【摘要】： 第一部分香煙提取物對(duì)小鼠肺上皮細(xì)胞intelectin及白介素6、單核細(xì)胞趨化因子1表達(dá)的影響 目的：檢測(cè)香煙提取物刺激小鼠肺上皮細(xì)胞后,intelectin、IL-6和MCP-1的表達(dá),為下一步的研究提供方向。 方法：我們選擇小鼠肺上皮細(xì)胞MLE-12作為研究細(xì)胞,首先檢測(cè)香煙提取物(CSE)對(duì)該細(xì)胞的毒性以選擇合適的刺激濃度和刺激持續(xù)時(shí)間,隨后用定量PCR方法檢測(cè)不同濃度CSE以及同一濃度不同時(shí)間點(diǎn)刺激小鼠肺上皮細(xì)胞后,intelectin、IL-6和MCP-1的表達(dá)。 結(jié)果：用濃度10%的CSE刺激細(xì)胞24h后,細(xì)胞活性顯著降低,而延長(zhǎng)刺激時(shí)間至72h時(shí),CSE濃度大于2.5%后其活性就有較明顯的下降。因此,我們選用5%CSE、10%CSE刺激小鼠肺上皮細(xì)胞24h,結(jié)果與預(yù)期的恰恰相反,定量PCR示Intelectin1 mRNA的含量隨著CSE濃度的增加逐漸增加,10%CSE組Intelectin1 mRNA的含量高于正常組,同時(shí),IL-6 mRNA的含量在10%CSE組下降,而Intelectin2和MCP-1 mRNA的含量在三組間差異無(wú)顯著性。選用2.5%CSE分別刺激細(xì)胞8h、24h、72h后發(fā)現(xiàn),2.5%CSE刺激小鼠肺上皮細(xì)胞72h后Intelectin2 mRNA含量增加,2.5%CSE刺激24h后MCP-1 mRNA含量下降,而Intelectin1和IL-6 mRNA的表達(dá)無(wú)改變。 結(jié)論：Intelectin細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,CSE刺激小鼠肺上皮細(xì)胞后,Intelectin-1和-2表達(dá)增加,IL-6和MCP-1的表達(dá)下降,CSE對(duì)這些因子表達(dá)的不同影響可能和香煙煙霧刺激的濃度和時(shí)間的不同有關(guān),需要進(jìn)一步在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以證明其在香煙致肺部炎癥中的作用。香煙煙霧刺激后,MLE-12細(xì)胞Intelectin的升高和IL-6、MCP-1的下降存在何種關(guān)系,也需要更進(jìn)一步的研究。 第二部分Intelectin在小鼠肺上皮細(xì)胞白介素6、單核細(xì)胞趨化因子1表達(dá)中的作用 目的：利用RNA干擾和基因過(guò)表達(dá)技術(shù),探討intelectin是否參與了CSE下調(diào)肺上皮細(xì)胞MLE-12中IL-6、MCP-1的表達(dá)。 方法：構(gòu)建intelectin1/2干擾質(zhì)粒PGCsi3.0-shRNA,其瞬時(shí)轉(zhuǎn)染小鼠肺上皮細(xì)胞MLE-12并用CSE刺激24h后,定量PCR檢測(cè)intelectin1、intelectin2、IL-6和MCP-1 mRNA的表達(dá)；另外采用高表達(dá)intelectin1 cDNA的質(zhì)粒pEF-BOS-ITLN1-cDNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染小鼠肺上皮細(xì)胞MLE-12后,48h后檢測(cè)上述基因的表達(dá)。 結(jié)果：成功構(gòu)建了intelectin1/2干擾質(zhì)粒,其能夠下調(diào)CSE刺激MLE-12細(xì)胞后的intelectin1的升高,而且,intelectin1/2干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后能夠逆轉(zhuǎn)CSE引起的IL-6下降。高表達(dá)intelectin1 cDNA的質(zhì)粒pEF-BOS-ITLN1-cDNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染小鼠肺上皮細(xì)胞MLE-12后,48h后檢測(cè)上述基因的表達(dá)發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染該質(zhì)�？梢悦黠@升高intelectin1的表達(dá),而IL-6 mRNA卻明顯下降。 結(jié)論：綜合RNA干擾和intelectin1 cDNA高表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染小鼠肺上皮細(xì)胞MLE-12的結(jié)果,intelectin1參與了CSE下調(diào)小鼠肺上皮細(xì)胞MLE-12上IL-6 mRNA的表達(dá)。我們推論,CSE可以上調(diào)肺上皮細(xì)胞intelectin1的表達(dá),增加的intelectin1可以降低其IL-6的表達(dá),下降的IL-6使肺泡上皮細(xì)胞的抗感染能力下降,IL-6引起的抗感染能力下降抵消甚至超過(guò)了intelectin1本身引起的抗感染能力的增加,這可能是CSE增加肺部感染的風(fēng)險(xiǎn)的一個(gè)原因。這些推論僅僅基于體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果,intelectin到底在香煙煙霧致肺部炎癥中發(fā)揮著怎樣的作用,需要我們進(jìn)一步在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行研究。 第三部分慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)抑制煙熏小鼠肺組織Intelectin表達(dá)的研究 目的：探討intelectin在香煙煙霧致小鼠肺部炎癥中的作用。 方法：構(gòu)建小鼠intelectin1/2 RNA干擾慢病毒載體,進(jìn)行病毒包裝,經(jīng)鼻滴入小鼠氣道以抑制煙熏小鼠肺組織intelectin的表達(dá),隨后小鼠暴露于香煙煙霧4周,檢測(cè)肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)和分類(lèi)細(xì)胞計(jì)數(shù)、觀察肺組織形態(tài)學(xué)改變、氣道周?chē)装Y改變,以及檢測(cè)肺組織中intelectin和白介素6的表達(dá)。 結(jié)果：小鼠全身暴露于香煙煙霧4周后,其肺部產(chǎn)生了亞急性炎癥,氣道周?chē)�、肺泡炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)增加,肺組織Intelectin mRNA和蛋白水平增加,mRNA水平的增加主要體現(xiàn)在Intelectin2;肺臟的IL-6mRNA表達(dá)增加。此外,成功構(gòu)建了小鼠Intelectin1/2RNA干擾慢病毒載體并包裝成功,在氣道上皮細(xì)胞用溶血磷脂膽堿(LPC)預(yù)處理后,慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾降低了肺臟Intelectin的水平,intelectin的降低并未引起白介素6的表達(dá)改變,也并未引起明顯的肺泡灌洗液中細(xì)胞數(shù)目和種類(lèi)的改變,以及氣道周?chē)装Y的改變。 結(jié)論：香煙煙霧的濃度和刺激持續(xù)時(shí)間的長(zhǎng)短將影響肺臟intelectin和白介素6的表達(dá)；用LPC預(yù)處理小鼠氣道上皮后,慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾降低了肺臟intelectin的水平,但是并未引起明顯的肺泡灌洗液中細(xì)胞數(shù)目和種類(lèi)的改變,以及氣道周?chē)装Y的改變, IL-6的含量也沒(méi)有受到影響,這可能是因?yàn)镮L-6可以由多種細(xì)胞產(chǎn)生的結(jié)果。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R563.1

