【摘要】：特發(fā)性肺纖維化(Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一種以進(jìn)行性呼吸困難、運(yùn)動(dòng)耐力下降、肺實(shí)質(zhì)的間質(zhì)性浸潤(rùn)及肺限制性肺通氣功能障礙為主要特征的慢性進(jìn)展性纖維化性間質(zhì)性肺炎,呼吸衰竭是IPF患者死亡的根本原因,確診后的平均中位生存期3-5年,目前除了肺移植以外尚無(wú)任何有效的治療方法。該病主要是老年人的疾病,好發(fā)于成年男性,確診時(shí)年齡多為65歲以上。目前已有證據(jù)表明,IPF和衰老之間存在相關(guān)性,是一種多種原因及途徑共同作用的衰老相關(guān)性疾病,端粒酶及DNA甲基化均作為細(xì)胞衰老相關(guān)因素,參與了IPF的發(fā)生發(fā)展。IPF病情的發(fā)生發(fā)展中,TGF-β可以導(dǎo)致端粒酶異常,而DNA甲基化可能參與其中。TGF-β和端粒酶作為重要的分子共同參與了IPF的進(jìn)程,可能使細(xì)胞不斷發(fā)生細(xì)胞復(fù)制性衰老的惡性循環(huán)。研究表明TERT和DNMT3a、DNMT3b分別被認(rèn)為是端粒酶活性及DNA甲基化的關(guān)鍵限速因子,可以分別作為反映端粒酶活性及DNA甲基化水平的指標(biāo)對(duì)端粒酶和DNA甲基化進(jìn)行研究。那么在IPF中TGF-β1是否可以導(dǎo)致端粒酶活性及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶發(fā)生改變?如何發(fā)生變化?有無(wú)相關(guān)干預(yù)措施?本課題以IPF中TGF-β1引起端粒酶活性與DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的變化及兩者的相互關(guān)系為研究切入點(diǎn),探討其在IPF發(fā)病中的作用及干預(yù)措施。首先研究IPF患者和正常人群外周血中TERT、DNMT3a、DNMT3b及TGF-β1的表達(dá)情況,證實(shí)IPF患者和正常人群中TERT、DNMT3a、DNMT3b及TGF-β1的表達(dá)存在差異;之后在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步研究年齡因素對(duì)肺纖維化小鼠TERT、DNMT3a、DNMT3b及TGF-β1表達(dá)的影響,證實(shí)上述指標(biāo)的變化及動(dòng)物模型病變程度與年齡因素相關(guān);最后進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,研究TGF-β1誘導(dǎo)的A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞TERT及DNMT3a、DNMT3b的表達(dá)異常、相互作用及干預(yù)措施。證實(shí)TGF-β1通過(guò)DNA甲基化調(diào)控TERT表達(dá)并提出相關(guān)干預(yù)措施。共分為三個(gè)部分,六個(gè)實(shí)驗(yàn)。第一部分IPF患者外周血TERT、DNMT3a、DNMT3b及TGF-β1表達(dá)研究實(shí)驗(yàn)一IPF患者外周血TERT、DNMT3a、DNMT3b及TGF-β1表達(dá)研究目的:研究IPF患者中外周血白細(xì)胞TERT及外周血血清中DNMT3a、DNMT3b及TGF-β1的表達(dá)情況。方法:選擇不合并有其他疾病的年齡"g60歲男性IPF患者10名為IPF組,選擇沒(méi)有基礎(chǔ)疾病的年齡"g60歲男性10名為對(duì)照組,收集臨床基本數(shù)據(jù),ELISA檢測(cè)對(duì)照組及IPF組血清TGF-β1、IL-1β、IL-6及DNMT3a、DNMT3b蛋白表達(dá)的影響;Western Blot法檢測(cè)對(duì)照組及IPF組外周血白細(xì)胞TERT蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:1.IPF組血清TGF-β1、IL-1β、IL-6及DNMT3a、DNMT3b蛋白的表達(dá)與對(duì)照組相應(yīng)指標(biāo)比較均表達(dá)升高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IPF組血清IL-1β、IL-6及DNMT3a、DNMT3b的表達(dá)與TGF-β1的表達(dá)均呈正相關(guān)。2.實(shí)驗(yàn)組外周血白細(xì)胞TERT蛋白相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組相比表達(dá)升高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:IPF患者外周血血清中TGF-β1、IL-1β、IL-6及DNMT3a、DNMT3b的含量及外周血白細(xì)胞TERT的含量均高于正常對(duì)照組健康人群。第二部分年齡因素對(duì)小鼠肺纖維化模型TERT、DNMT3a、DNMT3b及TGF-β1表達(dá)影響的研究實(shí)驗(yàn)二年齡因素對(duì)小鼠肺纖維化模型中TERT及TGF-β1表達(dá)影響的研究目的:研究小鼠肺纖維化過(guò)程中年齡因素對(duì)TERT活性變化的影響,探討TGF-β1、IL-1β及IL-6在IPF過(guò)程中的變化規(guī)律及意義。