【摘要】：磷酸二酯酶(Phosphodiesterase,PDE)是一類催化水解cAMP和cGMP,使其轉(zhuǎn)變?yōu)槭セ钚缘膯魏塑账岬年P(guān)鍵酶,是cAMP和cGMP水解的唯一途徑。PDE的活性是調(diào)控細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間的重要因素。至今已鑒定出PDE有11個(gè)家族,共30余種。PDE4是cAMP代謝的主要調(diào)節(jié)者,是炎癥和免疫細(xì)胞的主要PDE同工酶,也是分布于肺部的主要PDE同工酶,是PDE家族中最大的一群,有四個(gè)亞型(PDE4A、B、C、D)。哮喘是一個(gè)常見的呼吸系統(tǒng)疾病,在世界上患病率約13%。然而,目前尚缺乏有效和特異性的藥物治療。已有大量證據(jù)的顯示PDE4抑制劑對(duì)哮喘炎癥能發(fā)揮強(qiáng)大的抗炎作用,包括在各種細(xì)胞模型及許多炎癥動(dòng)物模型。此外,PDE4抑制劑還有一定的支氣管平滑肌擴(kuò)張作用,可能為哮喘的治療提供全面的作用。已在臨床試用于治療哮喘和COPD,結(jié)果令人鼓舞,表明PDE4抑制劑可能是一類非常有前景的藥物。 但有關(guān)肺組織中PDE4的問題至今尚未研究清楚:(1)哮喘的發(fā)病過程中,肺組織中PDE4的活性是否變化?(2)如果肺組織中PDE4的活性有改變,那么其蛋白水平和mRNA水平是否變化?這種變化的上下游調(diào)節(jié)機(jī)制如何?我室已有的研究表明SD大鼠用卵白蛋白致敏2周后,重復(fù)抗原攻擊后大鼠肺組織勻漿cAMP-PDE和cGMP-PDE活性均較正常對(duì)照組明顯升高,且cAMP-PDE活性比致敏不攻擊組也明顯升高。說明在哮喘發(fā)病過程中肺組織中的PDE活性已經(jīng)受到某些因素的影響而升高。那么有關(guān)其蛋白水平和mRNA水平是否變化及其調(diào)節(jié)機(jī)制,國(guó)內(nèi)外尚無文獻(xiàn)報(bào)道。 本文采用卵白蛋白致敏雄性SD大鼠,經(jīng)抗原反復(fù)攻擊制備大鼠的哮喘模型,確證致敏后反復(fù)抗原攻擊是否引起cAMP-PDE活性的升高,從細(xì)胞和分子水平分析其活性 浙江大學(xué)博士學(xué)位論文 匆 升高的機(jī)理。同時(shí)比較了選擇性PDE4抑制劑Piclalnilast和其“me一too’’的新藥cidamilast 的治療作用。主要內(nèi)容如下: 1、致敏大鼠抗原攻擊引起肺泡灌洗液(BALF)中炎癥細(xì)胞聚集及抗炎藥物的影響 對(duì)哮喘模型大鼠(。valb切min sensitizatinn and chailengedrats,oVA.s/c)進(jìn)行支氣 管肺泡灌洗,BALF進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù),離心后的細(xì)胞沉淀涂片,進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。結(jié)果 發(fā)現(xiàn)BALF中白細(xì)胞計(jì)數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目與對(duì)照組比較,差異均極顯著 少0 .001)。PDE4抑制劑Pidamilast、ciclalnilast、rohpn址n均能明顯抑制OvA誘導(dǎo) 的BALF中的總細(xì)胞數(shù)與嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目的增加,但piclamilast與cid剮爪ilast組間 無顯著性差異。 2、致敏大鼠抗原攻擊引起肺組織勻漿PDE活性變化及抗炎藥物的影響 用Hl,LC測(cè)定肺組織勻漿PDE活性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)哮喘模型大鼠【ovalb切min~itized 助d eh習(xí)lenged rats edded/or not atlded heat kined bordetenape血55155 adjuvant,OVA S/c(+/.)B]哮喘模型大鼠肺組織勻漿中cAMp一PDE活性是明顯升高,與正常組比較差 異顯著,而cG側(cè)[P一PDE活性變化不明顯。