【摘要】： 背景:支氣管哮喘是由嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞等多種炎性細(xì)胞和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病。研究證實(shí),支氣管哮喘的發(fā)病與Th1/Th2失衡有著密切關(guān)系,Th2細(xì)胞活化亢進(jìn)是哮喘發(fā)病的重要機(jī)理。目前對(duì)哮喘防治重點(diǎn)已由單純抗呼吸道痙攣轉(zhuǎn)向抗炎治療,尤其如何促進(jìn)Th0型細(xì)胞向Th1轉(zhuǎn)化,抑制Th2細(xì)胞從而控制哮喘發(fā)展。現(xiàn)有資料發(fā)現(xiàn)多種轉(zhuǎn)錄因子或細(xì)胞內(nèi)信號(hào)途徑與Th細(xì)胞分化有關(guān)。其中轉(zhuǎn)錄因子GATA-3和T-bet在其中發(fā)揮著重要作用。有人認(rèn)為T(mén)-bet與GATA-3的平衡決定了T細(xì)胞在黏膜免疫的命運(yùn),決定了Th1/Th2平衡的穩(wěn)定性�？ń槊�(BCG)作為非特異性免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑,能抑制Th2型免疫反應(yīng)而上調(diào)Th1型免疫反應(yīng),減輕氣道炎癥反應(yīng)。但卡介苗是否調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子T-bet與GATA-3的平衡來(lái)減輕氣道炎癥尚未見(jiàn)報(bào)道。 目的:通過(guò)建立小鼠哮喘模型,給小鼠分別進(jìn)行預(yù)防和治療性接種BCG,觀(guān)察BCG對(duì)哮喘小鼠T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子T-bet蛋白與GATA-3蛋白表達(dá)的影響并比較預(yù)防和治療性接種的差異,探討其可能的機(jī)制。 方法:32只雄性昆明小鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組(A組),哮喘模型組(B組),BCG預(yù)防組(C組),BCG治療組(D組)。通過(guò)卵清蛋白致敏建立哮喘模型。觀(guān)察4組小鼠的一般情況;肺泡灌洗液的細(xì)胞分類(lèi);肺組織的病理切片;用免疫組化半定量分析法檢測(cè)肺組織中T-bet和GATA-3蛋白的表達(dá)。 結(jié)果: 1.BALF檢查顯示: 哮喘組(B組)與對(duì)照組(A組)比較,BALF中白細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞比例均明顯升高(P＜0.01)。BCG接種各組與哮喘組(B組)比較均能明顯降低BALF中白細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞比例(P＜0.01),接種兩組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。 2.病理檢查顯示: 病理學(xué)HE染色發(fā)現(xiàn):對(duì)照組(A組)小鼠肺內(nèi)幾乎無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn);而哮喘組(B組)小鼠肺內(nèi)可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞和浸潤(rùn),其炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度與對(duì)照組(A組)比較明顯增加(P＜0.01)。BCG接種后,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度較哮喘組(B組)明顯降低(P＜0.01),但仍然比對(duì)照組(A組)嚴(yán)重(P＜0.01)。 3.免疫組化結(jié)果顯示: 哮喘組(B組),卡介苗預(yù)防組(C組),卡介苗治療組(D組)的T-bet表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(A組),其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.01);卡介苗預(yù)防組(C組),卡介苗治療組(D組)的T-bet表達(dá)量與哮喘組(B組)比較明顯增多,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.01)�？ń槊缃臃N兩組之間的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。哮喘組(B組),卡介苗預(yù)防組(C組),卡介苗治療組(D組)的GATA-3表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(A組),其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.01);卡介苗預(yù)防組(C組),卡介苗治療組(D組)的GATA-3表達(dá)量與哮喘組(B組)比較明顯減少,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.01);卡介苗接種兩組之間的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 4.相關(guān)分析顯示 哮喘組(B組)小鼠轉(zhuǎn)錄因子T-bet蛋白表達(dá)量與氣道炎癥呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.954 P＜0.01),與肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)百分比呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.900 P＜0.01);哮喘組(B組)小鼠轉(zhuǎn)錄因子GATA-3蛋白表達(dá)量與氣道炎癥呈顯著正相關(guān)(r=0.954 P＜0.01),與肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)百分呈顯著正相關(guān)(r=0.811 P＜0.05);哮喘組(B組)小鼠轉(zhuǎn)錄因子T-bet蛋白表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄因子GATA-3蛋白表達(dá)量呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.981,P＜0.01)。 結(jié)論:1.通過(guò)OVA致敏激發(fā)成功的造成了哮喘的小鼠模型,在支氣管哮喘模型中,轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3失衡表達(dá),表現(xiàn)為T(mén)-bet低表達(dá),GATA-3高表達(dá),T-bet表達(dá)量與GATA-3表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)。T-bet和GATA-3蛋白表達(dá)量分別與氣道炎癥呈直線(xiàn)相關(guān),T-bet和GATA-3的失衡表達(dá)很可能是哮喘氣道炎癥形成的重要原因之一。2.BCG不僅能夠增加轉(zhuǎn)錄因子T-bet蛋白的表達(dá),同時(shí)能夠抑制轉(zhuǎn)錄因子GATA-3蛋白的表達(dá)。因此BCG可能通過(guò)糾正T-bet和GATA-3失衡表達(dá)來(lái)增加Th1細(xì)胞的分化,抑制Th2細(xì)胞的過(guò)度分化,調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡,從而可以減輕哮喘的氣道炎癥反應(yīng)。
【圖文】：

對(duì)照組哮喘組預(yù)防組治療組圖3四組小鼠炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分比較組(A組)比較P<0.01，#與哮喘組(B組)比較P<0.01，△與卡介苗治療組5。鼠轉(zhuǎn)錄因子卜bet蛋白表達(dá)量的變化(見(jiàn)表3，圖4，，附組(A組)，J、鼠肺組織切片T一bet免疫組化中可見(jiàn)棕黃色至棕褐色主要位于氣道上皮細(xì)胞和氣道周?chē)胺谓M織中淋巴細(xì)胞等細(xì)胞喘組(B組)小鼠肺組織切片T一bet免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量稀少，少見(jiàn)濃染現(xiàn)象，表達(dá)范圍較對(duì)照組減小，其表達(dá)量與對(duì)照組(A組S2.0肚0.14，P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。G預(yù)防組(C組)、BCG治療組歸組)小鼠肺組織切片T一bet免疫
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2645310