方法:128只10-12周齡雄性C57BL/6小鼠,無(wú)特殊病原體SPF級(jí),飼養(yǎng)至20周齡時(shí),隨機(jī)分為青年肺纖維化模型組(A組),青年正常對(duì)照組(B組),老年肺纖維化模型組(C組),老年正常對(duì)照組(D組),每組32只。A組小鼠氣管內(nèi)注入博萊霉素(5mg/kg)制造肺纖維化模型;B組氣管內(nèi)注入同等劑量生理鹽水進(jìn)行對(duì)照,C組和D組飼養(yǎng)至26周齡后分別對(duì)應(yīng)使用A組和B組的造模方法制造老年肺纖維化組模型和老年正常對(duì)照組模型。造模后的第7、14、21、28天分別在A組、B組、C組和D組中每組隨機(jī)抽取8只小鼠,用腹主動(dòng)脈采血法處死后,留取肺組織標(biāo)本及血液標(biāo)本待測(cè)。小鼠肺組織HE染色及Ashcroft評(píng)分評(píng)定肺纖維化程度;Masson染色觀察小鼠肺組織膠原分布;小鼠肺組織E-Cad、Vimentin、α-SMA免疫組化及灰度值檢測(cè);ELISA法檢測(cè)小鼠血漿中TGF-β1、IL-1β、IL-6蛋白的含量;Western Blot法檢測(cè)小鼠肺組織TERT蛋白含量。結(jié)果:1.向小鼠氣管注入BLM(5mg/kg)制造小鼠肺纖維化模型造模成功。與青年肺纖維化小鼠相比,老年肺纖維化模型組小鼠纖維化程度更加嚴(yán)重,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.與對(duì)照組小鼠相比,模型組小鼠E-Cad表達(dá)降低,α-SMA及Vimentin表達(dá)增高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,三者隨病程進(jìn)展而變化明顯,三者各自差異在對(duì)照組28天、模型組14天、模型組28天較為顯著;與青年模型組小鼠相比,老年模型組小鼠各相同造模時(shí)間點(diǎn)E-Cad陽(yáng)性率低,α-SMA及Vimentin陽(yáng)性率高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.A組與C組血清中TGF-β1、IL-1β及IL-6含量高于B組和D組,三者在A組與B組、C組與D組同一時(shí)間點(diǎn)兩兩比較P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;但在A組與C組、B組與D組同一時(shí)間點(diǎn)兩兩比較P0.05,差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.與對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)B組與D組相比,A組與C組第7天、第14天、第21天和第28天肺組織TERT蛋白相對(duì)表達(dá)量升高,P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與各自第7天、第21天和第28天表達(dá)量相比,A組與C組第14天肺組織TERT蛋白相對(duì)表達(dá)量升高,P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.與對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)B組和A組相比,D組和C組第14天和第28天肺組織TERT蛋白相對(duì)表達(dá)量升高,P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B組第14天肺組織TERT蛋白相對(duì)表達(dá)量與其第28天相比表達(dá)升高,D組第14天肺組織TERT蛋白相對(duì)表達(dá)量與其第28天相比表達(dá)升高,P0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6.A組第14天肺組織TERT蛋白相對(duì)表達(dá)量、A組第28天肺組織TERT蛋白相對(duì)表達(dá)量、B組第14天或28天肺組織TERT蛋白相對(duì)表達(dá)量之間三者兩兩比較,P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;C組第14天肺組織TERT蛋白相對(duì)表達(dá)量、C組第28天肺組織TERT蛋白相對(duì)表達(dá)量、D組第14天或28天肺組織TERT蛋白相對(duì)表達(dá)量之間三者兩兩比較,P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。7.C組和A組肺組織TERT蛋白相對(duì)表達(dá)量均在第14天達(dá)到高峰,第28天明顯下降。但與A組相比,C組TERT蛋白相對(duì)表達(dá)量變化波動(dòng)大。結(jié)論:1.小鼠肺纖維化過(guò)程中,肺組織E-Cad含量減少,α-SMA及Vimentin含量升高;老年小鼠肺纖維化程度更嚴(yán)重;肺纖維化小鼠血清中TGF-β1、IL-1β及IL-6含量明顯升高,TGF-β1、IL-1β及IL-6參與了肺纖維化的發(fā)生發(fā)展。2.