【摘要】： 進(jìn)入21世紀(jì)以來(lái),伴隨著我國(guó)塑料工業(yè)的高速發(fā)展,增塑劑鄰苯二甲酸酯工業(yè)也在快速發(fā)展著,目前中國(guó)的年產(chǎn)量已經(jīng)超過(guò)日本,僅次于美國(guó),名列世界第二位。更為重要的是我國(guó)鄰苯二甲酸酯消費(fèi)量已經(jīng)超過(guò)美國(guó),成為全球第一消費(fèi)大國(guó),我國(guó)居民體內(nèi)鄰苯二甲酸酯類(lèi)化合物的負(fù)荷量正在快速增長(zhǎng)。大量研究結(jié)果表明,鄰苯二甲酸酯類(lèi)化合物可通過(guò)多種途徑進(jìn)入生物體內(nèi)產(chǎn)生毒性作用。鄰苯二甲酸二乙基已酯(di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP),是目前使用最為廣泛的一種鄰苯二甲酸酯類(lèi),在塑料工業(yè)中是最主要的增塑劑。關(guān)于DEHP毒性的研究是目前國(guó)際上環(huán)境醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難題。本課題主要探討DEHP在誘發(fā)哮喘和哮喘發(fā)病機(jī)理方面的作用及遺傳毒性,這對(duì)全面和系統(tǒng)的了解DEHP毒性具有十分重要的意義。本研究以Wistar大鼠為研究對(duì)象,通過(guò)DEHP灌胃染毒建立DEHP誘導(dǎo)型大鼠哮喘模型檢測(cè)大鼠肺功能、嗜酸粒細(xì)胞數(shù)目和肺組織切片來(lái)探討DEHP誘發(fā)哮喘的發(fā)病機(jī)理同時(shí)用SDS-KCI實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DEHP對(duì)大鼠肝細(xì)胞的遺傳毒性。研究結(jié)果如下: 1.DEHP致DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)效應(yīng) 在正常細(xì)胞中存在著一定量的DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)(DNA-protein crosslinks,DPC)。這是DNA與核蛋白的正常聯(lián)系或其代謝的結(jié)果,對(duì)維持細(xì)胞的正�；顒�(dòng)具有重要作用,當(dāng)有外來(lái)物理、化學(xué)因素作用時(shí),則可誘導(dǎo)出過(guò)量的DPC。DPC與其他DNA損傷相比,較難修復(fù),且DPC僅可發(fā)生在單鏈DNA上,這表明這種交聯(lián)只能發(fā)生在DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄期間,因此DPC的形成,必將對(duì)DNA的構(gòu)象和功能(復(fù)制與轉(zhuǎn)錄)產(chǎn)生嚴(yán)重的影響,并在其復(fù)制過(guò)程中容易造成某些重要基因(如抑癌基因)的丟失,導(dǎo)致腫瘤或某些嚴(yán)重疾病的發(fā)生�？梢�(jiàn)DPC過(guò)度增加是一種病理現(xiàn)象,是DNA分子的一種嚴(yán)重的遺傳損傷。 本研究以大鼠肝細(xì)胞為材料,采用SDS-KCI沉淀法對(duì)DEHP致DPC效應(yīng)進(jìn)行了研究。本研究證實(shí)了較高濃度的DEHP(70 mg·kg~(-1)·d~(-1))可誘導(dǎo)大鼠肝細(xì)胞產(chǎn)生DPC。 2.DEHP誘導(dǎo)大鼠哮喘的可能機(jī)理 哮喘是一種常見(jiàn)的慢性呼吸道疾病。WHO把哮喘定為終身性疾病,哮喘給世界各國(guó)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。近40年來(lái),哮喘的發(fā)病率和死亡率在世界各地持續(xù)增長(zhǎng),而空氣污染物被懷疑是主要原因,但其誘發(fā)過(guò)敏性哮喘的分子機(jī)理不清楚,揭示哮喘的分子機(jī)理不但有重要理論意義,也有重要的社會(huì)意義。 流行病學(xué)研究表明DEHP可誘發(fā)人類(lèi)的過(guò)敏癥狀甚而哮喘,然而B(niǎo)utala等的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明DEHP本身并不是過(guò)敏原,經(jīng)DEHP暴露的小鼠體內(nèi)并沒(méi)有檢測(cè)到DEHP特異性IgE。這提示我們DEHP可能通過(guò)其他的途徑誘導(dǎo)哮喘的發(fā)生,根據(jù)本課題組的理論研究和實(shí)驗(yàn)研究,我們提出了“過(guò)敏體質(zhì)激發(fā)原”和“獲得性過(guò)敏體質(zhì)”假說(shuō),我們假設(shè)以DEHP為代表的鄰苯二甲酸酯在哮喘發(fā)生的過(guò)程中發(fā)揮的是“過(guò)敏體質(zhì)激發(fā)原”作用,其可能使機(jī)體總IgE升高,即形成“獲得性過(guò)敏體質(zhì)”,在遇到較低水平的過(guò)敏原時(shí)即能誘發(fā)哮喘。 本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示經(jīng)DEHP灌胃染毒的大鼠本身并不能引發(fā)哮喘,只有在灌胃染毒的同時(shí)接觸過(guò)敏原刺激(OVA致敏激發(fā))才能誘發(fā)哮喘的發(fā)生。
【圖文】：

