【摘要】： 第一部分肺功能正常吸煙者和慢性阻塞性肺疾病患者肺組織中白細(xì)胞介素17的表達(dá)及意義 目的探討白細(xì)胞介素17(IL-17)在肺功能正常吸煙者和慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺部炎癥反應(yīng)發(fā)生機(jī)制中的作用。 方法將需手術(shù)治療的周圍型肺癌患者分為肺功能正常非吸煙組(NS組,10例)、肺功能正常吸煙組(S組,13例)、吸煙COPD穩(wěn)定期組(COPD組,10例)。于手術(shù)切除標(biāo)本選取距肺癌病灶5～8cm處的新鮮正常肺組織,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELASA)檢測(cè)各組肺組織勻漿IL-17含量,HE和維多利亞藍(lán)+范吉遜染色檢測(cè)各組平均肺泡面積、小氣道總病理積分和肺腺泡肌型動(dòng)脈(MA)管壁厚度,免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)IL-17+及CD4+、CD8+T細(xì)胞在肺泡壁、小氣道壁及MA管壁的表達(dá),分析IL-17表達(dá)與CD4+、CD8+T細(xì)胞以及與肺實(shí)質(zhì)病理改變和肺功能指標(biāo)的相關(guān)關(guān)系。 結(jié)果NS組、S組和COPD組肺組織勻漿IL-17含量分別為6.1(3.7～12.4)、9.7(3.5～69.7)和22.7 (7.0～114.4) pg/mg, COPD組明顯高于明顯NS組(P=0.000),COPD組明顯高于S組(P=0.036),S組明顯高于NS組(P=0.042)；平均肺泡面積分別為(50708±14125)、(106517±13851)和(152344±43783)μm2,小氣道總病理積分分別為(49±10)、(101±34)和(163±36)分,MA管壁厚度分別為(119±11)、(139±25)和(172±28)μm,S組和COPD組均明顯高于NS組(P0.05,P0.01),COPD組明顯高于S組(P0.05, P0.01)。IL-17主要表達(dá)于肺實(shí)質(zhì)浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞,S組和COPD組肺泡壁、小氣道壁及MA管壁IL-17+T細(xì)胞均明顯多于NS組(均尺0.01),COPD組明顯多于S組(均P0.05)。IL-17表達(dá)與平均肺泡面積(r=0.561)、MA管壁厚度(r=0.682)、小氣道病理總積分(r=0.425)呈顯著正相關(guān)(均P0.05)。肺泡壁、小氣道壁和MA管壁中IL-17表達(dá)與CD4+、CD8+細(xì)胞呈顯著正相關(guān)(P0.05,P0.01)。肺組織勻漿IL-17含量與第1秒用力呼氣容積占預(yù)計(jì)值百分比呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.471,P=-0.006)。 結(jié)論IL-17在肺功能正常吸煙者和COPD患者肺組織中表達(dá)增高,與肺CD4+、CD8+T細(xì)胞及肺組織破壞、氣道炎癥、肺動(dòng)脈重構(gòu)和氣流受限密切相關(guān),提示IL-17在吸煙者和COPD患者肺部炎癥反應(yīng)發(fā)生機(jī)制中有促炎作用。 第二部分輔助T細(xì)胞17在肺功能正常吸煙者及COPD患者肺部組織中的活化、分布及作用 目的觀察肺功能正常吸煙者和COPD患者肺組織是否存在活化的輔助T細(xì)胞(Th)17即CD4+IL-17+細(xì)胞,其活化程度以及與IL-17之間的相關(guān)關(guān)系,探討肺實(shí)質(zhì)中IL-17是否來源于Th17細(xì)胞。分析CD4+IL-17+細(xì)胞在肺部的表達(dá)及分布并與肺部病理、肺功能指標(biāo)改變之間做相關(guān)分析關(guān)系,探討Th17細(xì)胞在COPD炎癥反應(yīng)中的作用。 方法實(shí)驗(yàn)病例入選及分組同第一章。熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法檢測(cè)肺組織勻漿Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子ROR gamma t(維甲酸相關(guān)孤獨(dú)受體γt)的RNA表達(dá)水平,蛋白質(zhì)印跡(Westerm blot)方法檢測(cè)肺組織勻漿ROR gamma t蛋白表達(dá)水平,免疫熒光雙標(biāo)方法檢測(cè)Th17細(xì)胞在肺泡壁、小氣道壁、肺小動(dòng)脈壁的表達(dá)。