各用藥組均不同程度地影響cAN田一PDE和 cG側(cè)田一pDE活性。以Rolipn址n、pielamilast和eiclaJ叭ilast lmg/kg對(duì)cAMp一DE活性 的抑制作用最明顯,對(duì)cGNIP一DE活性也有明顯抑制作用。 3、致敏大鼠抗原攻擊引起肺功能的變化及抗炎藥物的影響 OVA一S/c忍大鼠的肺順應(yīng)性下降而肺阻力增加,與正常對(duì)照組相比均有顯著性 差異。Rohpn雙n能明顯改善肺功能,對(duì)肺順應(yīng)性及肺阻力的影響呈現(xiàn)出明顯的劑量依 賴性。 4、致敏大鼠抗原攻擊引起肺組織IL-4含量的變化及抗炎藥的影響 用ELISA法測(cè)定肺組織勻漿IL一4含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)致敏后重復(fù)抗原攻擊大鼠肺組織 IL一4含量明顯增高。Rohpr印m均能使致敏后重復(fù)抗原攻擊大鼠肺組織IL一4含量顯著 降低。 5、致敏大鼠抗原攻擊引起肺組織病理學(xué)改變的關(guān)系及抗炎藥物的影響 OVA一SIC大鼠肺組織有明顯的嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、明顯組織水腫和上皮脫落損傷 表現(xiàn)及大氣道杯狀細(xì)胞明顯增多。piclamilast和ciclamilast劑量依賴性抑制肺部的炎 癥表現(xiàn),以pielamilast 3mg瓜g,eielamilastlomg/kg作用最明顯。 6、致敏大鼠抗原攻擊引起肺組織勻漿cAMP一PDE活性與有關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性分析 本課題受國(guó)家自然基金(No.39970857)和浙江省自然基金重點(diǎn)項(xiàng)目(No.2204198)資助 浙江大學(xué)博士學(xué)位論文 匆 肺組織勻漿cAMp一PDE活性與BALF中的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目、病理切片中的炎癥 細(xì)胞總評(píng)分及肺組織勻漿IL一含量存在明顯的相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)分別為0.3 14、0.407 和0.563(P0 .01),而與cGMP一PDE活性之間無相關(guān)性。 6、致敏大鼠抗原攻擊引起肺組織勻漿PDE活性升高的組成分析 致敏大鼠抗原攻擊引起cAMP一PDE活性是明顯升高的,其中以PDE4活性增高為主。 PDE4的活性約是正常大鼠的1 .7倍,而正常大鼠的肺組織的PDE3的活性約是哮喘大鼠 的1.6倍。致敏大鼠抗原攻擊大鼠的肺組織勻漿中PDE3的活性有升高,可能是哮喘大 鼠肺組織cGMP,PDE活性升高的原因。 7、致敏大鼠抗原攻擊引起肺組織中PDE4亞型免疫組化的分布、PDE4亞型蛋白表達(dá) 及抗炎藥物的影響 在卵白蛋白致敏并攻擊的大鼠肺組織中,PDE4的表達(dá)明顯增強(qiáng),以支氣管上皮細(xì) 胞和炎癥細(xì)胞表達(dá)增強(qiáng)較明顯。在亞型表達(dá)上,PDE4A、4D分布較廣泛,在氣道平 滑肌、血管平滑肌、氣道上皮細(xì)胞及炎癥細(xì)胞均有表達(dá),‘PDE4B主要分布于炎
【圖文】：

抗原致敏攻擊大鼠肺組織形態(tài)旦改變及抗炎藥的影響(fIE染色200xA:模型組;B:對(duì)照組;C:piclamila3mg/kg;D:cilcimilast3mg/kg:E:roilirpam:F:dexamethasone;G:indomethacin.

抗原致敏攻擊大鼠肺組織氣道杯狀細(xì)胞高分泌的情況及抗炎藥的影響
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 宋燕華,陳季強(qiáng),周漢良;致敏后重復(fù)抗原攻擊的大鼠肺組織環(huán)核苷酸磷酸二酯酶活性的變化[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2002年02期

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本文編號(hào)：2667175