肺纖維化小鼠肺組織TERT的活性變化是先升高再降低,老年肺纖維化小鼠肺組織TERT變化波動(dòng)程度大,年齡因素可能通過(guò)影響小鼠肺纖維化模型中肺組織TERT的活性來(lái)改變小鼠肺纖維化病變程度。實(shí)驗(yàn)三年齡因素對(duì)小鼠肺纖維化模型中DNMT3a、DNMT3b及CDH1表達(dá)影響的研究目的:研究小鼠肺纖維化過(guò)程中年齡因素對(duì)DNMT3a、DNMT3b及CDH1表達(dá)的影響。方法:32只10-12周齡雄性C57BL/6小鼠,無(wú)特殊病原體SPF級(jí),飼養(yǎng)至20周齡時(shí),隨機(jī)分為青年肺纖維化模型組(A組),青年正常對(duì)照組(B組),老年肺纖維化模型組(C組),老年正常對(duì)照組(D組),每組8只,A組小鼠氣管內(nèi)注入博萊霉素稀釋液制造肺纖維化模型;B組氣管內(nèi)注入同等劑量生理鹽水進(jìn)行對(duì)照,C組和D組飼養(yǎng)至26周齡后分別對(duì)應(yīng)使用A組和B組的造模方法制造老年肺纖維化組模型和老年正常對(duì)照組模型。麻醉和造模方法與實(shí)驗(yàn)二中小鼠麻醉和造模方法相同;C組和D組飼養(yǎng)至26周齡后分別對(duì)應(yīng)使用A組和B組的造模方法制造老年肺纖維化組模型和老年正常對(duì)照組模型。A組、B組、C組和D組每組小鼠于造模后的第28天分別采用腹主動(dòng)脈采血法處死,留取肺組織標(biāo)本待測(cè)。小鼠肺組織HE染色及Ashcroft評(píng)分評(píng)定肺纖維化程度;小鼠肺組織Masson染色觀察膠原分布;Western Blot法檢測(cè)小鼠肺組織DNMT3a、DNMT3b和CDH1的蛋白含量。結(jié)果:1.與B組相比,A組DNMT3a、DNMT3b蛋白表達(dá)明顯升高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與D組相比,C組DNMT3a、DNMT3b蛋白表達(dá)明顯升高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與A組相比,C組DNMT3a、DNMT3b蛋白表達(dá)明顯升高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與B組相比,D組DNMT3a、DNMT3b蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化,P0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.與B組相比,A組CDH1蛋白表達(dá)明顯降低,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與D組相比,C組CDH1蛋白表達(dá)明顯降低,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與A組相比,C組CDH1蛋白表達(dá)明顯降低,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與B組相比,D組CDH1蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化,P0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:肺纖維化小鼠肺組織DNMT3a、DNMT3b的表達(dá)升高,CDH1表達(dá)降低,老年肺纖維化小鼠較青年肺纖維化小鼠更明顯。年齡因素可能通過(guò)影響小鼠肺纖維化模型中肺組織DNMT3a、DNMT3b及CDH1的表達(dá)來(lái)改變肺纖維化病變程度。第三部分TGF-β1誘導(dǎo)的A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞TERT及DNMT3a、DNMT3b的表達(dá)異常及干預(yù)措施的研究實(shí)驗(yàn)四TGF-β1對(duì)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞DNMT3a、DNMT3b、CDH1、TERT表達(dá)影響的研究目的:研究TGF-β1對(duì)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞DNMT3a、DNMT3b、CDH1、TERT及IL-1β和IL-6表達(dá)的影響。方法:培養(yǎng)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,分為對(duì)照組、TGF-β1 2μmol/L干預(yù)組、TGF-β1 5μmol/L干預(yù)組和TGF-β1 10μmol/L干預(yù)組。