【摘要】： 【目的】特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是臨床上最常見的一種肺間質疾病，其發(fā)病率呈逐年增高的趨勢。IPF的起病隱襲，病情進展快，預后差，目前缺乏有效的臨床治療手段。IPF的發(fā)病機制尚不明確，成纖維細胞在疾病的發(fā)生和發(fā)展進程中起著重要的作用。在肺纖維化形成過程中有成纖維細胞的增殖加重、分泌膠原等細胞外基質增多，并且成纖維細胞和多種促炎因子之間發(fā)生復雜多樣的相互作用關系，共同參與和促進肺纖維化的形成�，F(xiàn)在研究已經證實成纖維細胞有不同的亞型，不同亞型之間的形態(tài)、對炎癥因子的反應及各自的分泌物質均有不同。根據(jù)有無Thy-1表達，可以將肺成纖維細胞分為Thy-1-／Thy-1+細胞兩種不同的亞型。已經有研究報道在肺纖維化形成過程中有Thy-1表達的減少，這一變化可能和肺纖維化的形成有重要關系。研究發(fā)現(xiàn)正常肺組織中成纖維細胞多為Thy-1+細胞，而在纖維化明顯的肺組織中則以Thy-1-成纖維細胞為主要存在形式。目前國內尚未見Thy-1表達與肺纖維化之間關系的研究；在國外，實驗多以體外培養(yǎng)的成纖維細胞為研究對象，對肺纖維化形成過程中成纖維細胞Thy-1表達的動態(tài)變化尚未見報道；并且引起Thy-1表達改變的機制目前尚不明確，在這一方面進行的研究也甚少。本實驗以博萊霉素致肺纖維化大鼠為動物模型，免疫組化法測定纖維化形成過程中成纖維細胞Thy-1及Thy-1mRNA表達率的動態(tài)變化情況；測定肺組織中羥脯胺酸的含量；同時測定肺泡灌洗液中細胞因子的含量，來觀察在纖維化形成過程成纖維細胞中Thy-1的表達趨勢及Thy-1表達率與Thy-1mRNA表達率、膠原生成量及細胞因子之間的關系，從而在成纖維細胞方面探討肺纖維化的發(fā)病機制，為進一步對IPF發(fā)病機制及治療提供新的研究方向。 【方法】1．隨機分組法將大鼠分為BLM實驗組和NS對照組，并留取空白對照。將大鼠在腹腔內麻醉下暴露頸部氣管，實驗組經氣管注／KBLM0．5 mg／0．125 ml／100 g復制大鼠肺纖維化動物模型，對照組注入相同劑量的NS；分別于用藥后的第1、3、7、14、28天兩組各隨機放血處死8只動物，留取右肺上中葉4％多聚甲醛固定包埋，備做HE、免疫組化、原位雜交；右肺下葉備做羥脯胺酸測定；左肺用PBS行肺泡灌洗，留取上清液做細胞因子測定。2．HE染色觀察組織病理學變化。3．免疫組化法觀察用藥不同時間點(第1、3、7、14、28天)大鼠肺組織的成纖維細胞表達Thy-1的情況。4．原位雜交方法測定不同時間點(第1、3、7、14、28天)Thy-1mRNA的表達情況。5．采用對二甲氨基苯甲醛法測定肺組織HYP的含量。6．小鼠胸腺細胞法測定BALF中IL-1及結晶紫法測定TNF活性。7．分析肺纖維化過程中成纖維細胞Thy-1表達與Thy-1mRNA生成、膠原分泌及細胞因子之間的關系。8．采用SPSS11．5醫(yī)學統(tǒng)計軟件，變量以均數(shù)±標準差((?)(?)SD)表示，各組間均數(shù)的比較采用隨機區(qū)組方差分析，兩因素間相關分析采用直線相關；以P0．05為有統(tǒng)計學意義。 【結果】1．NS對照組在用藥第1、3天可見輕度反應性炎癥出現(xiàn)，肺泡內輕度炎性細胞滲出，肺泡間隔無水腫，無纖維細胞增生及纖維化形成；炎癥于第7天時已完全消失。BLM組注藥第1、3天以炎性反應為主，肺泡腔內有炎性細胞滲出，肺泡間隔可見輕度水腫；第7天肺泡間隔可見成纖維細胞增生，纖維化開始出現(xiàn)；第14天肺泡壁增厚，成纖維細胞增生明顯，基質明顯增多，可見膠原纖維積聚，肺泡結構破壞，出現(xiàn)斑片狀纖維化；第28天肺泡壁顯著增厚，肺泡結構破壞，一部分肺泡腔受壓變小或消失，形成嚴重纖維化，模型建立成功。2．正常肺組織間隔中大多成纖維細胞Thy-1表達陽性，陽性率為88．01±4．12％；BLM實驗組肺間隔成纖維細胞Thy-1表達自第7天開始明顯減少，并呈進行性下降，第28天時達最低谷，尤其成纖維細胞灶中缺乏Thy-1著色(P0．05)。3．成纖維細胞Thy-1mRNA表達率在BLM實驗組各用藥時間點無明顯下降趨勢，無統(tǒng)計學意義(P0．05)；在以Thy-1-表達為主的成纖維細胞灶中仍可見Thy-1mRNA著色。4．肺組織勻漿中HYP從第7天開始呈持續(xù)升高。5．BALF中IL-1測定量在各時間點無明顯差別；TNF自第3天開始升高，第7天達高峰，之后開始有所下降，，但仍維持在較高水平。6．成纖維細胞Thy-1表達率與肺組織HYP生成量之間具有負相關性，相關系數(shù)為r=-0．