【摘要】： 研究背景 慢性阻塞性肺疾病(COPD)是具有氣流受限不完全可逆特征并呈進(jìn)行性發(fā)展的肺部慢性炎癥性疾病。它是當(dāng)今危害人類健康主要疾病之一，發(fā)病率呈日益上升，據(jù)WHO預(yù)測(cè)在2020年它將成為全球疾病排名的第5位。但是其發(fā)病機(jī)制仍不是很清楚。而氣道結(jié)構(gòu)的變化包括杯狀細(xì)胞增殖，黏液腺體化生，黏膜下層纖維化，平滑肌的增厚，及細(xì)胞外基質(zhì)的沉積等即氣道重構(gòu)，據(jù)研究表明是不可逆氣流受限的主要原因。目前普遍認(rèn)為長(zhǎng)期反復(fù)慢性氣道炎癥損傷及不完全修復(fù)過程導(dǎo)致了氣道結(jié)構(gòu)和功能的改變，涉及巨噬細(xì)胞，成纖維細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，，上皮細(xì)胞等多種細(xì)胞及各種炎癥因子，生長(zhǎng)因子，具體機(jī)制仍未明了。國(guó)內(nèi)外正積極尋找能較正確反映COPD疾病發(fā)生發(fā)展過程的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ凸ぞ�。我們先前已通過煙薰加氣道滴入LPS方法成功建立了COPD大鼠模型，擬在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步改善方法建立具有明顯氣道重構(gòu)特征的動(dòng)物模型。理論上，在炎癥早期應(yīng)用抗炎藥可以通過抑制炎癥來明顯減緩氣道結(jié)構(gòu)功能的改變。布地奈德霧吸應(yīng)用于COPD病人可明顯減輕癥狀，減少發(fā)作頻率，但能否影響外周氣道病理變化仍不清。紅霉素近年來研究顯示有抗炎抗纖維化作用，對(duì)吸煙引起的氣管炎及肺氣腫是否有作用仍少見報(bào)道。百令(人工培育蟲草菌粉)已有研究表明具有雙向免疫調(diào)節(jié)，抗炎，抗氧化，抗纖維化作用，先前研究表明能阻斷大鼠COPD模型的形成，能否影響氣道重構(gòu)和生長(zhǎng)因子變化需進(jìn)一步研究。 研究目的 建立具有氣道重構(gòu)的COPD大鼠模型，觀察其氣道重構(gòu)的病理特征和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β)的表達(dá)。觀察布地奈德、紅霉素和百令對(duì)COPD大鼠氣道重構(gòu)的干預(yù)作用并探討可能的機(jī)制，為尋求可供臨床應(yīng)用的具有抗COPD氣道重構(gòu)的藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 2(刃4浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文 研究方法由浙江省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供二級(jí)雄性sD大鼠40只，體重200士209， 隨機(jī)分為正常對(duì)照組(A組卜模型組(B組)、百令干預(yù)組(C組)、紅霉素干 預(yù)組(D組)、布地奈德干預(yù)組(E組)。慢性煙薰和氣道內(nèi)滴入LPS兩次，總 時(shí)程共10周制作COPD動(dòng)物模型。測(cè)定氣道流速，潮氣量，跨肺壓，換算成氣 道阻力，動(dòng)態(tài)肺順應(yīng)性。大鼠左肺25cm水柱下10%的中性福爾馬林灌注固定。 然后進(jìn)行常規(guī)HE染色，masson膠原特染及免疫組化檢查。右肺部分組織行 RT一PCR檢測(cè)TGF- p lmRNA的表達(dá)變化。部分標(biāo)本行電鏡顯微觀察，和進(jìn)行經(jīng) 脯胺酸的測(cè)定。對(duì)免疫組化結(jié)果采用半定量法，TGF-旦lmRNA采用相對(duì)含量進(jìn) 行比較。病理圖像分析儀測(cè)定氣道直徑，基底膜周長(zhǎng)，管壁面積，膠原面積。