【摘要】：目的:肺泡毛細(xì)血管通透性增加和肺泡內(nèi)液體清除減少是導(dǎo)致體外循環(huán)術(shù)后急性肺損傷(ALI)形成肺水腫的重要原因。肺泡內(nèi)液體清除的主要動力是鈉水轉(zhuǎn)運系統(tǒng),我們前期研究發(fā)現(xiàn)前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子(PBEF)與體外循環(huán)術(shù)后肺內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加密切相關(guān),而PBEF是否抑制肺上皮細(xì)胞鈉水轉(zhuǎn)運系統(tǒng)對肺泡內(nèi)液體的清除還有待進(jìn)一探討。因此,本次實驗是為了探究PBEF表達(dá)變化對肺上皮細(xì)胞鈉水轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的影響。方法:1、運用原代分離RLE-6TN、R3/1細(xì)胞。2、運用免疫熒光進(jìn)行細(xì)胞鑒定,鑒定所分離細(xì)胞為目的細(xì)胞。3、通過pCAGGS PBEF質(zhì)粒及pCAGGS空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株。4、構(gòu)建缺氧復(fù)氧模型,共分為八組:RLE-6TN細(xì)胞對照組、RLE-6TN細(xì)胞模型組、RLE-6TN細(xì)胞模型-pCAGGS PBEF質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組、RLE-6TN細(xì)胞模型-pCAGGS空質(zhì)粒組。R3/1細(xì)胞對照組、R3/1細(xì)胞模型組、R3/1細(xì)胞模型-pCAGGS PBEF質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組、R3/1細(xì)胞模型-pCAGGS空質(zhì)粒組。5、最后利用ATP酶檢測NKA活性,利用PCR和western blot檢測PBEF、ENaC、RT140和表面活性物質(zhì)蛋白(SP)的表達(dá)情況。結(jié)果:1、熒光定量PCR檢測:與對照組相比,轉(zhuǎn)染PBEF質(zhì)粒后,RLE-6TN、R3/1細(xì)胞中PBEF、RTI40兩個指標(biāo)的基因表達(dá)量都有所增加,而ENaC和SP表達(dá)量下降,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。2、Western Blot檢測:與對照組相比,轉(zhuǎn)染PBEF質(zhì)粒后,RLE-6TN、R3/1細(xì)胞中PBEF、RTI40兩個指標(biāo)的蛋白表達(dá)量都有所增加,而ENaC和SP表達(dá)量下降,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3、ATP酶活性檢測:與對照組相比,轉(zhuǎn)染PBEF質(zhì)粒組,RLE-6TN、R3/1細(xì)胞中NKA表達(dá)下降,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:轉(zhuǎn)染PBEF表達(dá)質(zhì)粒后的細(xì)胞中,ENaC和肺泡表面活性物質(zhì)SP表達(dá)下降。說明PBEF表達(dá)上調(diào)后,鈉水轉(zhuǎn)運系統(tǒng)主要轉(zhuǎn)運因子的表達(dá)受到抑制,肺泡內(nèi)液體的清除功能也被影響。SP表達(dá)的下降表明肺泡上皮細(xì)胞的保護(hù)作用降低,受到外界刺激時,肺上皮細(xì)胞更容易受到損傷。同時,ATP酶活性檢測結(jié)果證實,與對照組相比,PBEF組的NKA表達(dá)含量下降,進(jìn)一步證明,PBEF的表達(dá)上調(diào),影響了肺泡水腫液的清除。
【圖文】：

000 maker;1:PUC57-PCAGGS PBEF/BamHI-XbaI;圖 1 酶切電泳圖疫熒光細(xì)胞鑒定圖 2 顯示，細(xì)胞成圓形或橢圓形，細(xì)胞特異性標(biāo)志物 CY。因此可以確定所分離出的細(xì)胞即為所需的 RLE-6TN 細(xì)胞

