【摘要】：研究背景及意義 支氣管哮喘(bronchial asthma)簡稱哮喘,是由多種細(xì)胞和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病。氣道慢性炎癥作為哮喘的基本病理改變,在哮喘病程中持續(xù)存在,是導(dǎo)致哮喘氣道高反應(yīng)性和癥狀反復(fù)發(fā)生的重要原因之一。因此,如何控制哮喘的慢性氣道炎癥是哮喘基礎(chǔ)和臨床研究的熱點(diǎn)。與COPD的慢性炎癥不同,哮喘氣道炎癥以Th2型炎癥為主,典型表現(xiàn)為支氣管粘膜內(nèi)大量激活的嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、Th2型細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤,激活的Th2型細(xì)胞產(chǎn)生大量的Th2型細(xì)胞因子。目前的研究表明Th2型細(xì)胞和Th2型細(xì)胞因子在哮喘慢性氣道炎癥中發(fā)揮重要作用。 胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin, TSLP)可以促進(jìn)DC成熟,TSLP-DCs調(diào)控CD4+T細(xì)胞向Th2型細(xì)胞發(fā)展。TSLP-DCs可以促進(jìn)CD4+T細(xì)胞分泌IL-4、IL-5、IL-13等Th2型細(xì)胞因子。與正常對照小鼠比較,OVA致敏激發(fā)的哮喘小鼠肺部TSLP mRNA表達(dá)顯著增加,而且肺泡灌洗液中TSLP蛋白水平升高。肺部特異性高表達(dá)TSLP的轉(zhuǎn)基因小鼠,出現(xiàn)自發(fā)性氣道炎癥,伴氣道高反應(yīng)性、嗜酸細(xì)胞浸潤、血清IgE升高、IL-4、IL-5、IL-13等Th2型因子分泌增加,肺部病理顯示大量CD4+淋巴細(xì)胞浸潤、杯狀細(xì)胞增生、粘膜下纖維化。CD4+淋巴細(xì)胞表達(dá)趨化因子受體CCR4顯著增加。轉(zhuǎn)基因的特應(yīng)性皮炎小鼠模型的皮膚角質(zhì)細(xì)胞過度分泌TSLP,造成血清TSLP升高,能夠誘發(fā)小鼠嚴(yán)重的哮喘發(fā)作。支氣管粘膜活檢提示哮喘病人氣道上皮表達(dá)TSLP比正常人明顯升高,并且與Th2細(xì)胞趨化因子表達(dá)相關(guān),與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)。以上研究顯示TSLP在哮喘Th2型炎癥中發(fā)揮一定的作用。以上研究均提示,TSLP是一種啟動和維持哮喘Th2型炎癥的重要因子。 氣道上皮細(xì)胞(Airway epithelial cell, AEC)是哮喘氣道中TSLP的主要來源,病毒(鼻病毒、呼吸道合胞病毒等)感染可導(dǎo)致AEC分泌TSLP升高。我們的前期研究也證實(shí),哮喘小鼠模型感染呼吸道合胞病毒后,肺組織中TSLP分泌增加,Th2型炎癥加重,病毒復(fù)制的中間產(chǎn)物dsRNA、人工合成的dsRNA(polyI:C)都可以刺激AEC產(chǎn)生TSLP, TSLP促進(jìn)Th2型細(xì)胞因子的分泌,而且在反過來Th2型細(xì)胞因子(IL-4、IL-13等)的協(xié)同作用下,AEC分泌TSLP顯著增多。這種正反饋機(jī)制更好地促進(jìn)和放大了TSLP啟動的Th2型炎癥反應(yīng)。有學(xué)者認(rèn)為TSLP是感染與哮喘氣道變應(yīng)性炎癥之間的橋梁,阻斷TLSP就有降低感染引起的哮喘氣道變應(yīng)性炎癥的可能。TSLP作為哮喘慢性氣道炎癥的關(guān)鍵分子,已經(jīng)被選為哮喘治療的新靶點(diǎn)。目前,AEC分泌TSLP的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制尚不明確,有實(shí)驗(yàn)提示與核因子κB密切相關(guān)。 有研究報(bào)道哮喘患者的誘導(dǎo)痰中TSLP水平與健康人無顯著差異,而且在致敏原激發(fā)后誘導(dǎo)痰中TSLP水平反而下降,這唯一的有關(guān)誘導(dǎo)痰TSLP水平的研究結(jié)果與之前的研究十分矛盾,是否真實(shí)的反應(yīng)了臨床實(shí)際情況?反應(yīng)了哮喘氣道上皮分泌TSLP的真實(shí)情況?需要我們進(jìn)一步研究。 過氧化物酶增殖物激活受體(Peroxisome proliferator activated receptor, PPAR)是一類由配體激活的轉(zhuǎn)錄因子家族,有三種亞型PPAR-α, PPAR-β和PPAR-γ。