【摘要】： 第一部分內(nèi)毒素復(fù)合油酸二次打擊致大鼠急性肺損傷模型的建立 目的 研究評價腹腔注射內(nèi)毒素和/或靜脈注射油酸的方法致大鼠急性肺損傷模型的不同特點及其可能機制。 方法 24只雄性Wistar大鼠,體重250±20g。隨機分為四組,每組6只。①對照組(C組):腹腔注射生理鹽水10ml·kg-1;②內(nèi)毒素組(LPS組):腹腔注射1%LPS 10mg·kg-1;③油酸組(OA組):靜脈注射OA 0.15 ml·kg-1;④內(nèi)毒素+油酸組(LPS+OA組):腹腔注射1%LPS 10mg·kg-1,30min后靜脈注射OA 0.15ml·kg-1。觀察120min內(nèi)各組大鼠平均動脈壓和心率變化率的改變。120min后處死動物采集標(biāo)本。分別檢測肺組織TLR2和TLR4mRNA、核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)P65、血清IL-6、肺組織髓過氧化物酶(MPO)含量、動脈血氣指標(biāo)和肺組織濕-干重比(W/D),HE染色觀察肺組織病理學(xué)改變。 結(jié)果 與C組比較,LPS組肺組織TLR4mRNA表達上調(diào),肺組織NF-κBp65水平和MPO含量及血清IL-6含量顯著增加,肺組織W/D比值及血氣分析結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義,病理組織學(xué)改變輕微;OA組肺組織TLR2mRNA表達上調(diào),肺組織NF-κBp65水平和MPO含量及血清IL-6含量無顯著改變,肺組織W/D比值升高,pH值和PaO2降低,PaCO2升高,病理組織學(xué)改變顯示嚴(yán)重的肺泡上皮細胞損傷和肺泡結(jié)構(gòu)破壞。LPS+OA組肺組織TLR2mRNA和TLR4mRNA表達均上調(diào),肺組織NF-κBp65水平、MPO含量和W/D比值及血清IL-6含量顯著增加,pH值和PaO2降低,PaCO2升高,病理組織學(xué)改變顯示肺泡破壞嚴(yán)重,大量組織液滲出。 結(jié)論 內(nèi)毒素復(fù)合油酸可以產(chǎn)生協(xié)同作用,激活大鼠肺臟TLR2和TLR4,產(chǎn)生大量致炎細胞因子,并造成大鼠嚴(yán)重的肺臟病理生理改變,因此可以認(rèn)為該模型與臨床ALI/ARDS發(fā)病過程更為接近,是一種研究ALI發(fā)病機制及早期干預(yù)的較理想的動物模型。 第二部分膽堿能抗炎通路對內(nèi)毒素復(fù)合油酸致大鼠急性肺損傷的影響 目的 應(yīng)用基因芯片技術(shù)研究內(nèi)毒素復(fù)合油酸二次打擊致大鼠急性肺損傷的發(fā)病機制;研究膽堿能抗炎通路對大鼠急性肺損傷的影響;觀察脾臟在膽堿能抗炎通路中的作用并探討其可能的作用機制。 方法 42只雄性Wistar大鼠,體重250±20g。隨機分為七組,每組6只。①C組:腹腔注射生理鹽水10ml·kg-1;②ALI組:腹腔注射1%LPS 10mg·kg-1,30min后靜脈注射OA 0.15ml·kg-1;③ST組:右頸迷走神經(jīng)干連接刺激電極,以5V、2ms、1Hz強度持續(xù)刺激神經(jīng)10min,腹腔注射1%LPS10mg·kg-1,再持續(xù)刺激神經(jīng)10min,20min后靜脈注射OA 0.15ml·kg-1;④THA組:靜脈注射THA1.5mg·kg-1,10min后行ALI組操作;⑤SP組:腹部正中切口剖腹行脾切除術(shù),10min后行ALI組操作;⑥SP+ST組:脾切除術(shù)后行ST組操作;⑦SP+THA組:脾切除術(shù)后行THA組操作。觀察實驗全程大鼠平均動脈壓和心率變化率,各組動物均于130min后從頸總動脈采血1ml行血氣分析,處死動物采集標(biāo)本,分別檢測肺組織TLR通路相關(guān)基因、TLR2和TLR4mRNA、核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)P65、血清IL-6、肺組織髓過氧化物酶(MPO)含量和肺組織濕-干重比(W/D),HE染色觀察左肺組織病理學(xué)改變。 結(jié)果 ALI組與C組比較,MAP和HR在60min后顯著下降;pH和PaO2均顯著下降,PaCO2顯著升高;肺泡破壞嚴(yán)重,有大量組織液滲出;肺組織W/D及MPO活性均顯著增高;肺組織NF-κB p65蛋白表達明顯增強;血清IL-6水平顯著升高;與C組相比,其余六個實驗組上調(diào)2倍的TLR相關(guān)基因有32條,肺組織TLR2和TLR4mRNA表達均顯著增加,組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異; ST組和THA組與ALI組比較,MAP和HR顯著上升;pH和PaO2均顯著升高,PaCO2顯著下降;肺組織病理改變明顯改善;肺組織W/D及MPO活性均顯著降低;表達下調(diào)基因只有NF-κB通路中的6條;肺組織NF-κB p65蛋白表達及血清IL-6水平顯著下降; SP組與ALI組比較,MAP和HR顯著上升;pH和PaO2均顯著上升,PaCO2顯著下降;肺組織病理改變顯著減輕;肺組織W/D及MPO活性顯著降低;肺組織NF-κB p65表達及血清IL-6水平顯著下降; SP+ST組和SP+THA組與SP組比較,MAP和HR無顯著差異;血氣分析只有PaO2有顯著改變;肺組織MPO活性顯著降低,W/D、肺組織NF-κB p65表達及血清IL-6水平均無顯著改變; SP+ST組與ST組、SP+THA組與THA組比較,MAP和HR均顯著降低;pH和PaO2均顯著下降,PaCO2均顯著升高;肺組織W/D及MPO活性均顯著增高;肺組織NF-κB p65表達增強,血清IL-6水平顯著升高;上調(diào)基因均為NF-κB通路基因。 結(jié)論 一、內(nèi)毒素復(fù)合油酸二次打擊可激活大鼠肺組織TLR2和TLR4,通過活化細胞內(nèi)多條轉(zhuǎn)導(dǎo)通路造成肺損傷; 二、電刺激迷走神經(jīng)或者靜脈注射他克林可激活CAP,對內(nèi)毒素復(fù)合油酸二次打擊致大鼠ALI提供保護作用; 三、CAP作用機制是通過抑制NF-κB途徑的活化,減少炎癥因子生成而實現(xiàn)的,與ALI時TLRs的活化無關(guān); 四、脾臟在CAP中發(fā)揮重要作用,脾切除可顯著減弱CAP對ALI的保護作用。
【圖文】：