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 白元松;孫延霞;刁建東;盧振霞;;綠色熒光蛋白基因在白血病細(xì)胞K562中的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年01期

2 郭偉;李文媛;;慢病毒載體介導(dǎo)hTERT對(duì)肝細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J];長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年04期

3 周菁;徐瑜;張明慧;胡義德;;瘤內(nèi)注射慢病毒載體介導(dǎo)的Bmi1-shRNA對(duì)A549皮下移植瘤的抑制作用[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年20期

4 袁月;康秀峰;牟東;薛世祥;代劍華;彭貴勇;;TRADD慢病毒載體構(gòu)建及其對(duì)增生性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年09期

5 張陽(yáng);張志堅(jiān);陳柏齡;陳東平;吳秀麗;;增強(qiáng)型綠色熒光蛋白和大鼠血管生長(zhǎng)素-1基因共表達(dá)的重組慢病毒體外轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年18期

6 黎成金;王羊;王烈;;組織特異性CD/5-FC熱化療對(duì)裸鼠肝外組織的損傷作用[J];福州總醫(yī)院學(xué)報(bào);2010年01期

7 畢健琨;任偉;鄭曉雅;許丹;;慢病毒介導(dǎo)TCF7L2基因RNAi對(duì)胰島βTC6細(xì)胞GPR40表達(dá)的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2012年04期