A:RLE-6TN 細(xì)胞 B:R3/1 細(xì)胞圖 2 免疫熒光鑒定圖3.3 熒光定量 PCR 檢測如圖 3 所示，與對照組相比，轉(zhuǎn)染 PBEF 質(zhì)粒后，，RLE-6TN、R3/1 細(xì)胞中PBEF、RTI40 兩個指標(biāo)的基因表達(dá)量都有所增加，而 ENaC 和 SP 表達(dá)量下降，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。說明 PBEF 表達(dá)上調(diào)后，鈉水轉(zhuǎn)運系統(tǒng)主要轉(zhuǎn)運因子的表達(dá)受到抑制，肺泡內(nèi)液體的清除功能也被影響。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R563

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 馬宏彥;胡朝暉;周勇;;立足三峽:構(gòu)建西北物流陸水轉(zhuǎn)運新通道[J];綜合運輸;2010年12期

2 雷公文;代大偉;;腦內(nèi)水轉(zhuǎn)運的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2016年01期

3 閔朝斌;一種新型的深水轉(zhuǎn)運設(shè)備[J];水運工程;1981年06期

4 黎志;;簡單電路在高爐鐵水轉(zhuǎn)運聯(lián)絡(luò)系統(tǒng)中的設(shè)計與應(yīng)用[J];科技傳播;2011年06期

5 黃偉青;武釗;文銳玲;劉佩儀;歐陽斌;郭偉;梁慶;;δ阿片受體激動劑DADLE對大鼠急性全腦缺血再灌注肺水轉(zhuǎn)運的作用[J];中國醫(yī)療前沿;2013年07期

6 劉德紅;水通道蛋白與腦組織內(nèi)水轉(zhuǎn)運[J];中國急救醫(yī)學(xué);2004年04期

7 桑希斌;水轉(zhuǎn)運的激素調(diào)節(jié)[J];菏澤師專學(xué)報;2001年04期

8 翁可;垂體后葉素對水、鈉、鉀、鈣的轉(zhuǎn)運效應(yīng)實驗研究[J];溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1990年03期

9 任煒;趙自剛;牛春雨;;水通道蛋白在急性肺損傷中的作用機(jī)制[J];中國老年學(xué)雜志;2015年09期

10 丁新民;段蘊鈾;;肺泡內(nèi)水腫液清除及其干預(yù)機(jī)制的研究進(jìn)展[J];國際呼吸雜志;2006年07期

相關(guān)會議論文 前2條

1 章杰;楊紅華;彭麗;江華;;水通道蛋白1過表達(dá)對小鼠施萬細(xì)胞形態(tài)及水轉(zhuǎn)運的影響[A];2015江西省首屆醫(yī)學(xué)美容整形聯(lián)合學(xué)術(shù)會議、江西省醫(yī)學(xué)會第十一次醫(yī)學(xué)美學(xué)與美容學(xué)術(shù)研討會、江西省第四次中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)學(xué)美容學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2015年

2 梁子敬;黃偉青;韓潔韻;;山莨菪堿聯(lián)用表皮生長因子對急性肺損傷作用實驗研究[A];第四屆全國災(zāi)害醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨第二屆“華森杯”災(zāi)害醫(yī)學(xué)優(yōu)秀學(xué)術(shù)論文評審會學(xué)術(shù)論文集[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前3條

1 湖南省兒童醫(yī)院院長 祝益民　本報記者 顏秋雨 整理;兒童急救試水轉(zhuǎn)運網(wǎng)絡(luò)[N];健康報;2010年

2 特約記者 望作信 通訊員 靳武 譚大學(xué);宜昌海事為危險品船提供枯水轉(zhuǎn)運服務(wù)[N];中國交通報;2009年

3 記者 李建新 周松華 通訊員 張潔;深耕內(nèi)陸腹地 做強(qiáng)水水轉(zhuǎn)運[N];浙江日報;2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 張英為;老年鼠肺水通道基因表達(dá)及肺泡水轉(zhuǎn)運率研究[D];東北師范大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 方樵;PBEF表達(dá)變化對肺上皮細(xì)胞鈉水轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的影響研究[D];南昌大學(xué);2018年

2 史永濤;鋼鐵生產(chǎn)新流程中的車間鐵水轉(zhuǎn)運調(diào)度仿真研究[D];重慶大學(xué);2011年

本文編號：2624078