【摘要】： 急性肺損傷(ALI)是指由心源性以外的各種肺內(nèi)外致病因素導致的急性進行性呼吸衰竭，其嚴重階段稱為急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，迄今尚無有效的治療措施，病死率高達50～70％。肺泡巨噬細胞(PAM)是肺泡腔內(nèi)的常駐細胞，廣泛分布于肺泡內(nèi)和氣道上皮表面，在支氣管肺泡局部免疫防御、免疫損害等方面起重要作用。在炎癥反應早期，創(chuàng)傷及革蘭氏陰性細菌內(nèi)毒素(LPS)能激活PAM釋放以腫瘤壞死因子—α(TNF-α)為主的大量前炎細胞因子，引發(fā)機體失控性炎癥反應，導致ALI/ARDS發(fā)生。核因子—κB(NF-κB)是一種具有多向性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用的蛋白質(zhì)因子，能與多種炎癥介質(zhì)(TNF、IL-1、IL-6、IL-8等)基因啟動子或增強子中存在的κB序列結(jié)合，啟動和調(diào)節(jié)其基因轉(zhuǎn)錄，與ALI關系密切。山莨菪堿是從唐古特山莨菪(Anisodus tonguticus)中提取出來的一種生物堿，具有多種生物學作用，臨床廣泛用于治療感染性休克、平滑肌痙攣、微循環(huán)障礙及各種神經(jīng)痛等疾病。80年代以來用于防治ALI，顯示出良好的保護作用。以往的研究顯示，山莨菪堿對ALI的保護作用可能與其解除肺血管平滑肌痙攣，降低肺動脈壓；抑制脂質(zhì)過氧化反應，保護中性粒細胞(PMN)的細胞膜結(jié)構(gòu)等有關。新近的研究發(fā)現(xiàn)，山莨菪堿還具有抗炎作用，可抑制ALI時TNF-α、IL-6、IL-8等細胞因子的釋放，但關于其抗炎作用機制的研究才剛剛起步，相關報 一 道甚為少見。本實驗采用分子生物學和免疫學方法，觀察山莫菩堿對創(chuàng) 傷性急性肺損傷家兔 PAM中 NF－。B活化和下游基因 TNF－a InRNA表 達及支氣管肺泡灌洗液舊）中TN－FJ、IL七釋放的影響，以探討 其治療創(chuàng)傷性ALI的作用機制，為AL的治療提供實驗依據(jù)。 實驗方法：健康成年家兔 72只，隨機分為三組：（）正常對照組【 組），p飽傷性急性肺損傷組門組），門）山莫穹堿治療組叮組人其 中互組、T組動物于撞擊臺上撞擊后，立即靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素 （0l；；：民）50vglkg，建立創(chuàng)傷性急性肺損傷模型，C組注射等量生理鹽 水。g組動物于模型建立后立即予以山x＃堿 zmwtg靜推，隨后以 Illlglkglh靜脈維持，C組、互組分別予以等量生理鹽水靜推。各組動物分 別于模型建立后lh、Zh、3h、4h放血處死6只，留取B皿，分離PAM， 分別用凝膠電泳遷移率改變分析法（EMSA）和半定量逆轉(zhuǎn)錄一 PCR法 （RTPCR）檢測 PAM中 NF八 B的活性變化及 IN’－－A rnRNA的表達水 平，并采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測 BALF上清中 TN’Fl、h＊ 的含量變化。 實驗結(jié)果：（H組 NF＊ B活性于模型建立后 l葉h內(nèi)均明顯高于 C 組（P＜0．of），在 Zh達到高峰，其相對密度值為 l．59士0．07，是同期 C 組的8倍；T組經(jīng)山直著堿治療后，，雖然NF－KB活性依然高于C組， 但與 1組相比均有所下降u＜0．of，P＜0．05），Zh時為 l．11士 0．10，較 1 組下降達30．19％，電泳滯后帶的深淺變化與之相一致。（2）TN’F－a InRNA 的表達從模型建立后lh即開始上升，3h達到高峰，滯后于NF－K B，其 相對密度值為1．29土0．09，是同期C組的5倍，4h表達較前有所下降， 但仍明顯高于C組（P＜0．of＼T組經(jīng)山直若堿治療后各時間點TNF刁 M的表達較 1組亦有明顯下降（P叨．of，P＜（．05），最大降幅出現(xiàn)在 Zh，達34．48％，TN－F－a cDNA擴增產(chǎn)物條帶的深淺變化與之相一致。（） 二 一 1組模型建立N后BALF中TN’F－a、h－8的含量即開始上升，并分別于 3h、4h達到高峰，其含量分別為0．101土0．008nglllil和】．055士0．132ng／Inl， 明顯高于C組（P＜0．of），與同期PAM中TN’F a InRNA表達水平的變 化相一致；經(jīng)山度若堿治療后，各時間點TN’F－a、ILS含量較豆組均有 明顯下降（P＜0．of，P＜0．05），最大降幅分別出現(xiàn)在3h、4h。 結(jié)論：（）機體遭受創(chuàng)傷及 LPS刺激后，PAM被激活導致 NF－K B 的活化是PAM大量釋放TN’F－Q、n－8等前炎細胞因子的關鍵環(huán)節(jié)。（2） 山莫若堿對AL的治療作用機理可能是通過對PAM核中NF－KB活性的 抑制，從而在基因轉(zhuǎn)錄水平抑制NF－KB介導的一系列細胞因子和炎癥 介質(zhì)的表達（TN’F－a、IL－8等），阻斷細胞因子和炎癥介質(zhì)的失控性釋放 來實現(xiàn)的。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2002
【分類號】：R563.8

【參考文獻】

相關期刊論文 前9條

1 郭振輝,洪新,毛寶齡,錢桂生,陳正堂;山莨菪堿對核因子-κB活化的抑制作用[J];第三軍醫(yī)大學學報;2000年06期

2 胡德輝,劉惠君,馬傳桃;低氧、山莨菪堿對肺內(nèi)小動脈平滑肌細胞產(chǎn)生血栓素A_2和前列環(huán)素的影響[J];生理學報;1997年06期

3 孫耕耘,肖貞良,方傳彪;山莨菪堿對內(nèi)毒素致肺微血管內(nèi)皮細胞骨架變化的影響[J];中國藥理學通報;2001年02期

4 梁繼河,朱云喜,李琦,羅新林;山莨菪堿對創(chuàng)傷性肺損傷防治作用的實驗研究[J];中華創(chuàng)傷雜志;1998年05期

5 徐興祥,孫耕耘,錢桂生,吳澤志,秦廷武;急性肺損傷大鼠白細胞變形性變化及山莨菪堿影響[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;1998年10期

6 尹文,梁繼河,虎曉岷,張松濤,蔡春,張金山;山莨菪堿對創(chuàng)傷性肺損傷細胞因子及其mRNA表達的影響[J];中華實驗外科雜志;2000年01期

7 馬立芝,程尉新;山莨菪堿治療感染性休克的作用及用法[J];中國危重病急救醫(yī)學;2001年09期

8 朱運奎，張世范，高偉，賈樹斌，劉庭忠;山莨菪堿對高原內(nèi)毒素致急性肺損傷的防治作用實驗研究[J];中國危重病急救醫(yī)學;1995年05期

9 景有伶,楊秋,鄭俊國,崔和勤,馬玉妹;山莨菪堿對油酸致兔急性肺損傷的防治作用[J];中國危重病急救醫(yī)學;1997年01期

本文編號：2655095