C 組左肺呈鮮紅色；LPS 組顏色稍暗；OA 組和 LPS+OA 組呈暗紅色，，肺組織彈性差，LPS+OA 組支氣管內(nèi)可見粉紅色液體。光鏡下 LPS 組大鼠肺組織充血，肺泡擴張，有中性粒細胞附著肺泡毛細血管壁；OA 組主要表現(xiàn)為肺泡腔狹窄，肺泡壁增厚，肺泡破壞，肺泡內(nèi)有大量紅細胞；LPS+OA 組 肺泡破壞嚴(yán)重，大量組織液滲出（見圖 6）。C 組 LPS 組

C LPS OA LPS+OA圖 10. 肺組織 NF-κB p65Western-blotting 結(jié)果血清 IL-6 水平改變LPS 組和 LPS+OA 組與 C 組相比，血清 IL-6 水平顯著升高(清 IL-6 與 C 組比較無顯著改變（P㧐0.05）（見表 4）。表 4. 四組動物血清 IL-6 水平改變（n=6, x±s）組 別 IL-6(μg/L)C 組 44.02±7.23LPS 組 175.78±19.13**OA 組 53.80±13.72LPS+OA 組 190.52±40.52**與 C 組比較，*P<0.05，**P<0.01
【學(xué)位授予單位】：北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R563.8

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃健;楊志煥;陳力勇;周健;蔣東波;;全身炎癥反應(yīng)大鼠迷走神經(jīng)反射通路興奮性的改變[J];重慶醫(yī)學(xué);2008年01期

2 廖克龍,朱佩芳,王正國,盧家凱,劉寶松,尹志勇;大鼠胸部撞擊傷肺損傷模型的建立[J];創(chuàng)傷外科雜志;2001年04期

3 張青,毛寶齡,錢桂生,陳正堂,徐劍鋮,李琦;油酸和內(nèi)毒素兩次打擊大鼠急性肺損傷動物模型研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2000年06期

4 汪國平;脾切除術(shù)后暴發(fā)性感染[J];肝膽外科雜志;1996年04期

5 錢桂生;全身炎癥反應(yīng)綜合征、急性肺損傷與急性呼吸窘迫綜合征[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;1999年05期

6 陸月明;油酸致急性肺損傷動物模型析評[J];中華急診醫(yī)學(xué)雜志;2005年01期

7 李磊,王興鵬,吳愷;實驗性膿毒癥小鼠白細胞基因表達譜的變化[J];中華急診醫(yī)學(xué)雜志;2005年02期

8 錢桂生;全身炎癥反應(yīng)綜合征、急性肺損傷與急性呼吸窘迫綜合征[J];醫(yī)師進修雜志;2005年03期

9 蔣登金,郭光金,陳維佩,張?zhí)祜w,張坤;血脾屏障結(jié)構(gòu)與功能的實驗研究[J];中華肝膽外科雜志;2002年01期

10 毛寶齡;深入探討全身炎癥反應(yīng)的失控與調(diào)控[J];中華內(nèi)科雜志;1997年01期

本文編號：2676335