【摘要】： 目的與意義:支氣管哮喘(哮喘)是一種嚴重危害人類健康的疾病,流行病調(diào)查顯示其發(fā)病率及病死率在世界各地呈上升趨勢。目前認為哮喘的病因及發(fā)病機制是由遺傳基因與環(huán)境因素相互作用的結(jié)果。環(huán)境因素中主要包括吸入物、感染、食物以及一些藥物。近年來研究發(fā)現(xiàn)病毒感染后哮喘的發(fā)病率上升,成人中以鼻病毒常見,兒童中以呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus RSV)最為常見。隨著研究的深入,發(fā)現(xiàn)單純的RSV感染不能直接導(dǎo)致哮喘發(fā)生,但RSV感染后,患者再次接觸過敏原,則可能出現(xiàn)哮喘。因此本實驗的目的是通過RSV感染結(jié)合OVA霧化吸入建立豚鼠哮喘動物模型,研究RSV誘發(fā)哮喘中神經(jīng)機制的作用。 方法:①以Hep-2細胞培養(yǎng)呼吸道合胞病毒,根據(jù)細胞病變效應(yīng)程度和TCID50實驗結(jié)果選擇合適毒力的RSV接種豚鼠。健康、體重250~300 g的雌性豚鼠50只,隨機分為6組:Hep-2滴鼻(NS)組、RSV滴鼻(RSV)組、Hep-2滴鼻/鹽水霧化(Hep-2/NS)組、RSV滴鼻/NS霧化組(RSV/NS組)、Hep-2滴鼻/OVA霧化(Hep-2/OVA)組、RSV滴鼻/OVA霧化(RSV/OVA)組。所有動物在乙醚輕微麻醉下以TCID50=5×10-5.5的RSV懸液250μl或者相同條件的Hep-2細胞培養(yǎng)液滴鼻吸入,第2日以相同劑量加強1次。 ②第7日,NS組和RSV組的豚鼠,通過二道生理記錄儀和電刺激迷走神經(jīng)法檢測并記錄兩組氣道內(nèi)壓力(Intra-airway pressure, IP mmH2O)。然后依次靜脈給予0.1、1、10、100μg/kg濃度的選擇性M_2受體激動劑匹羅卡品,檢測IP的變化,根據(jù)IP的變化程度評估氣道膽堿能神經(jīng)突觸前膜自身抑制性M_2受體功能。以10 ml生理鹽水進行支氣管肺泡灌洗,收集肺泡灌洗液中細胞,常規(guī)吉姆薩染色,行細胞分類計數(shù),觀察RSV感染對肺臟的炎癥影響。以RSV組豚鼠為對照組。 ③第7日, Hep-2/NS組、RSV/NS組、Hep-2/OVA組和RSV/OVA組豚鼠接受1%OVA或者生理鹽水霧化吸入30 min ,隔日1次,持續(xù)2 wk,建立哮喘模型。通過肺組織HE染色并計數(shù)粘膜與粘膜下細胞總數(shù)和嗜酸性粒細胞數(shù)目以檢驗哮喘模型是否成功。 ④第21日以相同的方法檢測氣道反應(yīng)性和M_2受體功能,行膽堿能神經(jīng)纖維免疫組化并計數(shù)陽性纖維數(shù)目以進一步研究其發(fā)病機制。以Hep-2/NS組豚鼠為對照組。 結(jié)果:①第7日,未刺激迷走神經(jīng)時,NS組和RSV組豚鼠的IP分別為11.08±1.02 mmH2O和11.75±1.47 mmH2O,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。給予電刺激后,兩組IP均呈頻率依賴性增高,且RSV組明顯高于NS組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。依次給予0.1、1、10、100μg/kg濃度的匹羅卡品后,NS組IP呈劑量依賴性降低,而RSV組IP下降幅度明顯低于NS組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。支氣管肺泡灌洗液的細胞分類計數(shù)結(jié)果顯示RSV組中細胞總數(shù),單核細胞、淋巴細胞、中性粒細胞和嗜酸性粒細胞數(shù)目均明顯高于NS組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.05)。 ②第21天,HE染色顯示RSV/OVA組豚鼠的肺組織出現(xiàn)明顯的炎癥細胞浸潤,氣管收縮,氣道分泌物增多等表現(xiàn),氣道粘膜和粘膜下嗜酸性粒細胞數(shù)目明顯增多,符合哮喘的病理改變。 ③氣道反應(yīng)性和M_2受體功能:未刺激迷走神經(jīng)時,Hep-2/NS組、RSV/NS組、Hep-2/OVA組和RSV/OVA組的IP分別為10.46±1.55 mmH2O、10.2±1.37 mmH2O、12.11±1.88 mmH2O和16.23±2.28mmH2O,各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。給予電刺激后,各組IP均呈頻率依賴性增高,RSV/NS組與Hep-2/NS組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),Hep-2/OVA組IP明顯高于Hep-2/NS組和RSV/NS組(均P 0.05), RSV/OVA組IP明顯高于Hep-2/OVA組(P0.05)。依次給予0.1、1、10、100μg/kg濃度的匹羅卡品后,Hep-2/NS組、RSV/NS組和Hep-2/OVA組IP呈劑量依賴性降低,但Hep-2/OVA組IP下降幅度明顯低于Hep-2/NS組和RSV/NS組(均P0.05)。RSV/OVA組IP無明顯下降,高于Hep-2/OVA組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。平滑肌層有膽堿能陽性纖維分布:RSV/NS組與Hep-2/NS組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),Hep-2/OVA組陽性纖維數(shù)目明顯高于Hep-2/NS組和RSV/NS組(P0.05),但RSV/OVA組與Hep-2/OVA組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論:①RSV急性感染導(dǎo)致氣道副交感神經(jīng)自身抑制性M_2受體功能障礙,引起氣道高反應(yīng)性發(fā)生。并引起以中性粒細胞和嗜酸性粒細胞浸潤為主要表現(xiàn)的炎癥反應(yīng)。 ②RSV感染結(jié)合OVA霧化可導(dǎo)致豚鼠肺組織出現(xiàn)哮喘的病理改變。 ③RSV感染末期氣道反應(yīng)性以及氣道M_2受體功能恢復(fù)正常。但可以促進OVA引起的豚鼠AHR發(fā)生,其機制可能是進一步促進OVA霧化吸入導(dǎo)致的氣道自身抑制性M_2受體功能障礙,從而加劇氣道高反應(yīng)性。OVA可導(dǎo)致氣道平滑肌層膽堿能陽性纖維分布增多,但RSV感染對其分布增多無明顯影響。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R562.25