β-gal染色法檢測(cè)TGF-β1梯度刺激對(duì)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞衰老的影響;ELISA檢測(cè)TGF-β1梯度刺激對(duì)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞IL-1β、IL-6蛋白表達(dá);Quantitative Real-time PCR檢測(cè)TGF-β1梯度刺激對(duì)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞IL-1β、IL-6 m RNA的表達(dá);觀察TGF-β1對(duì)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)和膠原蛋白表達(dá)的影響;Quantitative Real-time PCR檢測(cè)TGF-β1對(duì)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞COL-I、FN1、Tensin-C m RNA的表達(dá);Quantitative Real-time PCR檢測(cè)TGF-β1對(duì)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞DNMT3a、DNMT3b、CDH1及TERT m RNA的表達(dá);Western Blot法檢測(cè)TGF-β1對(duì)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞TERT蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:1.正常對(duì)照組幾乎未出現(xiàn)衰老細(xì)胞,干預(yù)組細(xì)胞衰老百分比隨TGF-β1濃度升高而升高。2.TGF-β1 2μmol/L干預(yù)組、TGF-β1 5μmol/L干預(yù)組及TGF-β1 10μmol/L干預(yù)組與對(duì)照組相比,A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞IL-1β和IL6蛋白及m RNA的表達(dá)明顯升高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;兩者隨著TGF-β1濃度的升高,表達(dá)也進(jìn)一步升高,TGF-β1 5μmol/L干預(yù)組、TGF-β1 10μmol/L干預(yù)組與TGF-β1 2μmol/L干預(yù)組相比,A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞IL-1β和IL6蛋白及m RNA的表達(dá)明顯升高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;但TGF-β1 5μmol/L干預(yù)組與TGF-β1 10μmol/L干預(yù)組作用相當(dāng),P0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.光鏡下觀察對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)呈典型的上皮細(xì)胞樣形態(tài),TGF-β1 10μmol/L干預(yù)組細(xì)胞出現(xiàn)典型的間質(zhì)細(xì)胞樣形態(tài),Masson染色后光鏡下觀察對(duì)照組細(xì)胞幾乎未見(jiàn)藍(lán)色膠原蛋白表達(dá),而TGF-β1 10μmol/L干預(yù)組細(xì)胞藍(lán)染膠原蛋白表達(dá)明顯增多,表達(dá)范圍明顯增加。4.TGF-β1 10μmol/L干預(yù)組與對(duì)照組相比,A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞COL-I、FN1、Tensin-C m RNA表達(dá)明顯升高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.TGF-β1 10μmol/L干預(yù)組與對(duì)照組相比,A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞DNMT3a和DNMT3b m RNA的表達(dá)明顯升高,TERT和CHD1基因m RNA的表達(dá)明顯降低,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TGF-β1 10μmol/L干預(yù)組與對(duì)照組相比,A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞TERT蛋白表達(dá)明顯降低,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.TGF-β1可導(dǎo)致A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞發(fā)生衰老,促進(jìn)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞IL-1β、IL6、COL-I、FN1和Tensin-C的表達(dá)。2.TGF-β1促進(jìn)了A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞DNMT3a和DNMT3b的表達(dá),抑制TERT和CHD1的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)五TGF-β1對(duì)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞TERT啟動(dòng)子活性及DNMT3a、DNMT3b轉(zhuǎn)錄因子與TERT啟動(dòng)子結(jié)合影響的研究目的:研究TGF-β1對(duì)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞TERT啟動(dòng)子活性及DNMT3a、DNMT3b轉(zhuǎn)錄因子與TERT啟動(dòng)子結(jié)合的影響。