近年來的研究證實(shí)PPAR-γ活化后具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用,可以調(diào)控炎癥因子的生成、炎癥細(xì)胞趨化、細(xì)胞分化和增生和凋亡。作為調(diào)控炎癥的新靶點(diǎn),PPAR-γ近年被引入哮喘研究。有臨床病例報(bào)道,服用PPAR-γ激動劑吡格列酮有益于控制哮喘癥狀。國外學(xué)者已經(jīng)嘗試進(jìn)行小規(guī)模的臨床實(shí)驗(yàn),已完成的臨床實(shí)驗(yàn)提示在吸煙的哮喘患者中,口服常規(guī)劑量的羅格列酮對比吸入倍氯米松能更好的改善FEV1。 PPAR-y在肺內(nèi)的結(jié)構(gòu)細(xì)胞(上皮細(xì)胞、氣道平滑肌細(xì)胞、肺成纖維細(xì)胞)和炎癥細(xì)胞(嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、DC、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞)中都有表達(dá)。有研究顯示在哮喘小鼠和哮喘患者的肺部PPAR-y表達(dá)增加。PPAR-y激動劑可抑制哮喘動物模型的氣道Th2型炎癥,尤其是抑制哮喘的Th2型細(xì)胞因子的分泌,降低抗原誘導(dǎo)的氣道高反應(yīng)性、肺部炎癥、肺泡灌洗液中的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目,甚至可以減輕氣道重塑。這種抑制作用被PPARy特異性拮抗劑GW9662所消除,這就充分證實(shí)了PPAR-y激動劑的這些作用是由PPARy通路介導(dǎo)的。PPAR-y抗炎機(jī)制仍未研究清楚,有實(shí)驗(yàn)表明PPAR-y活化后通過抑制NF-κB活性來抑制炎性介質(zhì)的產(chǎn)生。PPAR-y激動劑是否通過抑制NF-κB調(diào)控TSLP的表達(dá)?是否通過影響TSLP的表達(dá)而調(diào)控哮喘氣道炎癥的發(fā)生發(fā)展?目前尚不清楚,有待進(jìn)一步探索。 本研究首先通過檢測哮喘患者和正常人血漿和誘導(dǎo)痰液中TSLP的水平,對比分析TSLP在哮喘氣道中的表達(dá)情況及與肺功能、病情嚴(yán)重程度的相關(guān)關(guān)系,初步了解TSLP在哮喘診治中的臨床意義。在細(xì)胞水平上,我們在前期建立的人工合成dsRNA (poly I:C)刺激人支氣管上皮細(xì)胞16HBE分泌TSLP的模型基礎(chǔ)上,研究PPAR-γ激動劑羅格列酮、替米沙坦對上皮細(xì)胞表達(dá)TSLP的調(diào)控作用,并探討其可能機(jī)制。在小鼠的哮喘模型上,我們從整體水平觀察PPAR-γ激動劑羅格列酮和替米沙坦對氣道Th2型炎癥和氣道高反應(yīng)性的影響,通過檢測血清、肺組織及肺泡灌洗液中TSLP表達(dá)情況,初步明確PPAR-γ經(jīng)由調(diào)控TSLP表達(dá)對哮喘慢性氣道炎癥的影響。 研究方法 一、臨床標(biāo)本檢測 1、制定支氣管哮喘患者和健康人入組標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)； 2、收集患者基本資料和行肺功能檢查； 3、收集和處理患者誘導(dǎo)痰和外周血標(biāo)本； 4、最后ELISA法檢測患者的血漿和誘導(dǎo)痰中TSLP的表達(dá)水平； 5、進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 二、體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn) 1、培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞株16HBE； 2、MTT比色法檢測不同濃度的羅格列酮、替米沙坦、GW9662對16HBE細(xì)胞活力的影響： 在0、0.1μM、1μM、5μM、10μM、20μM6個(gè)濃度羅格列酮、替米沙坦、GW9662分別與16HBE共同培養(yǎng),MTT比色法觀察細(xì)胞活力情況。 3、觀察Poly I:C刺激不同時(shí)間對16HBE TSLP mRNA和PPAR-y mRNA表達(dá)的影響： 以25ug/ml濃度的Poly I:C刺激,按不同刺激時(shí)間分成6組,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均設(shè)空白對照組,分別為刺激0h、3h、6h、9h、12 h、24h后提取細(xì)胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄,Real time-PCR檢測TSLP mRNA和PPAR-y mRNA表達(dá)水平。 