【摘要】： 前言 支氣管哮喘是一種免疫源性炎癥氣道疾病，以氣道平滑肌痙攣及漸進(jìn)性氣道高反應(yīng)為主要特點(diǎn)，其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。近年來，神經(jīng)源性炎癥越來越受到關(guān)注，但對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)與這些炎癥過程復(fù)雜的相互作用了解甚少。最近研究表明神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor，NGF)是一個(gè)重要介質(zhì)。哮喘患者血清NGF水平增高，支氣管哮喘動(dòng)物模型的研究結(jié)果顯示NGF能引起氣道高反應(yīng)，外源性NGF可引起豚鼠對(duì)組胺的氣道高反應(yīng)增加，應(yīng)用NGF抗體可大大減少哮喘引起的氣道高反應(yīng)。近年來，本室的結(jié)果證實(shí)：NGF在哮喘豚鼠下呼吸道、肺內(nèi)炎性細(xì)胞和感覺神經(jīng)節(jié)等內(nèi)臟感覺傳入部位過表達(dá)，過表達(dá)的NGF可上調(diào)相應(yīng)部位的高親和力受體酪氨酸激酶A(Tyrosine kinase A，TrkA)表達(dá)，TrkA介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)可能是NGF參與哮喘發(fā)病的主要途徑之一。 磷脂酶C(Phospholipase C，PLC)是指水解甘油磷脂的酶。甘油磷脂是構(gòu)成細(xì)胞膜的主要成分，近年來發(fā)現(xiàn)其具有第二信使庫(kù)的重要作用。自20世紀(jì)50年代發(fā)現(xiàn)PLC以來，在哺乳動(dòng)物中已鑒定出12種PLC同工酶，根據(jù)其不同的分子量和氨基酸序列(除X和Y結(jié)構(gòu)域)分為5大類：PLC-β、PLC-γ、PLC-δ、PLC-ε和新近發(fā)現(xiàn)的PLC-ζ。其中PLC-γ有PLC-γ_1和PLC-γ_22種亞型。除PLC-ζ外，其它各種PLC同工酶廣泛分布于機(jī)體各組織器官。在PLC-γ同功酶內(nèi)含一個(gè)Pleckstrin同源序列(Pleckstrin Homology，PH)，被2個(gè)SH2(Src Homology，SH)和1個(gè)SH3所分隔。 許多細(xì)胞外信息分子，如細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子受體等都與含有SH2結(jié)構(gòu)域的一系列蛋白相互作用，導(dǎo)致靶蛋白磷酸化。TrkA是NGF的高親和力受體，與PLC的SH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合使其磷酸化，磷酸化的PLC能水解磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸(phosphatidylinositol-4，5-bisphosphate，，PIP2)，產(chǎn)生兩種重要的第二信使：二脂酰甘油(diacylglycerol，DAG)和三磷酸肌醇(inositol triphosphate，IP3)，后者作用于肌漿網(wǎng)受體引起內(nèi)鈣(Ca~(2+))釋放，DAG進(jìn)一步激活蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)，發(fā)揮其催化蛋白質(zhì)磷酸化的作用。PKC在哮喘的發(fā)病中起著重要的作用，其活化引起炎性介質(zhì)的釋放。研究表明，在哮喘患者血和支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)低密度嗜酸細(xì)胞中，PKC活性顯著增強(qiáng)。 但哮喘發(fā)病時(shí)PLC在哮喘小鼠下呼吸道、C_7～T_5段脊神經(jīng)節(jié)及相應(yīng)節(jié)段脊髓后角內(nèi)表達(dá)如何?PLC是否參與TrkA介導(dǎo)的哮喘發(fā)病機(jī)制，哮喘發(fā)病過程中NGF對(duì)PLC是否有調(diào)節(jié)作用?尚無文獻(xiàn)報(bào)道。這些問題的解決，有助于我們進(jìn)一步清楚哮喘發(fā)病的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，為尋找新的治療方法提供理論依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法 1、制備哮喘模型，腹腔注射卵蛋白致敏BABL／C小鼠，霧化吸入卵蛋白激發(fā)致喘。 2、利用AniRes2005肺功能儀測(cè)BABL／C小鼠氣道阻力。 3、應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法和免疫印記法(Western blot)，觀察PLC在哮喘小鼠下呼吸道及內(nèi)臟感覺傳入部位的表達(dá)及NGF和TrkA被阻斷后PLC表達(dá)水平的變化。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1、氣道阻力檢測(cè)結(jié)果顯示：在乙酰甲膽堿(Methacholine，Mch)激發(fā)下，哮喘組較正常組小鼠氣道吸氣和呼氣阻力明顯增高(P＜0.01)，anti-NGF組和anti-TrkA組氣道吸氣和呼氣阻力均較哮喘組明顯降低(P＜0.01)。 2、免疫組織化學(xué)，Western blot結(jié)果：PLC在哮喘組小鼠肺組織、C_7-T_5段脊神經(jīng)節(jié)以及相應(yīng)節(jié)段的脊髓后角內(nèi)表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)；在anti-NGF組和anti-TrkA組，相應(yīng)部位表達(dá)明顯低于哮喘組(P＜0.01)。 結(jié)論 1、NGF介導(dǎo)的TrkA通路可能介導(dǎo)哮喘氣道高反應(yīng)。 2、PLC在哮喘小鼠肺、C_7-T_5節(jié)段脊神經(jīng)節(jié)及相應(yīng)的脊髓后角過表達(dá)，提示PLC可能是參與哮喘發(fā)病的重要信號(hào)分子，參與內(nèi)臟感覺傳入調(diào)節(jié)機(jī)制。 3、NGF和TrkA上調(diào)哮喘小鼠肺內(nèi)、C_7-T_5脊神經(jīng)節(jié)及相應(yīng)脊髓后角神經(jīng)元PLC的表達(dá)，提示NGF可通過調(diào)節(jié)肺內(nèi)及內(nèi)臟傳入部位PLC的表達(dá)參與哮喘發(fā)病過程。
【圖文】：

肺功能儀測(cè)小鼠氣道呼氣阻力值blel，valuesofexPiratoryresistancemeasured勿An沮es20OSmeter廣a一OU內(nèi)‘nU扭.二、，尸跳cmHp/功1/see///傀aasthi泊tie盯。即banti~邢Fgro即canti一rkA獷。U;Pdnormal獷。即n

本文編號(hào)：2647051