【摘要】： 【目的】特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是臨床上最常見的一種肺間質(zhì)疾病，其發(fā)病率呈逐年增高的趨勢。IPF的起病隱襲，病情進(jìn)展快，預(yù)后差，目前缺乏有效的臨床治療手段。IPF的發(fā)病機(jī)制尚不明確，成纖維細(xì)胞在疾病的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程中起著重要的作用。在肺纖維化形成過程中有成纖維細(xì)胞的增殖加重、分泌膠原等細(xì)胞外基質(zhì)增多，并且成纖維細(xì)胞和多種促炎因子之間發(fā)生復(fù)雜多樣的相互作用關(guān)系，共同參與和促進(jìn)肺纖維化的形成�，F(xiàn)在研究已經(jīng)證實(shí)成纖維細(xì)胞有不同的亞型，不同亞型之間的形態(tài)、對炎癥因子的反應(yīng)及各自的分泌物質(zhì)均有不同。根據(jù)有無Thy-1表達(dá)，可以將肺成纖維細(xì)胞分為Thy-1-／Thy-1+細(xì)胞兩種不同的亞型。已經(jīng)有研究報(bào)道在肺纖維化形成過程中有Thy-1表達(dá)的減少，這一變化可能和肺纖維化的形成有重要關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)正常肺組織中成纖維細(xì)胞多為Thy-1+細(xì)胞，而在纖維化明顯的肺組織中則以Thy-1-成纖維細(xì)胞為主要存在形式。目前國內(nèi)尚未見Thy-1表達(dá)與肺纖維化之間關(guān)系的研究；在國外，實(shí)驗(yàn)多以體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞為研究對象，對肺纖維化形成過程中成纖維細(xì)胞Thy-1表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化尚未見報(bào)道；并且引起Thy-1表達(dá)改變的機(jī)制目前尚不明確，在這一方面進(jìn)行的研究也甚少。本實(shí)驗(yàn)以博萊霉素致肺纖維化大鼠為動(dòng)物模型，免疫組化法測定纖維化形成過程中成纖維細(xì)胞Thy-1及Thy-1mRNA表達(dá)率的動(dòng)態(tài)變化情況；測定肺組織中羥脯胺酸的含量；同時(shí)測定肺泡灌洗液中細(xì)胞因子的含量，來觀察在纖維化形成過程成纖維細(xì)胞中Thy-1的表達(dá)趨勢及Thy-1表達(dá)率與Thy-1mRNA表達(dá)率、膠原生成量及細(xì)胞因子之間的關(guān)系，從而在成纖維細(xì)胞方面探討肺纖維化的發(fā)病機(jī)制，為進(jìn)一步對IPF發(fā)病機(jī)制及治療提供新的研究方向。 【方法】1．隨機(jī)分組法將大鼠分為BLM實(shí)驗(yàn)組和NS對照組，并留取空白對照。將大鼠在腹腔內(nèi)麻醉下暴露頸部氣管，實(shí)驗(yàn)組經(jīng)氣管注／KBLM0．5 mg／0．125 ml／100 g復(fù)制大鼠肺纖維化動(dòng)物模型，對照組注入相同劑量的NS；分別于用藥后的第1、3、7、14、28天兩組各隨機(jī)放血處死8只動(dòng)物，留取右肺上中葉4％多聚甲醛固定包埋，備做HE、免疫組化、原位雜交；右肺下葉備做羥脯胺酸測定；左肺用PBS行肺泡灌洗，留取上清液做細(xì)胞因子測定。2．HE染色觀察組織病理學(xué)變化。3．免疫組化法觀察用藥不同時(shí)間點(diǎn)(第1、3、7、14、28天)大鼠肺組織的成纖維細(xì)胞表達(dá)Thy-1的情況。4．原位雜交方法測定不同時(shí)間點(diǎn)(第1、3、7、14、28天)Thy-1mRNA的表達(dá)情況。5．采用對二甲氨基苯甲醛法測定肺組織HYP的含量。6．小鼠胸腺細(xì)胞法測定BALF中IL-1及結(jié)晶紫法測定TNF活性。7．分析肺纖維化過程中成纖維細(xì)胞Thy-1表達(dá)與Thy-1mRNA生成、膠原分泌及細(xì)胞因子之間的關(guān)系。8．采用SPSS11．5醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件，變量以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)(?)SD)表示，各組間均數(shù)的比較采用隨機(jī)區(qū)組方差分析，兩因素間相關(guān)分析采用直線相關(guān)；以P0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 【結(jié)果】1．NS對照組在用藥第1、3天可見輕度反應(yīng)性炎癥出現(xiàn)，肺泡內(nèi)輕度炎性細(xì)胞滲出，肺泡間隔無水腫，無纖維細(xì)胞增生及纖維化形成；炎癥于第7天時(shí)已完全消失。BLM組注藥第1、3天以炎性反應(yīng)為主，肺泡腔內(nèi)有炎性細(xì)胞滲出，肺泡間隔可見輕度水腫；第7天肺泡間隔可見成纖維細(xì)胞增生，纖維化開始出現(xiàn)；第14天肺泡壁增厚，成纖維細(xì)胞增生明顯，基質(zhì)明顯增多，可見膠原纖維積聚，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，出現(xiàn)斑片狀纖維化；第28天肺泡壁顯著增厚，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，一部分肺泡腔受壓變小或消失，形成嚴(yán)重纖維化，模型建立成功。2．正常肺組織間隔中大多成纖維細(xì)胞Thy-1表達(dá)陽性，陽性率為88．01±4．12％；BLM實(shí)驗(yàn)組肺間隔成纖維細(xì)胞Thy-1表達(dá)自第7天開始明顯減少，并呈進(jìn)行性下降，第28天時(shí)達(dá)最低谷，尤其成纖維細(xì)胞灶中缺乏Thy-1著色(P0．05)。3．成纖維細(xì)胞Thy-1mRNA表達(dá)率在BLM實(shí)驗(yàn)組各用藥時(shí)間點(diǎn)無明顯下降趨勢，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0．05)；在以Thy-1-表達(dá)為主的成纖維細(xì)胞灶中仍可見Thy-1mRNA著色。4．肺組織勻漿中HYP從第7天開始呈持續(xù)升高。5．BALF中IL-1測定量在各時(shí)間點(diǎn)無明顯差別；TNF自第3天開始升高，第7天達(dá)高峰，之后開始有所下降，，但仍維持在較高水平。6．成纖維細(xì)胞Thy-1表達(dá)率與肺組織HYP生成量之間具有負(fù)相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為r=-0．921；Thy-1表達(dá)率與Thy-1mRNA表達(dá)率之間無顯著相關(guān)性(P0．05)；Thy-1表達(dá)率與IL-1、TNF-α水平之間未發(fā)現(xiàn)顯著相關(guān)性(P0．05)。 【討論】肺間質(zhì)疾病共同病理學(xué)特點(diǎn)是肺間質(zhì)中成纖維細(xì)胞增殖聚集、膠原等細(xì)胞外基質(zhì)大量沉積。成纖維細(xì)胞是細(xì)胞外基質(zhì)的主要來源細(xì)胞，它能被多種促炎因子激活，活化的成纖維細(xì)胞能夠合成大量的膠原，釋放多種細(xì)胞因子，加速和促進(jìn)纖維化的進(jìn)程。不同Thy-1表達(dá)對成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性具有重要意義，Thy-1-成纖維細(xì)胞表現(xiàn)出較強(qiáng)的細(xì)胞活性，能夠在促炎因子作用下增殖加快、分泌膠原增多，同時(shí)能釋放出多種細(xì)胞因子進(jìn)一步促進(jìn)肺纖維化的形成；Thy-1+細(xì)胞則是一種處于相對靜止?fàn)顟B(tài)的細(xì)胞，對細(xì)胞因子的作用反應(yīng)及釋放細(xì)胞外基質(zhì)的能力均較弱。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果示Thy-1在正常肺組織中表達(dá)率高，在肺纖維化的形成過程中Thy-1表達(dá)逐漸減少，在纖維化明顯的部位尤其是纖維灶中Thy-1表達(dá)少見，即肺纖維化過程中Thy-1-成纖維細(xì)胞比例逐漸增高。這種表達(dá)的變化與肺間質(zhì)中膠原的含量有密切關(guān)系。