【摘要】： 目的 支氣管哮喘是一種由多種細胞,包括炎性細胞(嗜酸性粒細胞、肥大細胞、T淋巴細胞、中性粒細胞和肺泡巨噬細胞等)、氣道結(jié)構(gòu)細胞(氣道平滑肌細胞和上皮細胞等)和細胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病。雖然已開展了較多關(guān)于哮喘的研究與治療工作,但由于哮喘的發(fā)病機制始終未得到完全闡明,因此,目前哮喘仍是無法治愈的疾病之一。 肺泡巨噬細胞(alveolar macrophage,AM)是定居在肺泡和氣道表面的重要免疫效應(yīng)細胞,可以激活炎癥反應(yīng)消除入侵者。但是,過度的炎癥反應(yīng)可以干擾氣體交換。這就意味著AM有兩方面相反的作用-即保護機體免受侵害和增強炎癥反應(yīng)的作用。有研究顯示,AM占支氣管肺泡灌洗液(bronchus alveolar lavage fluid,BALF)中細胞總數(shù)的90%以上,但其在哮喘發(fā)病中的作用至今不是十分清楚。本實驗研究哮喘大鼠AM鉀通道活性的變化情況及其生成各種炎癥因子的變化從而分析AM在哮喘時功能狀態(tài)的變化及其可能的調(diào)控機制。 實驗方法 首先利用卵蛋白(ovialbumin,OVA)致敏并激發(fā)大鼠建立哮喘模型,對照組則用生理鹽水代替;HE染色觀察哮喘大鼠的病理學(xué)變化情況;末次激發(fā)后24小時將大鼠麻醉,進行氣管插管,用冷的PBS進行支氣管肺泡灌洗,每次10ml,重復(fù)五次,收集BALF,回收率可達90%以上,分離并培養(yǎng)AM。利用全細胞電壓鉗模式記錄AM細胞膜上的電壓依賴性鉀通道(Voltage-dependent potassium channel,K_v)電流,觀察比較哮喘模型組和對照組K_v通道活性的變化;兩組細胞在利用LPS(5ug/ml)處理12小時前后,通過RT-PCR及Western blot方法檢測肺泡巨噬細胞中IL-6和TNF-α的轉(zhuǎn)錄及表達水平;利用大鼠ELISA檢測試劑盒檢測LPS(5ug/ml)處理12小時前后肺泡巨噬細胞培養(yǎng)上清液中IL-6和TNF-α的分泌水平。 實驗結(jié)果 1、AM細胞膜Kv電流變化:病理學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)哮喘模型組炎癥細胞浸潤明顯增加,有大量紅細胞滲出,氣道平滑肌明顯增厚,管腔內(nèi)可見粘液栓;哮喘大鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)細胞總數(shù)顯著增高,與對照組比較差異顯著(P＜0.01),但AM百分比無明顯差異(P＞0.05);應(yīng)用Kv通道特異性阻斷劑4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)后電流幅度明顯降低,證實檢測到的AM細胞膜上的電流為Kv電流;哮喘大鼠AM細胞Kv電流密度為[(32.65±18.82)pA/pF,n=11]較對照組[(87.57±33.14)pA/pF,n=11]明顯降低(P＜0.01)。 2、AM分泌IL-6、TNF-α等細胞因子的變化:LPS處理前后哮喘組AM轉(zhuǎn)錄、表達IL-6和TNF-α的水平與對照組相比均明顯增高(P＜0.05);LPS處理之前哮喘組AM分泌IL-6和TNF-α水平與對照組相比顯著增高(P＜0.01),LPS處理可使哮喘組與對照組的AM分泌IL-6和TNF-α水平均明顯增高(P＜0.01),但使對照組AM分泌IL-6和TNF-α的水平升高更為明顯,從而使哮喘組AM分泌IL-6和TNF-α水平與對照組無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論 1、哮喘大鼠AM細胞膜上Kv通道電流密度降低,活性減小。 2、哮喘大鼠AM分泌TNF-α、IL-6水平顯著增高,LPS處理使AM分泌TNF-α、IL-6作用增強,但對正常AM作用更為明顯。
【圖文】：

AM細胞膜上Kv電流的鑒定

4、哮喘大鼠AM細胞膜上Kv電流的變化哮喘模型組AM細胞Kv電流峰值明顯低于對照組(見圖3)。 +5omV時方波刺激所得的模型組Kv電流密度(見圖3A)[(32.65士 18.82)pA/pF，n=川較對照組(見圖3B)〔 (87.57士33.14)p刀pF，n一川明顯降低(P<0.01);其電流電壓之間的關(guān)系(見圖3C)所示。B+somv~羹啊匕5腸ms1(pA)V(mV)I一V曲夔戈圖3，大鼠AM細胞膜Kv電流的比較(mean士SD，n=11)A:正常對照組大鼠AM細胞膜上的Kv電流實測圖;B:哮喘組大鼠AM細胞膜上的Kv電流實測圖;C兩組大鼠AM細胞膜上相應(yīng)的Kv電流一電壓曲線。5、LPs處理前后TNF一a的轉(zhuǎn)錄水平變化對照組AM用LPS激活前TNF一a轉(zhuǎn)錄水平為(0.17士0.04)與LPS處理之后的(0.64士0.32)相比，差異具有顯著性(P<0.05，，n二5)。模型組AM用LPS處理后其TNF一a的轉(zhuǎn)錄水平由 (0.58士0.20)增加到 (l.02士0.10)，具有顯著性差異(尸<0.05
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R562.25

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 薛宏峰;;支氣管哮喘患兒治療前后血清GM-CSF、IL-8和IL-6聯(lián)檢的臨床意義[J];放射免疫學(xué)雜志;2006年06期

2 李立文;粒細胞巨噬細胞集落刺激因子與哮喘非特異性炎癥[J];國外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊;1994年01期

3 李霞;劉榮玉;;嗜酸性粒細胞、氣道上皮細胞、糖皮質(zhì)激素與支氣管哮喘的研究進展[J];國外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊);2007年03期

4 溫志紅,尹瑛;一氧化氮及一氧化氮合酶在哮喘發(fā)病機制中的作用[J];廣西醫(yī)學(xué);2000年04期

5 謝慶玲,焦偉,溫志紅,黃小芳;哮喘患兒血清腫瘤壞死因子α測定[J];廣西醫(yī)學(xué);1998年01期

6 張晶,韓守信,崔鳳,呂立波;IL-8 IL-17與支氣管哮喘發(fā)病關(guān)系的研究[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2004年04期

7 李文軍,李二紅,楊宗城;巨噬細胞在炎癥消散中的作用[J];免疫學(xué)雜志;2000年S1期

8 孫春曉,何榮根,陳詩書;IL—7的生物學(xué)作用[J];上海免疫學(xué)雜志;1998年02期

9 陳友琴,何杰,鄭雪蓮,毛詠秋;支氣管哮喘患者粘附分子和細胞因子的變化及其意義[J];中國醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志;2002年02期

10 劉先勝,徐永健,楊丹蕾,熊維寧;慢性阻塞性肺疾病大鼠肺泡巨噬細胞延遲整流鉀通道的活性研究[J];中國病理生理雜志;2005年09期

本文編號：2629268