分析肺組織勻漿中ROR gammat RNA表達(dá)水平與IL-17蛋白水平及FEV1占預(yù)計(jì)值百分比相關(guān)性；分析肺組織中Th17細(xì)胞與肺氣腫、小氣道病理總積分、肺小動(dòng)脈管壁厚度,及與IL-17+、CD4+T淋巴細(xì)胞之間相關(guān)性。 結(jié)果(1)熒光定量PCR結(jié)果顯示,肺組織勻漿ROR gammat的mRNA表達(dá)水平,在NS組為(2.685±0.886),S組(8.564±1.419),COPD組(10.158±1.574),三組間兩兩比較有顯著性差異(P0.01或P0.05)以COPD最為顯著。(2) Western blot結(jié)果顯示肺組織勻漿ROR gamma t蛋白表達(dá)水平在NS組(0.369±0.094),S組(0.614±0.241),COPD組90.886±0.184),三組間兩兩比較有顯著性差異(P0.01或P0.05),以COPD組最為顯著。(3)免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示,CD4+IL-17+細(xì)胞在肺泡壁的表達(dá),S組為(25±7)個(gè)／cm,COPD組為(27±4)個(gè)／cm較NS組(14±5)個(gè)／cm顯著性增強(qiáng)(均P0.01),但COPD組與S組比較無顯著性差異(P0.05)。在小氣道壁的表達(dá),COPD組為(220[81,422])個(gè)／mm2較S組(121[22,170])個(gè)／mm2及NS組(54[16,258])個(gè)／mm2表達(dá)增強(qiáng)(P0.05),S組較NS組表達(dá)有增強(qiáng)的趨勢(shì),但無顯著性差異(P0.05)。NS組、S組、COPD組三組在血管壁的表達(dá)有增強(qiáng)的趨勢(shì)但無顯著性差異(均P0.05)。(4)肺組織勻漿中ROR gammat RNA與FEV1占預(yù)計(jì)值百分比呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.643, p= 0.000), ROR gammat蛋白含量與FEV1占預(yù)計(jì)值百分比呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.539,p=0.002),肺組織IL-17蛋白含量與ROR gammat RNA含量呈顯著正相關(guān)(r=0.678,p=0.000)。(5)肺泡壁中CD4+IL-17+細(xì)胞數(shù)與平均肺泡面積呈顯著正相關(guān)(r=0.738,p=0.000),在氣道壁中Th17細(xì)胞數(shù)與氣道總病理評(píng)分呈顯著正相關(guān)(r=0.476,p=0.034),在MA管壁中的Th17細(xì)胞數(shù)與血管壁厚度無顯著性相關(guān)(r=0.355,p=0.125)。(6)肺泡壁中CD4+IL-17+細(xì)胞數(shù)與IL-17+、CD4+T淋巴細(xì)胞之間相關(guān)系數(shù)(分別r=0.584,0.646,均P0.01),氣管壁中CD4+IL-17+細(xì)胞數(shù)與IL-17+、CD4+T淋巴細(xì)胞之間相關(guān)系數(shù)(分別r=0.510,0.518,均P0.05),肺小動(dòng)脈壁CD4+IL-17+細(xì)胞數(shù)與IL-17+淋巴細(xì)胞之間相關(guān)系數(shù)(r=0.517,P0.05),與CD4+T淋巴細(xì)胞無顯著性相關(guān)(r=0.200,p=0.399)。 結(jié)論Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子ROR gammat mRNA及蛋白水平在正常吸煙者的肺組織已經(jīng)開始增高,COPD患者更為顯著,并與IL-17蛋白含量密切相關(guān)；Th17細(xì)胞表達(dá)增強(qiáng)并與IL-17+細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞及肺組織破壞、氣道和肺動(dòng)脈炎癥與重構(gòu)、氣流受限密切相關(guān)。結(jié)果提示CD4+T淋巴細(xì)胞參與吸煙者和COPD患者肺部炎癥免疫反應(yīng),肺組織中Th17處于增殖活化狀態(tài),并分泌IL-17參與并促進(jìn)肺部炎癥反應(yīng)。 第三部分Th17細(xì)胞及相關(guān)因子參與肺功能正常吸煙者和COPD患者肺部炎癥的相關(guān)機(jī)制 目的觀察Th17細(xì)胞活化的上游因子IL-23受體(IL-23R), CC趨化因子受體6(CCR6)及其分泌的相關(guān)因子IL-17、IL-21在肺組織的表達(dá)及意義,探討Th17細(xì)胞在COPD肺部炎癥中活化及放大炎癥反應(yīng)的可能機(jī)制。 