【摘要】：目的:慢性阻塞性肺疾病(COPD),是目前已知的與吸煙明確相關(guān)的呼吸系統(tǒng)慢性炎癥性疾病。在慢性氣道疾病的基礎(chǔ)研究中,使用長(zhǎng)期被動(dòng)熏煙方式制備的大鼠模型更接近臨床真實(shí)世界,逐漸被認(rèn)可,且有科學(xué)研究發(fā)表。COPD的病理生理機(jī)制包括有氣道慢性炎癥、黏液高分泌、氧化應(yīng)激、氣道平滑肌收縮和重塑等多個(gè)環(huán)節(jié),其中黏液纖毛清除(MCC)功能受損被認(rèn)為是COPD等慢性呼吸系統(tǒng)疾病的主要病理變化。隨著對(duì)MCC功能研究的深入,黏液調(diào)節(jié)劑在COPD患者臨床應(yīng)用中的作用被逐漸得到重視,循證學(xué)研究證實(shí),在穩(wěn)定期COPD患者中長(zhǎng)期應(yīng)用黏液調(diào)節(jié)劑有助于減少急性加重事件的發(fā)生。因此,作為黏液調(diào)節(jié)劑的代表藥物,標(biāo)準(zhǔn)桃金娘油(吉諾通)等桉油精相關(guān)制劑目前被廣泛應(yīng)用于臨床。然而,標(biāo)準(zhǔn)桃金娘油為桉油精、檸檬烯和α蒎烯的復(fù)合制劑,目前尚無(wú)對(duì)比其主要成分桉油精的單一作用與合劑作用的相關(guān)研究。而且,有關(guān)桉油精制劑的研究多集中于臨床,前期臨床研究指出其有助于減少氣道痰液分泌、減輕炎癥水平,但具體作用機(jī)制尚不明確。鑒于以上原因,本研究選用目前臨床常用的人工合成制劑桉檸派(主要成分為桉油精、α蒎烯及檸檬烯,成分及比例與標(biāo)準(zhǔn)桃金娘油相近)與其主要成分桉油精,比較兩種藥物在慢性煙熏大鼠模型中的作用,探討其對(duì)氣道MCC功能的影響及潛在炎癥機(jī)制。方法:1、桉檸蒎與桉油精對(duì)煙熏大鼠氣道MCC功能的研究參考文獻(xiàn)通過(guò)連續(xù)熏煙12周法建立煙熏大鼠模型,并對(duì)比加用桉檸蒎及桉油精干預(yù)治療后各組大鼠大體形態(tài)、肺HE結(jié)構(gòu)、氣道細(xì)菌負(fù)荷量、接種流感嗜血桿菌(NTHi)后氣道對(duì)細(xì)菌的清除能力、透射電鏡下微觀結(jié)構(gòu)變化、杯狀細(xì)胞分泌情況、粘蛋白MUC5AC分泌及表達(dá)情況。將大鼠分組為正常對(duì)照組、單純熏煙組、熏煙+桉檸蒎干預(yù)組、熏煙+桉油精干預(yù)組、熏煙+甘油干預(yù)組,其中甘油為桉檸蒎與桉油精的溶劑。2、桉檸蒎與桉油精對(duì)煙熏大鼠氣道炎癥機(jī)制的的研究進(jìn)一步比較兩種藥物在煙熏大鼠氣道中炎癥方面的作用,并探討其機(jī)制。對(duì)各組大鼠肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞分類及炎癥因子(TNF-α、IL-6、ICAM-1)水平進(jìn)行比較,,進(jìn)一步檢測(cè)p38MAPK及p-p38MAPK蛋白水平,結(jié)合MUC5AC表達(dá)水平,評(píng)價(jià)各項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性,探討是否桉檸蒎及桉油精對(duì)炎癥介質(zhì)的影響與p38MAPK磷酸化有關(guān)。采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù),計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述。兩組間比較采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析(方差齊性用LSD及S-N-K檢驗(yàn),方差不齊采用Tamhane’s T2分析),相關(guān)性比較采用Pearson相關(guān)分析。P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.01差異顯著。結(jié)果:1、桉檸蒎與桉油精對(duì)煙熏大鼠氣道MCC功能的研究煙熏大鼠表現(xiàn)為一般狀態(tài)的改變及體重下降,肺功能及病理結(jié)構(gòu)的變化與臨床慢性阻塞性肺疾病患者肺功能及病理變化相符,提示模型制備成功。較正常對(duì)照組相比,單純熏煙組模型氣道內(nèi)提示細(xì)菌負(fù)荷量增加,且對(duì)NTHi的清除能力下降;透射電鏡顯示存在氣道上皮纖毛缺失脫落以及細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞器的嚴(yán)重?fù)p傷,提示纖毛功能受損,并提示杯狀細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞;AB-PAS染色結(jié)果顯示,氣道上皮杯狀細(xì)胞分泌粘多糖的成分發(fā)生了變化,提示分泌粘液的性質(zhì)受到影響;免疫組化和PCR結(jié)果顯示,氣道內(nèi)MUC5AC表達(dá)量增多。