【摘要】： 在某些類型的急性肺損傷中,肺泡上皮細(xì)胞凋亡在急性肺損傷發(fā)病機(jī)制中具有重要作用。有報道在小鼠鼻內(nèi)滴入激活Fas的單克隆抗體,激活Fas凋亡通路可導(dǎo)致II型肺泡上皮細(xì)胞凋亡,并引起稍后發(fā)生的持久的炎癥反應(yīng)和組織損傷。補(bǔ)體激活產(chǎn)物C5a是一種重要的前炎癥介質(zhì),發(fā)生嚴(yán)重感染時過度產(chǎn)生的C5a血漿中可以達(dá)到10-100nM水平,此時可觸發(fā)細(xì)胞因子/趨化因子瀑布反應(yīng),導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合癥(SIRS),這與器官潛在的損傷和多器官功能不全綜合征(MODS)相關(guān)。已經(jīng)證實(shí)C5a可影響不同的凋亡信號途徑,并對不同類型的細(xì)胞產(chǎn)生促進(jìn)或延遲細(xì)胞凋亡的效應(yīng),這可能也是C5a造成組織損傷的重要機(jī)制之一。calpain對于某些凋亡基因的激活也至關(guān)重要,如calpain可裂解并激活Bax并最終介導(dǎo)細(xì)胞色素C釋放從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)生;然而另有報道μ-calpain的激活或C5a刺激均導(dǎo)致中性粒細(xì)胞的凋亡延遲,所以我們設(shè)想在C5a與胞膜上的C5aR結(jié)合進(jìn)行信息的跨膜傳導(dǎo)后,calpain在下游的胞內(nèi)信號傳導(dǎo)中發(fā)揮一定的作用。本研究將C5a作為刺激因素,觀察其對小鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡的影響,并對其機(jī)制進(jìn)行初探,為急性肺損傷的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: 1.小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞的分離、純化、鑒定及原代培養(yǎng)采用胰酶消化法分離昆明小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞,電鏡觀察和堿性磷酸酶染色法鑒定所得細(xì)胞,六孔板中原代培養(yǎng)48小時備用。 2. C5a誘導(dǎo)小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞凋亡及檢測實(shí)驗(yàn)設(shè)正常對照(A組)、C5a刺激組和PD150606干預(yù)組。正常對照組不加刺激因素。C5a刺激組分兩部分,分別以C5a刺激劑量和C5a連續(xù)刺激時間作為變量交叉實(shí)驗(yàn):1)固定C5a刺激濃度組(分別編為B、C、D組):C5a刺激時間分別為2h、6h、12h; 2)固定時相組(分別編為E、F、G組):均C5a刺激濃度分別為0.1μg/ml、1μg/ml、2μg/ml。PD150606干預(yù)組(H組)根據(jù)以上兩部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇產(chǎn)生最強(qiáng)凋亡事件的條件,與PD150606共同刺激細(xì)胞。每個實(shí)驗(yàn)組各6孔細(xì)胞。 各組細(xì)胞按計劃完成刺激后,采用Annexin-V法進(jìn)行FITC/PI雙染,上流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡率。
【圖文】：

第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文12圖1-1 透射電鏡下觀察Ⅱ型上皮細(xì)胞，胞漿內(nèi)可見特征性板層小體體（分別為×4200倍、×10000倍）圖1-2 光鏡下觀察Akp染色的純化Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞，可見胞漿內(nèi)深藍(lán)色酶反應(yīng)產(chǎn)物（×400倍）

圖1-1 透射電鏡下觀察Ⅱ型上皮細(xì)胞，，胞漿內(nèi)可見特征性板層小體體（分別為×4200倍、×10000倍）圖1-2 光鏡下觀察Akp染色的純化Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞，可見胞漿內(nèi)深藍(lán)色酶反應(yīng)產(chǎn)物（×400倍）
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R563.8

【共引文獻(xiàn)】

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1 高明奇,陳航,周彬,張?zhí)毂?孫黎光,金心;慢性鉛暴露小鼠海馬細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)[J];中國公共衛(wèi)生;2005年06期

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1 王慶華;鉛、鎘聯(lián)合對SD大鼠腎細(xì)胞的毒性損傷及硒的保護(hù)作用[D];揚(yáng)州大學(xué);2006年

2 馮利杰;Tau蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞毒性及泛素連接酶Hrd1的保護(hù)作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

本文編號：2647810