【摘要】：目的觀察硫酸鈹(BeSO_4)刺激下人肺腺癌A549細(xì)胞纖維化相關(guān)因子膠原蛋白Ⅰ、膠原蛋白Ⅲ、α-SMA mRNA及蛋白的變化,轉(zhuǎn)化生長因子-βⅡ型受體(TβRⅡ)mRNA和蛋白的變化及其DNA甲基化改變情況,探討在BeSO_4致肺纖維化過程中TβRⅡDNA甲基化的作用。通過對A549細(xì)胞進(jìn)行5-氮雜胞苷(AZC)處理進(jìn)一步驗(yàn)證TβRⅡDNA甲基化變化,通過對A549細(xì)胞進(jìn)行曲古抑菌素A(TSA)處理探討是否發(fā)生組蛋白乙酰化。探討在這兩種甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑的作用下,A549細(xì)胞中纖維相關(guān)因子和TβRⅡ的表達(dá)情況。方法實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜑殡x體A549細(xì)胞,分別以不同劑量BeSO_4處理細(xì)胞(溶劑為完全培養(yǎng)基,終濃度為1.0、10.0和100.0μmol/L,設(shè)為低、中、高劑量組),另設(shè)AZC和TSA干預(yù)組(溶劑為完全培養(yǎng)基,中劑量組硫酸鈹+10.0μmol/L AZC,中劑量組硫酸鈹+0.5μmol/L TSA)。于處理24、48和72 h后收集細(xì)胞。采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Quantitative Real-time PCR)檢測膠原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)、膠原蛋白Ⅲ(COL-Ⅲ)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和TβRⅡ的mRNA相對表達(dá)水平;利用蛋白印跡法(Western blot)檢測COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA和TβRⅡ蛋白相對表達(dá)水平;采用巢式降落式甲基化特異性PCR法檢測TβRⅡDNA甲基化水平。結(jié)果1.不同劑量BeSO_4處理A549細(xì)胞后細(xì)胞中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ和α-SMA的mRNA和蛋白相對表達(dá)水平均隨染毒劑量增加而升高的趨勢(P0.05);低、中、高劑量組COL-Ⅰ、COL-Ⅲ和α-SMA的mRNA和蛋白相對表達(dá)水平均隨染毒時間的增加而增加的趨勢(P0.05);通過對A549細(xì)胞進(jìn)行AZC和TSA干預(yù),在24、48、72 h三個時間點(diǎn)檢測,與中劑量組相比,兩組的COL-Ⅰ、COL-Ⅲ和α-SMA蛋白相對表達(dá)水平均降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);2.在24、48、72 h時間點(diǎn)上,低、中、高劑量組A549細(xì)胞TβRⅡ的mRNA和蛋白的相對表達(dá)水平均高于對照組(P0.05);通過對A549細(xì)胞進(jìn)行AZC和TSA干預(yù),在24、48、72 h三個時間點(diǎn)檢測,發(fā)現(xiàn)在48、72 h時間點(diǎn)上,與中劑量組相比,兩組的TβRⅡ蛋白相對表達(dá)水平均降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.與對照組相比,隨著染毒劑量的增加,三個劑量組中TβRⅡDNA甲基化水平均升高(P0.05);48和72 h中、高劑量組、72 h低劑量組TβRⅡDNA甲基化水平均升高(P0.05);在AZC和TSA作為BeSO_4的干預(yù)因素作用下,三個時間點(diǎn)上,BeSO_4+AZC組、BeSO_4+TSA組TβRⅡDNA甲基化水平均低于中劑量組(P0.05)。結(jié)論在BeSO_4處理下,A549細(xì)胞發(fā)生纖維化并且細(xì)胞中TβRⅡDNA甲基化程度升高,可能是BeSO_4致A549細(xì)胞纖維化發(fā)生、發(fā)展過程中重要的表觀遺傳學(xué)機(jī)制。
【圖文】：

圖 1 不同時間不同劑量 BeSO4處理 A549 細(xì)胞中 COL-Ⅰ的 mRNA 相對注：*表示與同時相對照組相比，，（*P<0.05）2 不同時間不同劑量 BeSO4處理 A549 細(xì)胞中 COL-Ⅰ的蛋白相對表達(dá)量

BeSO4處理A549細(xì)胞中COL-Ⅰ的WB條帶圖
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R563

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本文編號：2645812