桉檸蒎干預(yù)組大鼠病理結(jié)構(gòu)較單純熏煙組有一定改善,但與正常對(duì)照組相比仍有明顯結(jié)構(gòu)改變。與單純熏煙組大鼠相比,桉檸蒎干預(yù)組大鼠氣道內(nèi)細(xì)菌負(fù)荷量減少,感染后氣道內(nèi)細(xì)菌清除加快;透射電鏡顯示氣道上皮纖毛外形結(jié)構(gòu)保存相對(duì)完整,提示藥物干預(yù)對(duì)纖毛起一定保護(hù)作用,但對(duì)損傷的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器改善不明顯。桉檸蒎與桉油精通過(guò)對(duì)黏液分泌的影響具有同等作用,均通過(guò)調(diào)節(jié)氣道上皮杯狀細(xì)胞中酸性粘多糖分泌,進(jìn)而影響?zhàn)ひ盒再|(zhì),同時(shí)降低氣道MUC5AC表達(dá)水平。桉油精與桉檸蒎治療效果相近,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。甘油作為藥物對(duì)照對(duì)各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)無(wú)影響。2、桉檸蒎與桉油精對(duì)煙熏大鼠氣道炎癥機(jī)制的的研究研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)桉油精相關(guān)制劑其有抗炎作用,其炎癥指標(biāo)改善水平與粘蛋白改善水平明顯相關(guān)。與正常對(duì)照模型相比,單純熏煙組肺泡灌洗液檢測(cè)發(fā)現(xiàn)炎性細(xì)胞增多,炎性因子(TNF-α、IL-6與ICAM-1)表達(dá)增多,同時(shí)伴有p38MAPK及p-p38MAPK蛋白水平增高。加用研究藥物干預(yù)可減少煙熏大鼠BALF中中性粒細(xì)胞比例,減少氣道分泌MUC5AC的同時(shí)也降低TNF-α、IL-6與ICAM-1水平,p38MAPK和p-p38MAPK表達(dá)明顯下降,其中p-p38MAPK下降程度更明顯,提示可能存在p38MAPK去磷酸化。桉油精與桉檸蒎治療效果相近,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:1、桉檸蒎可減輕煙熏大鼠氣道內(nèi)細(xì)菌負(fù)荷,通過(guò)改善氣道黏液纖毛清除功能增加對(duì)細(xì)菌的清除能力,主要表現(xiàn)在對(duì)氣道上皮纖毛結(jié)構(gòu)的保護(hù)及杯狀細(xì)胞分泌酸性粘多糖比例、分泌粘蛋白MUC5AC水平的調(diào)節(jié)。2、在桉檸蒎調(diào)節(jié)黏液纖毛清除功能的同時(shí)存在炎癥介質(zhì)參與,表現(xiàn)為IL-6、TNF-α、ICAM-1等炎癥指標(biāo)下調(diào)及磷酸化p38MAPK比例下降,誘導(dǎo)p38MAPK去磷酸化可能是桉檸蒎調(diào)節(jié)粘蛋白分泌及抗炎作用的共同機(jī)制之一,其中桉油精起主要作用。
【圖文】：

表 1：各組大鼠肺組織形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)組別 MLI（um） 平均肺泡數(shù)（/nm2）正常對(duì)照組 29.09±5.50 325.42±49.45單純熏煙組 82.47±9.51* 125.48±18.35#桉檸蒎干預(yù)組 41.95±6.47**,& 209.74±32.60##,&&桉油精干預(yù)組 43.68±6.09 224.86±40.81甘油干預(yù)組 77.56±9.77 133.54±22.32如表 1 所示，與正常對(duì)照組相比，單純熏煙組 MLI 明顯增加，MAN 明顯下降，差異顯著（*P，#P<0.01），加用桉檸蒎干預(yù)后可明顯降低 MLI，增加 MAN（與單純熏煙組相比&P，&&P<0.01），但較正常對(duì)照組相比仍存在明顯的結(jié)構(gòu)破壞，即 MLI增加，MAN 下降（**P<0.05, ##P<0.01）。桉油精與桉檸蒎兩組間 MLI 與 MAN 指標(biāo)無(wú)明顯差異，甘油對(duì)照與單純熏煙組間無(wú)明顯差異，，形態(tài)相近。

各組大鼠肺勻漿
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R563.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2630320