方法實(shí)驗(yàn)病例入選及分組同第一章。肺組織蠟塊病理切片免疫組化技術(shù)檢測(cè)肺泡壁1L-17, IL-23R, CCR6的表達(dá),并分析三者之間及與Th17細(xì)胞之間的相關(guān)性。熒光定量PCR檢測(cè)肺組織勻漿IL-21mRNA、1L-17mRNA含量,并分析二者之間,以及與RORγtmRNA和FEV1的相關(guān)關(guān)系。分析肺泡壁、氣道壁、肺動(dòng)脈壁Th17細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞的相關(guān)性。 結(jié)果(1)在肺泡壁中,NS組、S組、COPD組IL-23R+細(xì)胞數(shù)分別為(46±7)個(gè)／cm, (60±15)個(gè)／cm, (65±12)個(gè)／cm,S組和COPD組與NS組比較,有顯著性差異(P0.05或P0.01),COPD組較S組有增高趨勢(shì),但無顯著性差異(P0.05)。在肺泡壁中,NS組、S組、COPD組CCR6+細(xì)胞數(shù)分別為(42±6)個(gè)／cm, (56±8)個(gè)／cm, (62±8)個(gè)／cm,S組和COPD組與NS組比較,有顯著性差異(P0.05或P0.01),COPD組較S組有增高趨勢(shì),但無顯著性差異(P0.05)。(2)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,肺組織勻漿中,NS組、S組、COPD組三組的IL-21mRNA分別為(4.784±2.282),(46.312±15.463),(84.804±21.884),三組間兩兩比較有顯著性差異(均P0.01),COPD組表達(dá)增高最明顯。NS組、S組、COPD組三組的IL-17mRNA分別為(3.121±1.262),(26.434±7.529),(44.929±15.303),三組間兩兩比較有顯著性差異(P0.01),COPD組表達(dá)增高最明顯。(3)肺泡壁中,CD4+IL-17+細(xì)胞數(shù)與IL-17+細(xì)胞數(shù)、IL-23R+細(xì)胞數(shù)、CCR6+細(xì)胞數(shù)有顯著正相關(guān)(r分別為0.584,0.422,0.670,P0.01或P0.05)。IL-17+細(xì)胞數(shù)與IL-23R+細(xì)胞數(shù)無顯著性相關(guān)(r=0.302,p=0.105)。IL-23R+細(xì)胞數(shù)與CCR6+細(xì)胞數(shù)有顯著正相關(guān)(r=0.572,p=0.001),IL-17+細(xì)胞數(shù)與CCR6+細(xì)胞數(shù)有顯著正相關(guān)(r=0.508,p=0.004)。(4)肺泡壁中CD4+IL-17+細(xì)胞數(shù)與CD8+T淋巴細(xì)胞之間相關(guān)系數(shù)為(r=0.664,P0.01),氣管壁中CD4+IL-17+細(xì)胞數(shù)與CD8+T淋巴細(xì)胞之間相關(guān)系數(shù)為(r=0.491, P0.05),肺小動(dòng)脈壁CD4+IL-17+細(xì)胞數(shù)與CD8+T淋巴細(xì)胞之間相關(guān)系數(shù)為(r=0.518,P0.05)。(5)肺組織勻漿中IL-21mRNA與RORγtmRNA含量呈顯著正相關(guān)(r=0.757,p=0.000),R0RγtmRNA與IL-17mRNA含量呈顯著正相關(guān)(r=0.802,p=0.000),IL-21mRNA與IL-17mRNA含量呈顯著正相關(guān)(r=0.746,p=0.000)。(6)肺組織勻漿中IL-21mRNA、1L-17mRNA與FEV1均呈顯著負(fù)相關(guān)(r分別為-0.694,-0.725,均p=0.000)。 結(jié)論肺功能正常吸煙者和COPD患者肺泡壁中IL-17、IL-23R、CCR6表達(dá)顯著增高并與Th17細(xì)胞數(shù)呈顯著正相關(guān),在肺泡壁、氣道、肺動(dòng)脈中Th17細(xì)胞數(shù)與CD8+淋巴細(xì)胞均有顯著正相關(guān),Th17細(xì)胞相關(guān)因子IL-21、1L-17在肺組織勻漿中RNA轉(zhuǎn)錄水平與RORγtmRNA之間均呈顯著正相關(guān),與氣流受限密切相關(guān)。結(jié)果提示肺功能正常吸煙者和COPD患者中Th17通過CCR6及IL-23途徑趨化浸潤(rùn)到肺實(shí)質(zhì)并增殖活化,分泌工L-17、IL-21等細(xì)胞因子,調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞及CD8+T淋巴細(xì)胞共同發(fā)揮致炎及放大炎癥的作用。
【圖文】：