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉恩梅;彭才靜;;呼吸道合胞病毒感染防治進展[J];臨床兒科雜志;2011年08期

2 黃維琳;孫亭;唐曉偉;崔素華;黃九龍;周愛民;;復(fù)方地龍膠囊對哮喘小鼠血清IL-4分泌的影響[J];黔南民族醫(yī)專學(xué)報;2011年02期

3 唐小樂;王艷杰;趙丹玉;郭雋馥;曹陽;閔廣艷;柳春;;補脾益氣方藥對脾虛哮喘大鼠肺中KKα表達的影響[J];實用中醫(yī)內(nèi)科雜志;2010年02期

4 王堯;楊青;郭鋒;況九龍;李里香;;哮喘氣道重塑與氧化應(yīng)激的實驗研究[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2011年04期

5 于鴻;計忠宇;趙輝;盧麗艷;;定喘湯對支氣管哮喘大鼠氣道重塑及嗜酸粒細胞的影響[J];中國中醫(yī)急癥;2011年09期

6 張華;程琳;陶曉南;陳菊英;;地塞米松對哮喘大鼠Th2細胞分化的影響[J];中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志;2011年02期

7 李榮培;陳昕;劉平;陸彪;趙曉東;;玉屏風(fēng)散對小鼠哮喘合并人偏肺病毒感染的干預(yù)機制探討[J];中國免疫學(xué)雜志;2011年08期

8 宋穎芳;賴國祥;戚好文;吳昌歸;;1,25-二羥維生素D_3減輕哮喘小鼠的氣道重塑[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2011年09期

9 王谷宜;劉毅;張莉;劉紹坤;李坑;龔素波;向旭東;陳平;;β-arrestin 2對急性支氣管哮喘小鼠模型脾CD4~+T細胞T-bet表達的影響[J];中華哮喘雜志(電子版);2011年04期

10 朱秋麗;張濤;丁云芳;張學(xué)蘭;趙根明;;呼吸道合胞病毒感染兒童住院費用影響因素的回歸樹分析[J];復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2011年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 鄧昱;劉恩梅;;IL-12+重組卡介苗新生期接種調(diào)節(jié)小鼠Th17/Th1平衡對實驗性哮喘模型的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2010年

2 黃美蓉;;氧化苦參堿對抗原致敏支氣管哮喘大鼠氣道高反應(yīng)性的影響[A];湖北省暨武漢市病理生理學(xué)會第十四屆學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

3 林紅伍;孫勤;梁新妹;李慶選;于書云;陸強;楊曉薇;周德祥;楊勇;周連發(fā);郭笑冬;;大黃對哮喘豚鼠肺組織形態(tài)學(xué)的作用[A];第四屆中國中西醫(yī)結(jié)合變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

4 范欣生;童黃錦;王露;顧鵬程;許惠琴;;一種病毒性哮喘模型方法的建立及評價[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥實驗藥理分會第七屆學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2007年

5 吉寧飛;符曉蘇;陳力;;過敏性因素在老齡大鼠支氣管哮喘模型中的實驗研究[A];第六屆全國老年醫(yī)學(xué)進展學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

6 黃華瓊;王嬌莉;沈華浩;;不同致敏和激發(fā)時間對哮喘模型的影響[A];華東地區(qū)第6屆中青年呼吸醫(yī)師論壇暨浙江省第29屆呼吸疾病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

