【摘要】：目的： 觀察miR-146a和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)在脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的肺泡巨噬細(xì)胞中的動態(tài)表達(dá),分析兩者在時間上的變化關(guān)系,探討miR-146a對肺泡巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用及其機制。 方法： 將體外培養(yǎng)的NR8383肺泡巨噬細(xì)胞按1×106個/mL接種于六孔板,貼壁90min后加入1μg/mL的LPS,刺激0h、3h、6h、12h后離心收集培養(yǎng)上清液和細(xì)胞團塊。采用實時熒光定量PCR (RT-qPCR)檢測細(xì)胞中miR-146a和TNF-αmRNA的表達(dá)情況,酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測培養(yǎng)上清液中TNF-α蛋白水平的表達(dá)。miR-146a和TNF-αmRNA的相關(guān)性采用雙變量Pearson相關(guān)性分析。 結(jié)果： 1.LPS刺激6h后,細(xì)胞中的miR-146a表達(dá)水平開始增高(5.33±0.81倍,P0.01),并且持續(xù)增高(12h：8.21±1.19倍,P0.01)； 2.LPS刺激3h后,細(xì)胞中TNF-a mRNA的表達(dá)即達(dá)到頂峰(67.48±24.52倍,P0.01),6h后開始降低(29.53±4.26倍,P0.05)； 3.培養(yǎng)上清液中的TNF-α蛋白在LPS刺激3h后即升高(359.80±57.54pg/mL,P0.01),于12h達(dá)高峰(729.22±50.40pg/mL,P0.01)； 4.細(xì)胞中miR-146a的表達(dá)水平與TNF-αmRNA的含量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.895,P0.01)。 結(jié)論： LPS刺激0-12h后,miR-146a和TNF-α的表達(dá)呈現(xiàn)一定的動態(tài)變化,且細(xì)胞中miR-146a的表達(dá)水平與TNF-αmRNA的含量呈負(fù)相關(guān),推測miR-146a可能參與了肺泡巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)調(diào)控。
【圖文】：

被淬滅基團淬滅。在PCR擴增時，Taq酶的，3’外切酶活性將探針酶解，使熒光報告基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。具體見圖2.2.印繃S助dp附“。n而舟協(xié)向陽璽d。竺竺一一樸口一「，卜、、/3‘—阮m滋rd5瓢—一補一也~一~一5，衍l、rh書13)石鄺 1oDNA演獷搜岡:二二二二二二二~勻5·秒、，擠冬一八入圖 2.2基于莖環(huán)結(jié)構(gòu)反轉(zhuǎn)錄引物和 TaqManMGB探針法檢測miRNA ABITaqMan⑨ MieroRNAAssaysProtoeol本實驗采用ABI公司全套的TaqMan⑧ MicroRNAAssays，其含有特異miRNA逆轉(zhuǎn)錄莖環(huán)引物、MGB探針和PCR引物。選取 U6SnRNA作為內(nèi)參。

6組圖3.1LPS刺激0、3、12組6和12h的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變(倒置顯微鏡，IOOx)2總RNA瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳圖上可以觀察到二條條帶，從上到下分別為28SRNA、
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R563.8

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本文編號：2660344