4、觀察羅格列酮、替米沙坦、GW9662對16HBE表達(dá)TSLP mRNA和蛋白的影響： 羅格列酮(10μM)、GW9662(10μM)、替米沙坦(20μM)加入細(xì)胞培養(yǎng)基孵育3小時(shí),Real time-PCR檢測TSLP mRNA表達(dá)水平。孵育24小時(shí),留取細(xì)胞培養(yǎng)基上清,ELISA檢測TSLP濃度。 5、觀察羅格列酮、替米沙坦對Poly I:C刺激16HBE表達(dá)TSLP mRNA和蛋白的影響： 試驗(yàn)分6組：對照組(用培養(yǎng)基替代Poly I:C); Poly I:C組(加入最終濃度為25μg/ml的Poly I:C)；羅格列酮干預(yù)組(在加入25μg/ml Poly I:C前1小時(shí)加入10μM羅格列酮預(yù)處理)；羅格列酮+GW9662干預(yù)組(在加入羅格列酮前1h加入10μM GW9662預(yù)處理,其他處理與羅格列酮組相同)；替米沙坦干預(yù)組(在加入25μg/ml Poly I:C前1小時(shí)加入20μM羅格列酮預(yù)處理);替米沙坦+GW9662干預(yù)組(在加入替米沙坦前1h加入10μM GW9662預(yù)處理,其他處理與替米沙坦組相同)。Poly I:C刺激3小時(shí),Real time-PCR檢測TSLP mRNA表達(dá)水平。刺激24小時(shí),留取細(xì)胞培養(yǎng)基上清,ELISA檢測TSLP濃度。 6、觀察NF-κB抑制劑Bay 11-7082對Poly I:C刺激16HBE表達(dá)TSLP mRNA的影響 試驗(yàn)分4組：對照組(用培養(yǎng)基替代處理因素)；Poly I:C組(加入25μg/mlPolyI：C共孵育)；Bay 11-7082 10μM組(在加入Poly I:C前1小時(shí)加入10μM Bay 11-7082共孵育)；Bay 11-7082 20μM組(在加入Poly I:C前1小時(shí)加入20μM Bay 11-7082共孵育)。 三、動物實(shí)驗(yàn) 1、40只6周齡清潔級BALB/c雌性小鼠分為5組：對照組、哮喘組、地塞米松組、羅格列酮組、替米沙坦組。 2、OVA致敏激發(fā)小鼠建立支氣管哮喘小鼠模型,同時(shí)給予不同的處理因素： 3、無創(chuàng)肺功能檢測小鼠氣道反應(yīng)性：不同濃度乙酰甲膽堿激發(fā),BUXCO無創(chuàng)肺功能檢測儀檢測Penh值。 4、處死小鼠,留取血液和支氣管肺泡灌洗液,肺泡灌洗液進(jìn)行細(xì)胞分類及計(jì)數(shù)。 5、ELISA檢測血清及肺泡灌洗液中TSLP濃度,ELISA檢測肺泡灌洗液中IL-4和INF-γ的濃度。 6、小鼠肺臟組織的取材制片、HE染色、PAS染色及病理評價(jià)； 7、小鼠肺臟組織免疫組化觀察TSLP、p65表達(dá)情況； 四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-X±s)表示。方差齊時(shí),總體均數(shù)的比較采用單向方差分析(one-way ANOVA),各組間多重比較采用LSD法和SNK法檢驗(yàn),方差不齊時(shí)總體均數(shù)的比較采用Welch法,各組間多重比較采用Dunnett's T3法檢驗(yàn)。樣本率和構(gòu)成比比較用X2檢驗(yàn)。相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)分析.以P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 一、臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1、共收集24個(gè)健康人、39個(gè)哮喘患者的合格的誘導(dǎo)痰和血液標(biāo)本。其中嗜酸性粒細(xì)胞型支氣管哮喘26例,非嗜酸性粒細(xì)胞型支氣管哮喘13例。輕度支氣管哮喘12例,中度支氣管哮喘13例,重度支氣管哮喘14例。 2、哮喘組血漿TSLP濃度(65.15±33.67pg/m1)比對照組(1.07±2.39pg/m1)顯著升高(P0.001)。哮喘組誘導(dǎo)痰TSLP濃度(17.47±21.16pg/m1)顯著高于對照組(0.28±0.81pg/m1)(P0.001)。 