對(duì) 單位長(zhǎng)度的管壁厚度及膠原厚度進(jìn)行定量比較。采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處 理數(shù)據(jù)。 結(jié)果1 COPD大鼠體重增長(zhǎng)較正常大鼠明顯延緩，而藥物干預(yù)各組對(duì)體重變化 無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2大鼠肺功能的測(cè)定顯示模型組氣道阻力增高，動(dòng)態(tài)肺順應(yīng)性 下降與正常組相比差異顯著。冬蟲夏草干預(yù)可以抑制氣道阻力下降，對(duì)順應(yīng)性無 明顯影響。紅霉素及吸入布地奈德干預(yù)與模型組相比其氣道阻力明顯下降，肺順 應(yīng)性顯著升高。3病理形態(tài)觀察光鏡結(jié)果:正常組呼吸道及肺泡上皮結(jié)構(gòu)完整， 纖毛排列整齊，各級(jí)氣管支氣管可見少量散在的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡結(jié)構(gòu)完整無 氣腫，肺泡區(qū)極少見到巨噬細(xì)胞。模型組纖毛上皮部分剝脫、纖毛粘連倒伏、變 性壞死，氣道上皮復(fù)層化，杯狀上皮細(xì)胞增生;氣管勃膜下層、肌層可見大量的 淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，少量漿細(xì)胞;小氣道和小血管周圍肺泡區(qū)聚集大量吞 噬煙塵的“塵細(xì)胞”;肺泡腔不規(guī)則擴(kuò)大，特別在肺泡外周明顯，刊見肺大泡形 成;支氣管平滑肌層增厚明顯，masson三色染色可見細(xì)支氣管，肺動(dòng)脈膠原明顯 增多。肺組織輕脯胺酸的測(cè)定亦證實(shí)模型膠原明顯增多。電鏡結(jié)果:模型組肺泡 H型上皮微絨毛減少，空泡樣變，肌成纖維細(xì)胞胞漿內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，功能活躍。4病 理形態(tài)分析模型組大鼠氣道管壁較正常大鼠明顯增厚，且各類大小氣道的膠原 亦明顯增多。早期應(yīng)用冬蟲夏草對(duì)小氣道的管壁增厚有一定的抑制效果，未見其 對(duì)氣道膠原的影響。使用紅霉素干預(yù)可以抑制氣道管壁的增厚，并且對(duì)小氣道的 膠原亦有較明顯的抑制作用，但是未見對(duì)大、中等大小氣道有抑制效果。吸入激 素干預(yù)可以明顯抑制模型大鼠各級(jí)氣道管壁的增厚及大、中氣道膠原的增多，對(duì) 3 2004浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文 小氣道的抑制作用不明顯。5模型組支氣管肺組織TGF一pl的mRNA表達(dá)明顯 增多，而早期使用激素以及紅霉素可以抑制此種效應(yīng)，但冬蟲夏草對(duì)TGF- pl的 mRNA的抑制無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組大鼠可見支氣管鉆膜上皮，肺泡上皮，血管 內(nèi)廠芝及肺泡巨噬細(xì)胞強(qiáng)陽性表達(dá)TGF一pl蛋白，而正常大鼠表達(dá)陰性或弱陽性。 紅霉素及吸入布地奈德干預(yù)和模型組相比在細(xì)支氣管上皮水平有顯著差異，而在 小皿管內(nèi)皮、肺泡巨噬細(xì)胞方面則不明顯。冬蟲夏草干預(yù)未觀察到此影響。 結(jié)論 1通過慢性煙薰和多次滴入LPS制作總時(shí)程10周的大鼠模型是一個(gè)較好的具有 氣道重構(gòu)特點(diǎn)的COPD模型。 2 TGF-pl在COPD大鼠氣道重構(gòu)產(chǎn)生發(fā)展中
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R563.9

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本文編號(hào)：2651378