921；Thy-1表達率與Thy-1mRNA表達率之間無顯著相關性(P0．05)；Thy-1表達率與IL-1、TNF-α水平之間未發(fā)現(xiàn)顯著相關性(P0．05)。 【討論】肺間質疾病共同病理學特點是肺間質中成纖維細胞增殖聚集、膠原等細胞外基質大量沉積。成纖維細胞是細胞外基質的主要來源細胞，它能被多種促炎因子激活，活化的成纖維細胞能夠合成大量的膠原，釋放多種細胞因子，加速和促進纖維化的進程。不同Thy-1表達對成纖維細胞的生物學特性具有重要意義，Thy-1-成纖維細胞表現(xiàn)出較強的細胞活性，能夠在促炎因子作用下增殖加快、分泌膠原增多，同時能釋放出多種細胞因子進一步促進肺纖維化的形成；Thy-1+細胞則是一種處于相對靜止狀態(tài)的細胞，對細胞因子的作用反應及釋放細胞外基質的能力均較弱。 本實驗結果示Thy-1在正常肺組織中表達率高，在肺纖維化的形成過程中Thy-1表達逐漸減少，在纖維化明顯的部位尤其是纖維灶中Thy-1表達少見，即肺纖維化過程中Thy-1-成纖維細胞比例逐漸增高。這種表達的變化與肺間質中膠原的含量有密切關系。在肺纖維化進程中，膠原含量成逐漸增加的變化，升高從第7天開始明顯，到測定的第28天增加程度達高峰，這與Thy-1表達成負相關，結果提示Thy-1-成纖維細胞是主要的膠原來源細胞。 國外進行的體外實驗報道，IL-1、TNF、TGF等細胞因子與Thy-1的表達減少有關系。本實驗通過測定BALF中IL-1及TNF-α在肺纖維化過程中的變化，發(fā)現(xiàn)其與Thy-1表達之間無明顯相關性，考慮在體內Thy-1表達的改變是一種多因素作用的結果，除上細胞因子IL-1 TNF-α外，還有其他多種因素參與此過程。 Thy-1在肺纖維化進程中表達減少的機制目前還不明確，并且此方面的研究進行甚少。本實驗同時測定了Thy-1mRNA在成纖維細胞的表達情況，發(fā)現(xiàn)隨Thy-1表達減少并無Thy-1mRNA的相應降低，提示Thy-1減少不是發(fā)生在mRNA水平上。體外研究發(fā)現(xiàn)，Thy-1能從細胞表面脫落，以可溶的形式出現(xiàn)在相應的細胞培養(yǎng)液中，這提示我們肺成纖維細胞的Thy-1表達減少可能是多種原因導致的蛋白脫落而造成的。測定肺泡灌洗液中Thy-1的變化將是我們下一步工作的一個方向，這將對于解釋Thy-1的變化機制有重要意義。 [結論]在正常肺組織成纖維細胞表達Thy-1+，在肺纖維化形成過程中成纖維細胞表達Thy-1呈進行性減少，在肺纖維化明顯的區(qū)域成纖維細胞表達Thy-1-為主；Thy-1表達減少與Thy-1mRNA合成減少關系不大；Thy-1表達率與膠原合成之間存在負相關，Thy-1-成纖維細胞是主要膠原合成細胞；Thy-1減少與IL-1、TNF無明顯相關性，可能是一個綜合因素作用的結果。
【學位授予單位】：濱州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R563.9

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;Hepatocyte differentiation of human fibroblasts from cirrhotic liver in vitro and in vivo[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2011年01期

2 張曉榮;呂長俊;王曉芝;崔劍;高福泉;郝東;王濤;李洪波;;Thy-1及Thy-1mRNA在肺纖維化大鼠肺組織中的表達及相關性研究[J];中國病理生理雜志;2009年08期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 曾俐琴;THY1基因在卵巢癌中的表達及其對卵巢癌細胞生長的影響[D];四川大學;2007年

2 孫玉嶺;乙肝相關性肝病肝臟內干細胞樣細胞的特性和定向分化[D];浙江大學;2008年

3 李略;人羊膜間充質干細胞向視網膜神經元樣細胞誘導分化及其鈉離子通道電生理特性的實驗研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2008年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 姚琴;肺成纖維細胞表面Thy-1的表達和表觀遺傳藥物影響下的增殖和分化[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2009年

本文編號：2631781