在肺纖維化進(jìn)程中，膠原含量成逐漸增加的變化，升高從第7天開始明顯，到測定的第28天增加程度達(dá)高峰，這與Thy-1表達(dá)成負(fù)相關(guān)，結(jié)果提示Thy-1-成纖維細(xì)胞是主要的膠原來源細(xì)胞。 國外進(jìn)行的體外實(shí)驗(yàn)報(bào)道，IL-1、TNF、TGF等細(xì)胞因子與Thy-1的表達(dá)減少有關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)通過測定BALF中IL-1及TNF-α在肺纖維化過程中的變化，發(fā)現(xiàn)其與Thy-1表達(dá)之間無明顯相關(guān)性，考慮在體內(nèi)Thy-1表達(dá)的改變是一種多因素作用的結(jié)果，除上細(xì)胞因子IL-1 TNF-α外，還有其他多種因素參與此過程。 Thy-1在肺纖維化進(jìn)程中表達(dá)減少的機(jī)制目前還不明確，并且此方面的研究進(jìn)行甚少。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)測定了Thy-1mRNA在成纖維細(xì)胞的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)隨Thy-1表達(dá)減少并無Thy-1mRNA的相應(yīng)降低，提示Thy-1減少不是發(fā)生在mRNA水平上。體外研究發(fā)現(xiàn)，Thy-1能從細(xì)胞表面脫落，以可溶的形式出現(xiàn)在相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液中，這提示我們肺成纖維細(xì)胞的Thy-1表達(dá)減少可能是多種原因?qū)е碌牡鞍酌撀涠斐傻�。測定肺泡灌洗液中Thy-1的變化將是我們下一步工作的一個(gè)方向，這將對于解釋Thy-1的變化機(jī)制有重要意義。 [結(jié)論]在正常肺組織成纖維細(xì)胞表達(dá)Thy-1+，在肺纖維化形成過程中成纖維細(xì)胞表達(dá)Thy-1呈進(jìn)行性減少，在肺纖維化明顯的區(qū)域成纖維細(xì)胞表達(dá)Thy-1-為主；Thy-1表達(dá)減少與Thy-1mRNA合成減少關(guān)系不大；Thy-1表達(dá)率與膠原合成之間存在負(fù)相關(guān)，Thy-1-成纖維細(xì)胞是主要膠原合成細(xì)胞；Thy-1減少與IL-1、TNF無明顯相關(guān)性，可能是一個(gè)綜合因素作用的結(jié)果。
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R563.9

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

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2 張曉榮;呂長俊;王曉芝;崔劍;高福泉;郝東;王濤;李洪波;;Thy-1及Thy-1mRNA在肺纖維化大鼠肺組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究[J];中國病理生理雜志;2009年08期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 曾俐琴;THY1基因在卵巢癌中的表達(dá)及其對卵巢癌細(xì)胞生長的影響[D];四川大學(xué);2007年

2 孫玉嶺;乙肝相關(guān)性肝病肝臟內(nèi)干細(xì)胞樣細(xì)胞的特性和定向分化[D];浙江大學(xué);2008年

3 李略;人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向視網(wǎng)膜神經(jīng)元樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化及其鈉離子通道電生理特性的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 姚琴;肺成纖維細(xì)胞表面Thy-1的表達(dá)和表觀遺傳藥物影響下的增殖和分化[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2631781