【摘要】：目的觀察硫酸鈹(BeSO_4)刺激下人肺腺癌A549細胞纖維化相關因子膠原蛋白Ⅰ、膠原蛋白Ⅲ、α-SMA mRNA及蛋白的變化,轉化生長因子-βⅡ型受體(TβRⅡ)mRNA和蛋白的變化及其DNA甲基化改變情況,探討在BeSO_4致肺纖維化過程中TβRⅡDNA甲基化的作用。通過對A549細胞進行5-氮雜胞苷(AZC)處理進一步驗證TβRⅡDNA甲基化變化,通過對A549細胞進行曲古抑菌素A(TSA)處理探討是否發(fā)生組蛋白乙�；Ｌ接懺谶@兩種甲基化轉移酶抑制劑的作用下,A549細胞中纖維相關因子和TβRⅡ的表達情況。方法實驗模型為離體A549細胞,分別以不同劑量BeSO_4處理細胞(溶劑為完全培養(yǎng)基,終濃度為1.0、10.0和100.0μmol/L,設為低、中、高劑量組),另設AZC和TSA干預組(溶劑為完全培養(yǎng)基,中劑量組硫酸鈹+10.0μmol/L AZC,中劑量組硫酸鈹+0.5μmol/L TSA)。于處理24、48和72 h后收集細胞。采用熒光定量聚合酶鏈反應(Quantitative Real-time PCR)檢測膠原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)、膠原蛋白Ⅲ(COL-Ⅲ)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和TβRⅡ的mRNA相對表達水平;利用蛋白印跡法(Western blot)檢測COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA和TβRⅡ蛋白相對表達水平;采用巢式降落式甲基化特異性PCR法檢測TβRⅡDNA甲基化水平。結果1.不同劑量BeSO_4處理A549細胞后細胞中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ和α-SMA的mRNA和蛋白相對表達水平均隨染毒劑量增加而升高的趨勢(P0.05);低、中、高劑量組COL-Ⅰ、COL-Ⅲ和α-SMA的mRNA和蛋白相對表達水平均隨染毒時間的增加而增加的趨勢(P0.05);通過對A549細胞進行AZC和TSA干預,在24、48、72 h三個時間點檢測,與中劑量組相比,兩組的COL-Ⅰ、COL-Ⅲ和α-SMA蛋白相對表達水平均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);2.在24、48、72 h時間點上,低、中、高劑量組A549細胞TβRⅡ的mRNA和蛋白的相對表達水平均高于對照組(P0.05);通過對A549細胞進行AZC和TSA干預,在24、48、72 h三個時間點檢測,發(fā)現在48、72 h時間點上,與中劑量組相比,兩組的TβRⅡ蛋白相對表達水平均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.與對照組相比,隨著染毒劑量的增加,三個劑量組中TβRⅡDNA甲基化水平均升高(P0.05);48和72 h中、高劑量組、72 h低劑量組TβRⅡDNA甲基化水平均升高(P0.05);在AZC和TSA作為BeSO_4的干預因素作用下,三個時間點上,BeSO_4+AZC組、BeSO_4+TSA組TβRⅡDNA甲基化水平均低于中劑量組(P0.05)。結論在BeSO_4處理下,A549細胞發(fā)生纖維化并且細胞中TβRⅡDNA甲基化程度升高,可能是BeSO_4致A549細胞纖維化發(fā)生、發(fā)展過程中重要的表觀遺傳學機制。
【圖文】：

圖 1 不同時間不同劑量 BeSO4處理 A549 細胞中 COL-Ⅰ的 mRNA 相對注：*表示與同時相對照組相比，，（*P<0.05）2 不同時間不同劑量 BeSO4處理 A549 細胞中 COL-Ⅰ的蛋白相對表達量

BeSO4處理A549細胞中COL-Ⅰ的WB條帶圖
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R563

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 П.И.費多洛夫;張啟運;;硫酸鈹—硫酸鈉在高溫下的相互作用[J];化學學報;1957年01期

