【摘要】： 目的 水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)是一類可調(diào)節(jié)水進(jìn)出細(xì)胞膜的水通道同源大家族的總稱。目前,在人類及哺乳動(dòng)物體內(nèi)共發(fā)現(xiàn)13個(gè)亞型。隨著對(duì)AQPs研究的不斷深入,在分子水平上解釋了水轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。1992年,AQP1首先被鑒定,它在體內(nèi)扮演著重要角色,參與滲透壓驅(qū)動(dòng)下的水的轉(zhuǎn)運(yùn),介導(dǎo)藥理作用及水腫形成。金黃色葡萄球菌是院內(nèi)獲得性肺炎的常見(jiàn)致病菌,α-Toxin是其主要毒素,可結(jié)合在宿主細(xì)胞膜上,插入細(xì)胞膜疏水區(qū),形成七聚體孔型通道,造成水或離子通過(guò)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或破裂死亡。細(xì)菌的感染最明確的后果是組織內(nèi)水穩(wěn)態(tài)的失衡,一般表現(xiàn)為局部或全身的水腫。水穩(wěn)態(tài)的機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化方法明確AQP1在大鼠肺組織的表達(dá)及分布,并探討金黃色葡萄球菌α-溶血素(α-Toxin)對(duì)大鼠肺水通道蛋白-1(AQP1)表達(dá)的影響。 方法 Wistar健康雄性大鼠24只,隨機(jī)分為鹽水對(duì)照組,α-Toxin 6小時(shí)組,α-Toxin10小時(shí)組,α-Toxin24小時(shí)組,每組各6只。HE染色觀察各組大鼠肺組織病理改變,測(cè)定肺濕干比重(W/D)、動(dòng)脈血氧分壓(PaO_2)及免疫組化SABC法檢測(cè)AQP1表達(dá)變化。 結(jié)果 1、金黃色葡萄球菌α-Toxin引起大鼠肺水腫及肺出血,且損傷程度與毒素作用時(shí)間相關(guān),HE染色,W/D及PaO_2可標(biāo)志肺損傷程度。與對(duì)照組比較,模型組均出現(xiàn)肺損傷表現(xiàn),6-24小時(shí)存在明顯的液體代謝異常。 2、AQP1主要表達(dá)在肺微血管內(nèi)皮,且不同部位肺微血管內(nèi)皮AQP1表達(dá)密度有所不同。 3、在α-Toxin作用6-24小時(shí),不同部位肺微血管內(nèi)皮AQP1表達(dá)明顯下調(diào)以10小時(shí)為高峰,24小時(shí)AQP1表達(dá)有所恢復(fù)(P＜0.05)。 討論 1、AQP1是最早被鑒定出的水通道蛋白,主要存在于肺微血管內(nèi)皮。在正常肺組織中細(xì)支氣管旁毛細(xì)血管內(nèi)皮、小血管內(nèi)皮及肺泡周圍毛細(xì)血管內(nèi)皮均有AQP1表達(dá),且前兩者較后者AQP1表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.05),提示AQP1在肺組織不同部位分布密度不同。 2、金黃色葡萄球菌α-Toxin在細(xì)胞膜上能夠形成孔道,故又稱為孔道形成毒素。低劑量α-Toxin可導(dǎo)致肺水腫。 3、從病理角度觀察,α-Toxin引起肺泡結(jié)構(gòu)的破壞包括肺泡腔的擴(kuò)大和血管內(nèi)皮的損傷,提示肺微血管內(nèi)皮可能存在α-Toxin的敏感靶位。 4、應(yīng)用α-Toxin腹腔注射大鼠,成功制造肺損傷模型,我們推測(cè)α-Toxin影響了肺部AQP1表達(dá)。 5、在α-Toxin作用6-24小時(shí)AQP1表達(dá)明顯下調(diào)以10小時(shí)為高峰,24小時(shí)AQP1表達(dá)有所恢復(fù)(P＜0.05),提示AQP1可能參與了肺內(nèi)異常液體轉(zhuǎn)運(yùn)。 結(jié)論 金黃色葡萄球菌α-Toxin誘導(dǎo)大鼠肺AQP1表達(dá)的明顯下調(diào)可以推測(cè)AQP1在調(diào)節(jié)肺內(nèi)異常液體轉(zhuǎn)運(yùn)中可能起到重要作用。
【圖文】：

6小時(shí)組主要表現(xiàn)為肺泡間質(zhì)增寬，輕度水腫。10小時(shí)則出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞侵潤(rùn)伴有點(diǎn)狀出血。24小時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)部分肺泡擴(kuò)張，肺泡壁斷裂融合。(見(jiàn)圖1一4)三、AQPI的定位及在a一Toxin作用下的表達(dá)變化1、在正常肺組織中細(xì)支氣管旁毛細(xì)血管內(nèi)皮、小血管內(nèi)皮及肺泡周圍毛細(xì)血管內(nèi)皮均有AQPI表達(dá)，且前兩者較后者AQPI表達(dá)明顯增強(qiáng) (P<0.05)，提示AQPI在肺組織不同部位分布密度不同。2、a一Toxin誘導(dǎo)下，實(shí)驗(yàn)組與鹽水對(duì)照組比較，，各部位AQPI表達(dá)均有顯著下降，以10小時(shí)組為高峰，24小時(shí)組AQPI表達(dá)有所上調(diào)，但AQPI在肺組織各部位免疫定位未發(fā)生改變。除6小時(shí)和24小時(shí)外，各組間均有顯著差異伊 <0.05)。(見(jiàn)表2、線形圖以及圖5一1

正常對(duì)照組，肺泡周圍毛細(xì)血管AQPI表達(dá)為深黃色，染色較深。 (SABC，x400)圖6，a一Toxin6小時(shí)組:肺泡毛細(xì)血管AQpl表達(dá)染色減弱。(S妞C，x400)圖7a一 Toxin10小時(shí)組:肺泡毛細(xì)血管AQPI染色明顯減弱。(SABC，x400)圖8，a一 Toxin24小時(shí)組:肺泡毛細(xì)血管AQPI表達(dá)染色略有恢復(fù)。 (SABC，x400)
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R563

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2667541