8 王傳偉;劉玉光;;中樞神經(jīng)系統(tǒng)基因治療中病毒載體的研究進(jìn)展[J];國(guó)際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2009年01期

9 吳文湘;劉朝暉;;外陰陰道假絲酵母菌病的診治進(jìn)展[J];國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志;2011年06期

10 謝杏;柯躍斌;劉慶成;劉建軍;毛侃瑯;徐新云;夏菠;楊淋清;;人支氣管上皮hsa-miR-148a-3p低表達(dá)細(xì)胞株的建立[J];癌變.畸變.突變;2014年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前2條

1 呂慧能;;基因和基因組操作技術(shù):現(xiàn)狀和未來(lái)發(fā)展的思考[A];高等院校遺傳學(xué)教學(xué)改革探索[C];2010年

2 駱鵬;張庶民;劉維;賈天軍;;廣西地區(qū)侗、壯兩民族MBL血清含量與ExonⅠ基因突變的調(diào)查[A];2012年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十二屆中國(guó)藥師周論文集[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 黃建峰;慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾對(duì)人非小細(xì)胞肺癌化療多藥耐藥性的研究[D];蘇州大學(xué);2010年

2 馬雷;bFGF基因修飾的MSCs細(xì)胞復(fù)合β-磷酸三鈣修復(fù)骨缺損實(shí)驗(yàn)研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2010年

3 吳蔚;MBL阻遏HCMV感染人胚肺成纖維細(xì)胞的研究[D];浙江大學(xué);2011年

4 陳美玲;Sonic hedgehog基因?qū)ΨN植體周?chē)侨睋p修復(fù)的影響[D];華中科技大學(xué);2011年

5 張陽(yáng);新型Tet-On系統(tǒng)調(diào)控慢病毒載體介導(dǎo)大鼠TH與GDNF基因腦內(nèi)移植治療大鼠帕金森病[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

6 徐寧;PTEN/Akt在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞異常增殖中的作用機(jī)制[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

7 郭永;利用人子宮內(nèi)膜異體移植模型對(duì)月經(jīng)出血和蛻膜化發(fā)生的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

8 宋愛(ài)琴;siRNA靶向干擾c-myc基因表達(dá)對(duì)Jiyoye細(xì)胞增殖及凋亡作用的研究[D];山東大學(xué);2011年

9 艾亮;RNA干擾CD133基因?qū)θ私Y(jié)腸癌干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

10 彭雍;RIP3對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖、死亡和化療敏感性的作用及其作用機(jī)制的研究[D];中南大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李文媛;慢病毒載體介導(dǎo)hTERT對(duì)肝細(xì)胞生物學(xué)的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

2 石云;TGF-β1表達(dá)載體的構(gòu)建及其在小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的表達(dá)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

3 王婧;抗口蹄疫轉(zhuǎn)基因豬成纖維細(xì)胞系的建立與鑒定[D];吉林大學(xué);2011年

4 房麗君;狂犬病病毒糖蛋白基因重組慢病毒載體的構(gòu)建及免疫試驗(yàn)[D];吉林大學(xué);2011年

5 崔勇;shRNA沉默AKT2表達(dá)對(duì)腦膠質(zhì)瘤化療藥物敏感性的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

6 蔣錦杏;可逆性永生化鼠源胰島β細(xì)胞系的建立及生物學(xué)特性的研究[D];暨南大學(xué);2011年

7 賴(lài)建明;膠原—?dú)ぞ厶?膠原—納米羥基磷灰石仿生支架復(fù)合BMSCs體外構(gòu)建組織工程骨軟骨的前期實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

8 連淵娥;微粒體前列腺素E合酶1對(duì)肝細(xì)胞癌生物學(xué)行為的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

9 吳志賢;慢病毒載體介導(dǎo)siRNA沉默Id-1抑制裸鼠人肝癌移植瘤生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

10 崔凱;慢病毒介導(dǎo)人CCL21基因轉(zhuǎn)染對(duì)胰腺癌細(xì)胞（PANC-1）作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];濟(jì)南大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：2663483