銄苑渭膊』頰叻尾恐械謀澩錛耙庖?007級(jí)博士學(xué)位論文5肺組織勻漿 RORgammatmRNA、蛋白含量測(cè)定(表2一2，圖2一1，，2)熒光定量PCR結(jié)果顯示，肺組織勻漿 RORgammat的mRNA表達(dá)水平，在NS組為(2.685士0.886)，S組(8.56牡 1.419)，COPD組(10.158土1.574)，三組間兩兩比較有顯著性差異(P<O.01或P<0.05)，以COPD最為顯著。 westemblot結(jié)果顯示肺組織勻漿 RORgammat蛋白表達(dá)水平在NS組(0.369士0.094)

(二一0.643， P=0.000)，RORg~at蛋白含量與FEVI占預(yù)計(jì)值百分比呈顯著負(fù)相關(guān)(二一0.539， P=0.002)。肺組織IL一17蛋白含量與RORg~atRNA含量的呈顯著正相關(guān)(二0.678， P=0.000)(圖2一3，4)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R563.9

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1 海迪婭·艾爾肯;104例男性COPD患者辯證分型與骨密度相關(guān)性分析[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2010年

2 謝年華;COPD患者生存質(zhì)量評(píng)價(jià)[D];華中科技大學(xué);2009年

3 劉柳;慢性阻塞性肺疾病急性加重期對(duì)老年COPD患者T淋巴細(xì)胞免疫的影響及免疫干預(yù)觀察[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

4 胡曉婷;新疆和田地區(qū)農(nóng)村慢性阻塞性肺疾病的患病調(diào)查[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2010年

5 張?chǎng)?昆明市居民慢性阻塞性肺疾病流行病學(xué)調(diào)查分析[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

6 王娟;中文版慢性阻塞性肺疾病篩查問卷在吸煙者中的初步檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

7 李冠華;COPD傳導(dǎo)性氣道的改變及其對(duì)機(jī)械通氣的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

8 張會(huì)娟;慢性阻塞性肺�。–OPD）合并肺結(jié)核的臨床特征[D];山東大學(xué);2010年

9 王成;云南漢族老年人群β_2-AR基因多態(tài)性與COPD合并EH相關(guān)性的初步研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2010年

10 房賓;64層螺旋CT評(píng)價(jià)COPD氣道壁厚度與肺功能的相關(guān)性研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2623033