【摘要】：研究目的:本實(shí)驗(yàn)通過收集臨床上惡性胸腔積液(malignant pleural effusion MPE)和良性胸腔積液(benign pleural effusion BPE)的胸水標(biāo)本,檢測miRNA-146a、miRNA-185在MPE及BPE患者胸水中的相對表達(dá)水平,評估m(xù)iRNA-146a、miRNA-185在臨床鑒別診斷MPE及BPE的效能。研究方法:采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測40例MPE及41例BPE患者胸水中miRNA-146a、mi RNA-185兩種miRNA的相對表達(dá)量,運(yùn)用兩獨(dú)立樣本的Mann-Whitney U秩和非參數(shù)檢驗(yàn)驗(yàn)證兩種miRNA在良惡性胸腔積液中差異表達(dá)是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過構(gòu)建胸水miRNA-146a、mi RNA-185的受試者工作曲線(ROC曲線),分別計(jì)算出miRNA-146a、miRNA-185診斷肺癌相關(guān)的MPE的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性,并與臨床上應(yīng)用成熟的腫瘤標(biāo)記物癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen CEA)及細(xì)胞角蛋白19片段(Cytokeratin 19 fragment Cyfra21-1)進(jìn)行比較,根據(jù)受試者工作曲線下面積(AUC)評估m(xù)iRNA-146a、miRNA-185診斷MPE的效能。研究結(jié)果:1、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)顯示mi RNA-146a、miRNA-185兩種miRNA在MPE及BPE患者的胸水中存在明顯的差異性表達(dá)(P0.01),實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明miRNA-146a、miRNA-185兩種miRNA在肺癌合并MPE患者的胸水中的表達(dá)量顯著低于BPE患者的胸水。2、ROC曲線顯示miRNA-146a的曲線下面積(AUC)為0.816(95%可信區(qū)間0.713~0.919),敏感性為0.850,特異性為0.805。miRNA-185的AUC為0.826(95%可信區(qū)間0.729~0.924),其敏感性0.800,特異性0.854。兩種miRNA的AUC均低于CEA的0.928(95%可信區(qū)間0.861~0.996),但高于CYFRA21-1的0.734(95%可信區(qū)間0.615~0.854)。mi RNA-146a的診斷的敏感性均高于CEA及CYFRA21-1,miRNA-185的診斷敏感性高于CYFRA21-1低于CEA,但它們的特異性較CEA及CYFRA21-1均降低。兩種mi RNA聯(lián)合診斷的AUC為0.814(95%可信區(qū)間0.713~0.915),低于miRNA單獨(dú)診斷時(shí)的AUC。同樣,兩種miRNA聯(lián)合診斷的敏感性為0.763,較miRNA單獨(dú)診斷的敏感性降低,而特異性為0.842,高于miRNA-146a,但低于mi RNA-185。miRNA-146a聯(lián)合CEA診斷的AUC為0.925(95%可信區(qū)間0.857~0.992),mi RNA-185聯(lián)合CEA診斷的AUC為0.924(95%可信區(qū)間0.856~0.992),較任一種mi RNA單獨(dú)診斷的效能提高。兩種miRNA共同聯(lián)合CEA診斷惡性胸腔積液的AUC為0.922(95%可信區(qū)間0.844~1.000),較任一種mi RNA聯(lián)合CEA的效能無明顯增高。3、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明在肺癌合并MPE患者的胸水中miRNA-146a、miRNA-185的表達(dá)量與惡性胸水患者的臨床參數(shù)年齡、性別、吸煙史均無明顯的相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論:在胸腔積液中均檢測到miRNA-146a、miRNA-185兩種miRNA的表達(dá);miRNA-146a、mi RNA-185兩種mi RNA在MPE患者胸水中的表達(dá)量顯著低于BPE患者(P0.01);miRNA-146a、miRNA-185兩種miRNA有可能協(xié)助臨床上鑒別診斷惡性胸腔積液的無創(chuàng)標(biāo)記物。
【圖文】：

間的標(biāo)本逆轉(zhuǎn)錄 cDNA，OD 值小于 1.8 多提示標(biāo)本中可能存在蛋白質(zhì)污染，而標(biāo)本的 OD 值大于 2.0 多提示 RNA 可能存在降解。每個(gè)標(biāo)本測量需重復(fù)三遍，取三次實(shí)驗(yàn)測得標(biāo)本濃度平均值。3.2 胸腔積液中 miRNA-146a、miRNA-185 及內(nèi)參 U6 的熒光定量 PCR 的擴(kuò)增及溶解曲線如圖 3.2.1、3.2.3、3.2.5 所示，miRNA-146a、miRNA-185 及內(nèi)參基因 U6 在同等條件下行實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 后，儀器自動收集的熒光信號曲線圖。如圖所示的一條水平直線表示各基因擴(kuò)增后的閾值，而該直線與個(gè)基因的擴(kuò)增曲線相交的橫坐標(biāo)為各基因的 CT 值。圖 3.2.2、3.2.4、3.2.6 為各基因?qū)?yīng)的溶解曲線，各溶解曲線均只有一個(gè)波峰，若出現(xiàn)雙波峰的溶解曲線，，說明所擴(kuò)增產(chǎn)物不是本實(shí)驗(yàn)所要求的產(chǎn)物，每個(gè)擴(kuò)增曲線的波峰所對應(yīng)的解鏈溫度均高于 80℃。

2胸腔積液中miRNA-146a的溶解曲線
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R561.3

【參考文獻(xiàn)】

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1 王虹;田佳;萬毅新;魏海東;陶紅艷;黃暉蓉;王曉平;;良惡性胸腔積液的臨床診斷研究進(jìn)展[J];臨床肺科雜志;2014年12期

2 趙俊;周賢梅;;胸腔積液中生物標(biāo)志物研究進(jìn)展[J];臨床肺科雜志;2013年04期

3 李威;陳燕明;陳曉軍;林v

本文編號：2615057