3、重度哮喘組血漿TSLP濃度顯著高于輕度哮喘組(P0.001),而與中度哮喘組之間無顯著差異(P=0.069)。中度哮喘組血漿TSLP顯著高于輕度哮喘組(P=0.027)。重度哮喘組誘導(dǎo)痰TSLP濃度顯著高于輕度、中度哮喘組(P=0.004,P=0.017),中度哮喘組誘導(dǎo)痰TSLP濃度與輕度哮喘組之間無顯著差異(P=0.569)。 4、嗜酸性粒細(xì)胞型哮喘組與非嗜酸性粒細(xì)胞型哮喘組相比,血漿和痰液TSLP濃度無顯著差異(P=0.602,P=0.060)。 5、哮喘患者的血漿TSLP濃度與痰液TSLP濃度成正相關(guān)(r=0.453,P=0.004)。 6、誘導(dǎo)痰TSLP濃度與FEV1絕對值、FEV1占預(yù)計(jì)值百分?jǐn)?shù)、FEV1/FVC均成負(fù)相關(guān),與FEVl占預(yù)計(jì)值百分?jǐn)?shù)相關(guān)系數(shù)最大(r=-0.504,P=0.001)。誘導(dǎo)痰TSLP濃度與ACQ5有一定的相關(guān)性(r=0.330,P=0.040)。 7、血漿TSLP濃度與白天癥狀評分呈正相關(guān)(r=0.365,P=0.022),與ACQ5、夜間癥狀評分無相關(guān)性。血漿TSLP濃度與FEV1絕對值、FEV1占預(yù)計(jì)值百分?jǐn)?shù)、FEV1/FVC均成顯著負(fù)相關(guān),與FEV1占預(yù)計(jì)值百分?jǐn)?shù)相關(guān)系數(shù)最大(r=-0.513,P=0.001)。 8血痰液TSLP濃度與痰嗜酸性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(r=0.337,P=0.036)、痰嗜酸性粒細(xì)胞總數(shù)(r=0.365,P=0.022)之間呈正相關(guān)。 二、體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1、0.1μM、1μM、5μM、10μM、20μM 5個(gè)濃度的羅格列酮、替米沙坦、GW9662對16HBE細(xì)胞活力的無顯著影響。 2、Poly I:C刺激后,隨著刺激時(shí)間的增加TSLP mRNA的表達(dá)先升高,后下降。與0h組TSLP mRNA的表達(dá)相比,Poly I:C刺激3h組的TSLP mRNA的表達(dá)最高,相當(dāng)于0h組的4.57±0.66倍,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；6h組、9h組表達(dá)仍顯著高于0h組,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,12h組、24h組TSLP mRNA的表達(dá)與0h組無顯著差異。 3、Poly I:C刺激后,與0h組相比,各時(shí)間點(diǎn)PPAR-γmRNA的表達(dá)增加并不顯著,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4、羅格列酮、替米沙坦、GW9662對正常狀態(tài)下16HBE TSLP mRNA和蛋白的無顯著影響。 5、羅格列酮干預(yù)組TSLP mRNA表達(dá)比Poly I:C組顯著降低(P0.001)。羅格列酮+GW9662干預(yù)組的TSLP mRNA表達(dá)比羅格列酮干預(yù)組顯著升高(P0.001),與Poly I:C組比較無顯著差異(P=0.205)。 6、替米沙坦干預(yù)組TSLP mRNA表達(dá)比Poly I:C組顯著降低(P0.001)。替米沙坦+GW9662干預(yù)組TSLP mRNA表達(dá)比替米沙坦干預(yù)組顯著升高(P=0.012),但是仍顯著低于Poly I:C組(P=0.012)。替米沙坦干預(yù)組TSLP mRNA表達(dá)與羅格列酮干預(yù)組比較無顯著差異(P=0.113)。 7、Poly I:C組16HBE TSLP mRNA表達(dá)與Bay 11-7082 10μM組之間無顯著差異(P=0.073)。Bay 11-7082 20μM組的TSLP mRNA表達(dá)與Poly I:C組相比顯著降低(P=0.010),提示20μM濃度的Bay 11-7082對Poly I:C刺激16HBE表達(dá)TSLP mRNA有顯著的抑制作用。Bay 11-7082 20μM組和Bay 11-7082 10μM組的TSLP mRNA表達(dá)有顯著差異(P=0.039)。 三、動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1、各組小鼠Penh%值均隨乙酰膽堿濃度的升高而增加,不同濃度之間有顯著性差異(濃度的主效應(yīng)F=161.512,P=0.000)。