duì)骨骼肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J];中國(guó)矯形外科雜志;2005年21期

本文編號(hào)：2676674