2 李尋亞;易珊;王燁;袁小燕;蔡穎;劉艷萍;張朝暉;;內源性硫化氫對硫酸鈹誘導人支氣管上皮細胞自噬的影響[J];毒理學雜志;2019年03期

3 ;鈹的毒性試驗[J];蘭州大學學報;1978年03期

4 王光俊;劉志宏;安曉丹;張曉宇;張勇;劉賀榮;朱玲勤;馬小梅;;硫酸鈹對人胚肺成纖維細胞的細胞毒性和遺傳毒性[J];癌變.畸變.突變;2009年03期

5 周慈;嚴青;張志遠;張娜;劉志宏;;硫酸鈹對人胚肺成纖維細胞凋亡相關蛋白表達的影響及枸杞多糖的作用[J];寧夏醫(yī)科大學學報;2017年09期

6 張志遠;劉志宏;安曉丹;朱玲勤;劉賀榮;張勇;王光俊;;硫酸鈹致人胚肺成纖維細胞氧化損傷及枸杞多糖的抗氧化效應[J];工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病;2012年02期

7 張朝暉;王淑娟;駱金俊;黃煉;李程;廖永紅;;硫酸鈹致小鼠肝線粒體功能障礙研究[J];中國職業(yè)醫(yī)學;2012年05期

8 張朝暉;黃煉;譚滇湘;駱金俊;李程;王淑娟;廖永紅;;小鼠腹腔注射硫酸鈹的病理形態(tài)學觀察[J];中國實驗動物學報;2012年05期

9 廖永紅;黃煉;王淑娟;胡立丹;張朝暉;;內源性硫化氫對硫酸鈹致大鼠肺組織急性損傷影響[J];中國職業(yè)醫(yī)學;2013年05期

10 駱金俊;黃煉;王淑娟;廖永紅;張朝暉;;硫酸鈹致小鼠肝毒性的實驗研究[J];毒理學雜志;2012年02期

相關會議論文 前4條

1 王和靜;王凱;周慈;張娜;劉志宏;;線粒體通透性轉換孔在硫酸鈹致人胚肺成纖維細胞凋亡中作用的研究[A];第六屆中國毒理學會免疫毒理專業(yè)委員會換屆及學術會議資料匯編[C];2016年

2 易珊;李尋亞;袁小燕;王燁;劉艷萍;蔡穎;張朝暉;;硫酸鈹致16HBE細胞miRNAs差異表達及其初步分析[A];中國毒理學會第七次全國會員代表大會暨中國毒理學會第六次中青年學者科技論壇論文摘要[C];2018年

3 張志遠;劉志宏;安曉丹;朱玲勤;劉賀榮;張勇;王光俊;;硫酸鈹致人胚肺成纖維細胞氧化損傷及枸杞多糖的抗氧化效應[A];中國活性氧生物學效應學術會議論文集（第一冊）[C];2011年

4 駱金俊;廖永紅;張朝暉;;硫酸鈹致小鼠肝毒性的實驗研究[A];全國自由基醫(yī)學與毒理學學術交流大會論文（摘要）集[C];2011年

相關碩士學位論文 前6條

1 劉科良;TβRⅡ DNA甲基化在硫酸鈹致肺纖維化中的作用研究[D];寧夏醫(yī)科大學;2019年

2 王和靜;硫酸鈹致人胚肺成纖維細胞凋亡線粒體途徑的作用機制[D];寧夏醫(yī)科大學;2017年

3 張志遠;硫酸鈹誘發(fā)人胚肺細胞凋亡機制及枸杞多糖保護作用的初步研究[D];寧夏醫(yī)科大學;2012年

4 王瑤;胸腺細胞分化抗原-1DNA甲基化在硫酸鈹致人胚肺成纖維細胞纖維化中的作用研究[D];寧夏醫(yī)科大學;2016年

5 駱金俊;硫酸鈹致小鼠肝毒性的線粒體損傷機制[D];南華大學;2012年

6 嚴青;硫酸鈹致人胚肺成纖維細胞凋亡機制的研究[D];寧夏醫(yī)科大學;2014年

本文編號：2645812