不同組別之間有差異(組別的主效應(yīng)F=15.769,P=0.000),哮喘組小鼠的氣道反應(yīng)性最高,明顯高于替米沙坦組、地塞米松組、羅格列酮組、對照組。不同乙酰膽堿濃度與不同組別之間存在交互效應(yīng)(F=6.503,P=0.000)。當(dāng)乙酰甲膽堿激發(fā)濃度為1.56mg/m1時(shí),哮喘組小鼠的Penh%值顯著高于羅格列酮組、對照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.030,P=0.033),與地塞米松組、替米沙坦組之間比較無顯著差異(P=0.057,P=0.127),羅格列酮組、對照組、地塞米松組、替米沙坦組四組之間無顯著差異(P0.05)。當(dāng)乙酰甲膽堿激發(fā)濃度為3.12mg/m1、6.25mg/m1、12.5mg/m1、25mg/m1時(shí),哮喘組小鼠的Penh%值顯著高于其他各組(P0.05),其他各組之間比較無顯著性差異(P0.05)。當(dāng)乙酰甲膽堿激發(fā)濃度為50mg/m1時(shí),哮喘組小鼠Penh%值顯著高于地塞米松組、羅格列酮組、對照組(P0.05),與替米沙坦組小鼠Penh%值之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.206)。替米沙坦組小鼠Penh%值顯著高于地塞米松組、羅格列酮組、對照組(P0.05),地塞米松組、羅格列酮組、對照組的Penh%值之間無顯著差異(P0.05) 2、常規(guī)HE染色哮喘組支氣管上皮增生肥厚、粘液分泌增加、管腔明顯狹窄,管壁及其周圍大量淋巴細(xì)胞浸潤,各治療組可使炎癥減輕。哮喘組氣道炎癥病理評分顯著高于其他各組(X2=1.686,P0.001),氣道炎癥評分由高到低依次是哮喘組、替米沙坦組、羅格列酮組、地塞米松組、對照組。 3、PAS染色顯示哮喘組粘液分泌增加,PAS陽性細(xì)胞數(shù)目較多,各治療組PAS陽性細(xì)胞數(shù)目比較哮喘組均有不同程度的減少,粘液分泌亦有所減少。 4、免疫組化顯示哮喘組小鼠氣道上皮細(xì)胞高表達(dá)TSLP,各治療組TSLP表達(dá)明顯降低。 5、免疫組化顯示哮喘組小鼠氣道上皮細(xì)胞高表達(dá)p65,各治療組p65表達(dá)明顯降低。 6、哮喘組小鼠的BALF細(xì)胞總數(shù)其他各組顯著升高(P0.001)。地塞米松組與替米沙坦組無顯著差異(P=0.961),但是顯著高于對照組、羅格列酮組(P=0.003,P=0.010)。替米沙坦組顯著高于對照組、羅格列酮組(P=0.004,P=0.011)。對照組、羅格列酮組BALF細(xì)胞總數(shù)無顯著差異(P=0.663)。 7、哮喘組小鼠的BALF嗜酸性粒細(xì)胞總數(shù),對比其他各組均有顯著升高(P0.05)。地塞米松組、羅格列酮組、替米沙坦組各組BALF嗜酸性粒細(xì)胞總數(shù)之間兩兩比較無顯著差異(P0.05),三組BALF嗜酸性粒細(xì)胞總數(shù)顯著高于對照組(P0.05)。 8、對照組嗜酸性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)比其他4組顯著降低(P0.05)。哮喘組顯著高于地塞米松組、羅格列酮組(P=0.035,P=0.036),與替米沙坦組之間無顯著差異(P=0.160)。地塞米松組、羅格列酮組、替米沙坦組之間無顯著差異(P0.05)。 9、哮喘組小鼠血清TSLP(35.13±5.94pg/ml)水平最高,各治療組血清TSLP水平顯著降低,對照組小鼠血清TSLP (3.36±2.71pg/ml)水平最低,顯著低于其他4組(P0.01)。 10、哮喘組小鼠灌洗液TSLP(27.84±6.08 pg/ml)水平最高,與其他各組有顯著差異(P0.01)。各治療組灌洗液TSLP水平顯著降低,對照組小鼠灌洗液TSLP(3.11±2.11pg/ml)水平最低。 11、血清TSLP值與灌洗液TSLP值進(jìn)行比值,各組比值之間未發(fā)現(xiàn)顯著差異。 12、小鼠支氣管肺泡灌洗液的IL-4濃度均數(shù)水平從高到低依次是哮喘組、替米沙坦組、羅格列酮組、地塞米松組、對照組。對照組IL-4濃度最低,與其他組有顯著差異(P0.05)。哮喘組顯著高于羅格列酮組、地塞米松組、對照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與替米沙坦組之間無顯著差異(P=0.070)。