7 宋丹丹;徐藍;孫云;;左旋沙丁胺醇抑制哮喘模型氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性的研究[A];第十屆全國抗炎免疫藥理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2010年

8 李孟榮;吳超雄;王超;王曉寧;;CpGODN對OVA哮喘小鼠TSLP、IL-17表達影響的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會2010年全國變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會議暨中歐變態(tài)反應(yīng)高峰論壇參會指南/論文匯編[C];2010年

9 徐向暉;郭雪君;徐衛(wèi)國;皮衛(wèi)峰;;不同措施對小鼠支氣管哮喘模型的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第五次全國哮喘學(xué)術(shù)會議暨中國哮喘聯(lián)盟第一次大會論文匯編[C];2006年

10 蓋曉燕;孫永昌;朱元莉;;香煙煙霧暴露對小鼠急性和慢性支氣管哮喘模型氣道炎癥和重塑的不同影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國呼吸病學(xué)術(shù)會議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 姜之炎 吳玉晶;小兒敷貼粉可改善哮喘大鼠氣道反應(yīng)[N];中國醫(yī)藥報;2005年

2 言鳳鳴;呼吸道合胞病毒易引發(fā)兒童感冒和肺炎[N];衛(wèi)生與生活報;2008年

3 本報記者 耿健;家有孩子要注意消毒和通風(fēng)[N];中國消費者報;2000年

4 邵建國;核心競爭力偏離研發(fā)？[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2008年

5 小秋;干擾素效果令人關(guān)注[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

6 魏開敏;治嬰幼兒毛細支氣管炎可選用的藥物[N];中國醫(yī)藥報;2007年

7 ;幾種呼吸道病毒性疾病表現(xiàn)[N];中國醫(yī)藥報;2006年

8 青島市第五人民醫(yī)院;警惕身邊的過敏原[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

9 知陶;選藥不同 費用各異[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

10 曉原;低價沖擊利巴韋林劑型格局[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 楊碩;三步序貫法對激素干預(yù)后哮喘大鼠氣道炎癥和HPA軸影響的實驗研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2005年

2 王桂蘭;IL-4RA基因轉(zhuǎn)染阻止了哮喘模型的炎癥發(fā)展[D];吉林大學(xué);2006年

3 彭慧琴;病毒唑?qū)粑篮习《靖腥菊T導(dǎo)宿主細胞凋亡及有關(guān)基因表達的影響[D];浙江大學(xué);2005年

4 李睿;小鼠卡介苗新生期接種和呼吸道合胞病毒感染對免疫狀態(tài)和實驗性哮喘的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

5 揭志軍;CpG-ODN對慢性哮喘小鼠模型氣道重塑及ADAM33基因表達的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

6 胡艷;不同時間接觸變應(yīng)原對大鼠哮喘模型的影響及其機制研究[D];北京大學(xué);2008年

7 崔振澤;定喘湯及其宣降清分解劑抗呼吸道合胞病毒感染的體內(nèi)外實驗研究[D];遼寧中醫(yī)學(xué)院;2005年

8 侯霞;水通道蛋白及氯離子通道m(xù)CLCA3在哮喘發(fā)生中的作用[D];東北師范大學(xué);2007年

9 趙海金;維生素D_3上調(diào)蛋白1（VDUP1）參與哮喘氧化應(yīng)激的作用及分子機制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2008年

10 劉強;冬病夏治方的制劑開發(fā)及作用機理研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳方方;呼吸道合胞病毒感染與哮喘激素抵抗機制的實驗研究[D];山東大學(xué);2006年

2 孫蕓;樹突狀細胞在小鼠哮喘發(fā)病中的分子機制研究[D];南京師范大學(xué);2005年

3 唐玉紅;小鼠白介素12質(zhì)粒對哮喘模型CD4～+CD25～+T細胞及其相關(guān)細胞因子的影響[D];浙江大學(xué);2006年

4 王銳英;吸煙對致敏大鼠肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶9及其抑制劑1表達的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

5 田偉千;霧化吸入氯胺酮對哮喘大鼠肺組織一氧化氮及一氧化氮合酶的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

6 龍銳;小青龍顆粒中麻黃堿、偽麻黃堿在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)及藥效學(xué)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2008年

7 陳俊文;PI3K在支氣管哮喘大鼠氣道平滑肌細胞中的表達[D];華中科技大學(xué);2007年

8 李鋒;基質(zhì)金屬蛋白酶-9/組織金屬蛋白酶抑制劑-1在小鼠哮喘模型氣道重塑中的動態(tài)表達[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2005年

9 張麗;胸段硬膜外阻滯聯(lián)合中藥對哮喘大鼠IL-4和IFN-γ的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2007年

10 劉玉慧;A_（2B）腺苷受體拮抗劑XAC對小鼠哮喘模型的干預(yù)作用及機制探討[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

，

本文編號：2649570