方法:培養(yǎng)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,分為對(duì)照組、TGF-β1 10μmol/L干預(yù)組。熒光素酶法檢測(cè)TGF-β1對(duì)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞TERT啟動(dòng)子活性的影響;染色質(zhì)免疫共沉淀法檢測(cè)TGF-β1對(duì)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞DNMT3a和DNMT3b與TERT啟動(dòng)子結(jié)合的影響。結(jié)果:1.TGF-β1 10μmol/L干預(yù)組與對(duì)照組相比,A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞TERT啟動(dòng)子活性下降,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.TGF-β1 10μmol/L干預(yù)組與對(duì)照組相比,A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞DNMT3a和DNMT3b轉(zhuǎn)錄因子與TERT啟動(dòng)子的相對(duì)結(jié)合量增大,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步比較DNMT3a和DNMT3b轉(zhuǎn)錄因子的富集情況,DNMT3a轉(zhuǎn)錄因子的富集比DNMT3b轉(zhuǎn)錄因子的富集多,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:TGF-β1促進(jìn)了DNMT3a,DNMT3b轉(zhuǎn)錄因子與TERT啟動(dòng)子的結(jié)合,DNMT3a轉(zhuǎn)錄因子與TERT啟動(dòng)子的結(jié)合起較大作用。對(duì)TERT啟動(dòng)子甲基化水平產(chǎn)生一定影響,進(jìn)而使TERT啟動(dòng)子活性下降。實(shí)驗(yàn)六DNMT3a si RNA干擾與TERT過(guò)表達(dá)對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞纖維化及衰老干預(yù)作用的研究目的:研究DNMT3a si RNA干擾與TERT過(guò)表達(dá)對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞纖維化及衰老的干預(yù)作用。方法:培養(yǎng)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,分為對(duì)照組、TGF-β1干預(yù)組、TGF-β1干預(yù)+DNMT3a si RNA干擾組、TGF-β1干預(yù)+TERT過(guò)表達(dá)組及TGF-β1干預(yù)+DNMT3a si RNA干擾+TERT過(guò)表達(dá)組,對(duì)DNMT3a行si RNA干擾;選擇慢病毒為載體,進(jìn)行質(zhì)粒慢病毒轉(zhuǎn)染對(duì)TERT進(jìn)行過(guò)表達(dá)處理,TGF-β1干預(yù)+TERT過(guò)表達(dá)組與TGF-β1干預(yù)+DNMT3a si RNA干擾+TERT過(guò)表達(dá)組為質(zhì)粒慢病毒轉(zhuǎn)染,對(duì)照組、TGF-β1干預(yù)組與TGF-β1干預(yù)+DNMT3a si RNA干擾組行LV-GFP質(zhì)粒慢病毒空載對(duì)照。共聚焦激光掃描熒光顯微鏡檢測(cè)各組A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞熒光;Masson染色檢測(cè)各組A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞膠原蛋白的表達(dá);Quantitative Real-time PCR檢測(cè)各組A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞COL-I、FN1、Tensin-C m RNA表達(dá)的影響;Western Blot法檢測(cè)各組A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞TERT、DNMT3a、DNMT3b和CDH1蛋白表達(dá)的影響;β-gal染色法檢測(cè)各組A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的衰老情況。結(jié)果:1.DNMT3a si RNA干擾和TERT過(guò)表達(dá)成功。