【摘要】： 背景:肺纖維化是許多病因不同的肺間質(zhì)疾病的共同結(jié)局,包括特發(fā)性肺纖維化(IPF)、塵肺、過敏性肺炎、藥物和放射線導(dǎo)致的纖維化及與膠原血管病有關(guān)的致纖維化肺泡炎等。IPF是一種原因不明、主要以持續(xù)性肺損傷、進(jìn)展性纖維化、肺泡結(jié)構(gòu)扭曲,功能喪失為特征的疾病。組織病理學(xué)改變?yōu)槠胀ㄐ烷g質(zhì)性肺炎(UIP),即病變不均一性,正常組織與間質(zhì)纖維化、蜂窩肺、纖維母細(xì)胞灶交錯(cuò)存在,患者常于5年內(nèi)死亡。由于該病的發(fā)病原因以及細(xì)胞、分子機(jī)制不明確,目前藥物治療對(duì)改變疾病預(yù)后無益,尋找確切有效的治療方法成為改善IPF患者預(yù)后,提高生存率的迫切需要。近年來,有學(xué)者提出,Th1/Th2失衡可能在肺纖維化的發(fā)病過程中起重要作用[1,2,3],Th1型細(xì)胞因子以γ-干擾素(IFN-γ)為代表,可能促進(jìn)正常組織結(jié)構(gòu)的修復(fù),Th2型細(xì)胞因子以白細(xì)胞介素-4(lL-4)為代表,可能引起過度的損傷修復(fù),細(xì)胞外基質(zhì)蛋白沉積和纖維化。當(dāng)Th1/Th2型細(xì)胞因子平衡向Th2型細(xì)胞因子偏移時(shí),可導(dǎo)致纖維化發(fā)生。白細(xì)胞介素-12(IL-12)可以促使Th1細(xì)胞的增殖分化產(chǎn)生Th1型細(xì)胞因子,抑制Th2細(xì)胞的增殖分化。一般認(rèn)為IL-4、IFN-γ及IL-12的相互作用是維持Th1與Th2細(xì)胞平衡的關(guān)鍵,形成了Th1細(xì)胞與Th2細(xì)胞之間的相互抑制。這為肺纖維化發(fā)病機(jī)制和治療方法的研究指出了新的方向。 目的:研究IL-12對(duì)博萊霉素(BLM)致大鼠肺纖維化的治療作用及機(jī)制的探討。 方法:采用成組設(shè)計(jì),雌性Wistar大鼠60只,按照完全隨機(jī)的方法分為4組,即BLM模型組、IL-12干預(yù)組、牛血清白蛋白(BSA)治療對(duì)照組以及生理鹽水(NS)對(duì)照組。經(jīng)氣管滴入給予BLM制備肺纖維化大鼠模型,生理鹽水對(duì)照組給予同等體積的生理鹽水。制模后1-12天后腹腔注射干預(yù)藥物,IL-12組給予IL-12溶液,BSA組給予BSA溶液。制模完成后第7、14、28d每組各處死5只大鼠,并觀察其病理改變、肺臟重量、肺系數(shù)、肺組織勻漿中羥脯氨酸(Hyp)水平的變化,對(duì)病理切片進(jìn)行肺泡炎和纖維化評(píng)分和灰度百分比分析。測(cè)定支氣管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IFN-γ水平,計(jì)算IL-4/ IFN-γ比值。 結(jié)果:1)與第IL-12組比較,BLM組出現(xiàn)明顯肺泡炎及纖維化,肺臟重量、肺系數(shù)、肺組織勻漿中Hyp含量增加,肺泡炎及纖維化評(píng)分增高,BALF中IL-4增加、IL-4/IFN-γ比值增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別0.05, 0.01, 0.01, 0.01, 0.01,0.01, 0.01);灰度分析示7,14 d深染區(qū)百分比增加(P0.01),7 d時(shí)淺染區(qū)百分比增加(P0.05),但是BALF中IFN-γ減少(P 0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 2) BSA組各個(gè)指標(biāo)同BLM組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;3) IL-12組與第BLM、BSA組比較肺泡炎及纖維化程度均減輕, 7,14 d時(shí)的肺泡炎評(píng)分、深染區(qū)百分比以及28 d時(shí)肺纖維化評(píng)分、淺染區(qū)百分比減少,肺臟重量(7 d時(shí)),肺系數(shù)、Hyp含量,BALF中IL-4含量減少, IL-4/IFN-γ比值減低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別0.05,0.01,0.05,0.01,0.01,0.05, 0.01,0.01,0.01) ,但是IFN-γ含量增加(P0.01)。 結(jié)論:IL-12能通過調(diào)整Th1/Th2型細(xì)胞因子的平衡而對(duì)BLM所致大鼠肺纖維化發(fā)揮抗肺纖維化作用。
【圖文】：

值之間呈正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中 IL-4 濃度。圖2-1 雙抗體夾心法示意圖Figure 2-1 the schematic diagram of the double antibody sandwich method

3. 洗板四次。具體方法為甩盡孔內(nèi)液體，每孔加洗滌液 350ul，靜置 30 秒后甩盡液體，，在厚迭吸水紙上拍干，反復(fù) 4 次。4. 除空白孔外，加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。封住板孔，37℃孵箱孵育 60分鐘。5. 洗板四次。6. 除空白孔外，加入酶結(jié)合物工作液(100ul/孔)。封住板孔，37℃孵箱孵育 30 分鐘。7. 洗板四次。8. 加入顯色劑 100ul/孔，避光室溫 10-15 分鐘。(視顯色深淺靈活掌握)9. 加入終止液 100ul/孔, 混勻后即刻測(cè)量 OD450nm 值(5 分鐘內(nèi))。1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R563.9

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2 楊s

本文編號(hào)：2628191