sZOOS動(dòng)物肺功能分析系統(tǒng)可用于測(cè)量動(dòng)物肺功能的相關(guān)參數(shù)，容積件)、流速任)、氣道阻力兩、Re)、肺順應(yīng)性(Crs)、用力靜呼氣末功能殘氣量(FRC)等，，可為呼吸生理及藥理研究提供。實(shí)驗(yàn)裝置由動(dòng)物呼吸機(jī)，信號(hào)調(diào)理器，體描箱和負(fù)壓器組成，件，可對(duì)所檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，并進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。它儀器冷凍離心機(jī)(Eppendorf-5415R);旋渦振蕩儀;醫(yī)用霧化器(魚(yú)躍4針;各種型號(hào)注射器;吊針針頭(內(nèi)徑=0.45~);三用電熱恒實(shí)驗(yàn)儀器廠)，渦旋器，，F(xiàn)一4500型熒光分光光度計(jì)(日本日立)數(shù)器;酶標(biāo)儀(Therm。公司產(chǎn)品);電子天平;)一80℃低溫冰;計(jì)時(shí)器;倒置顯微鏡(LeicaDM4000B，Germany);切片機(jī);方法HP誘導(dǎo)性哮喘大鼠模型的建立

醫(yī)用霧化器(超聲波霧化器)內(nèi)進(jìn)行1%OVA溶液霧化吸入(如圖4)，時(shí)間為 30min，霧化OVA氣體溫度控制在20一23℃。流量設(shè)置在中檔，以使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物能有效吸入霧化氣體，煙霧又不致影響體征觀測(cè)為準(zhǔn)。霧化時(shí)間選擇在上午大鼠活躍期間。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)在清潔、安靜、溫濕度穩(wěn)定的環(huán)境中，每天喂食一次，給予充足飲水，并避免其接觸其他有害致敏源，此為試驗(yàn)成功關(guān)鍵。圖4采用醫(yī)用霧化器進(jìn)行1%OVA霧化激發(fā)示意圖 2.1.2nEHP誘導(dǎo)性哮喘動(dòng)物模型的制備 (0.7mg·kg一’·d一’oEHP+o認(rèn)group和70mg·kg一，·d‘，nEHP+o認(rèn)group)。本試驗(yàn)采用DEHp灌胃染毒(如圖5所示)，即每天稱取大鼠體重，再按其體重比例灌入相應(yīng)劑量DEHP。DEHP與吐溫一80按體積比1:1混合后，用蒸餾水稀釋致所需濃度，染毒時(shí)間為3Od。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第19d和
【學(xué)位授予單位】：華中師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R562.25

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本文編號(hào)：2661559