2.Masson染色后對(duì)照組細(xì)胞幾乎未見(jiàn)藍(lán)色膠原蛋白表達(dá),而TGF-β1干預(yù)組細(xì)胞出現(xiàn)大量藍(lán)染膠原蛋白,其表達(dá)量及表達(dá)范圍均明顯增加,與對(duì)照組相比,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TGF-β1干預(yù)+DNMT3a si RNA干擾組、TGF-β1干預(yù)+TERT過(guò)表達(dá)組與TGF-β1干預(yù)+DNMT3a si RNA干擾+TERT過(guò)表達(dá)組均有藍(lán)染膠原蛋白表達(dá),三組表達(dá)無(wú)差別,三組分別與對(duì)照組相比,藍(lán)染膠原蛋白表達(dá)量及表達(dá)范圍增加,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;三組分別與TGF-β1干預(yù)組相比,藍(lán)染膠原蛋白表達(dá)量及表達(dá)范圍均較減少,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.TGF-β1干預(yù)組與對(duì)照組相比,A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞COL-I,FN1,Tensin-C m RNA表達(dá)明顯升高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TGF-β1干預(yù)+DNMT3a si RNA干擾組、TGF-β1干預(yù)+TERT過(guò)表達(dá)組與TGF-β1干預(yù)+DNMT3a si RNA干擾+TERT過(guò)表達(dá)組三組的A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞COL-I、FN1、Tensin-C m RNA表達(dá)升高,三組分別與對(duì)照組相比,COL-I、FN1、Tensin-C m RNA表達(dá)升高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;三組分別與TGF-β1干預(yù)組相比,COL-I、FN1、Tensin-C m RNA表達(dá)降低,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.TGF-β1干預(yù)組與對(duì)照組相比,A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞DNMT3a、DNMT3b蛋白表達(dá)明顯升高,TERT、CDH1蛋白表達(dá)明顯降低,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TGF-β1干預(yù)+DNMT3a si RNA干擾組、TGF-β1干預(yù)+TERT過(guò)表達(dá)組與TGF-β1干預(yù)+DNMT3a si RNA干擾+TERT過(guò)表達(dá)組三組的A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)DNMT3a、DNMT3b蛋白表達(dá)升高,TERT、CDH1蛋白表達(dá)降低,三組表達(dá)無(wú)差別;但分別與TGF-β1干預(yù)組相比,三組的A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞DNMT3a、DNMT3b蛋白表達(dá)降低,TERT、CDH1蛋白表達(dá)升高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.對(duì)照組幾乎未出現(xiàn)衰老細(xì)胞,而TGF-β1干預(yù)組出現(xiàn)大量衰老細(xì)胞,且衰老細(xì)胞的比例最大,而TGF-β1干預(yù)+DNMT3a si RNA干擾組、TGF-β1干預(yù)+TERT過(guò)表達(dá)組與TGF-β1干預(yù)+DNMT3a si RNA干擾+TERT過(guò)表達(dá)組這三組均有衰老細(xì)胞表達(dá),衰老細(xì)胞的比例三組表達(dá)無(wú)差別,但三組分別與對(duì)照組相比,衰老細(xì)胞增多及比例增大,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;三組分別與TGF-β1干預(yù)組相比,衰老細(xì)胞減少及比例降低,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:干擾DNMT3a si RNA與過(guò)表達(dá)TERT均可以減輕TGF-β1對(duì)A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞致纖維化作用和A549人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞發(fā)生衰老的程度。但DNMT3a si RNA干擾與TERT過(guò)表達(dá)之間沒(méi)有疊加作用。
【圖文】：

TGF-β1標(biāo)準(zhǔn)曲線

IL-1β標(biāo)準(zhǔn)曲線
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R563
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本文編號(hào)：2651623