地塞米松組、羅格列酮組、替米沙坦組之間無顯著差異(P0.05) 13、小鼠支氣管肺泡灌洗液的INF-γ均數(shù)水平從高到低依次是替米沙坦組、羅格列酮組、對照組、地塞米松組、哮喘組。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示羅格列酮組顯著高于哮喘組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.036)。其他各組之間相互比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05) 結(jié)論 1、本研究首次證明了哮喘患者血漿及誘導(dǎo)痰TSLP表達(dá)明顯增加,而且與肺功能顯著負(fù)相關(guān)。隨著病情程度的增加,血漿及誘導(dǎo)痰TSLP表達(dá)明顯增加,在重度哮喘病人增加最顯著。 2、血漿中TSLP水平與誘導(dǎo)痰中TSLP水平顯著相關(guān),提示循環(huán)中TSLP水平可能作為哮喘監(jiān)控新的指標(biāo)。 3、誘導(dǎo)痰中TSLP水平與嗜酸性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及絕對計(jì)數(shù)顯著正相關(guān)。 4、隨著Poly I:C刺激時(shí)間的增加TSLP mRNA的表達(dá)先升高,后下降。3h后表達(dá)最高。25gg/m1的Poly I:C刺激并不引起PPAR-γmRNA的表達(dá)增加。 5、羅格列酮、替米沙坦、GW9662對正常狀態(tài)下16HBE TSLP mRNA和蛋白的無顯著影響。但是PPAR-γ激動劑羅格列酮、替米沙坦可以抑制Poly I:C誘導(dǎo)的16HBE TSLP基因和蛋白的表達(dá),這種抑制作用能夠被PPAR-γ拮抗劑GW9662所拮抗,提示羅格列酮、替米沙坦通過PPAR-γ通路發(fā)揮這種抑制作用。 6、NF-κB抑制劑Bay 11-7082能夠抑制Poly I:C誘導(dǎo)的16HBE TSLP基因的表達(dá),提示抑制NF-κB通路可以抑制TSLP的表達(dá)。 7、哮喘小鼠氣道上皮細(xì)胞高表達(dá)TSLP, PPAR-γ激動劑羅格列酮、替米沙坦可以抑制哮喘小鼠氣道上皮細(xì)胞TSLP的表達(dá),降低哮喘小鼠的氣道炎癥及氣道高反應(yīng)性,降低Th2型細(xì)胞因子IL-4分泌和肺泡灌洗液的嗜酸細(xì)胞數(shù)量,提示羅格列酮、替米沙坦可能通過抑制’TSLP的表達(dá)來調(diào)控哮喘氣道炎癥的。 8、PPAR-γ激動劑羅格列酮、替米沙坦可以抑制哮喘小鼠氣道上皮細(xì)胞的NF-κB活性,結(jié)合細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)提示可能通過抑制NF-κB活性來調(diào)控TSLP的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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1 涂海燕;陳新;李靜;;呼吸道合胞病毒感染誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞表達(dá)胸腺基質(zhì)淋巴生成素的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制探討[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年10期

2 夏虎;蔡紹曦;佟萬成;駱利敏;于化鵬;;呼吸道合胞病毒感染促進(jìn)哮喘小鼠氣道分泌TSLP和Th2炎癥反應(yīng)[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年04期

3 李旭;陳俊;邱建華;喬莉;淳于秀杰;林穎;;胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素在變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻黏膜中的表達(dá)[J];中國耳鼻咽喉頭頸外科;2008年09期

4 夏虎;蔡紹曦;駱利敏;于化鵬;佟萬成;;IFN-γ/IL-4對呼吸道合胞病毒感染呼吸道上皮細(xì)胞TLR3和TSLP mRNA表達(dá)的影響[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2009年10期

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本文編號：2646586