【摘要】：研究目的急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征是多器官功能障礙綜合征在肺部的重要臨床表現(xiàn)。急性肺損傷的病因包括膿毒癥、燒傷、重癥肺炎或者嚴(yán)重創(chuàng)傷等。其病理生理特點(diǎn)是肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮-上皮屏障受損,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),失控的炎癥反應(yīng)以及氧化應(yīng)激損傷等。雖然研究人員對(duì)急性肺損傷的早期診斷和治療策略進(jìn)行了深入研究,但急性肺損傷的發(fā)病率和死亡率一直居高不下,這對(duì)公共衛(wèi)生健康造成極大影響。哇巴因(Ouabain)是一種鈉鉀ATP酶抑制劑,曾用于治療充血性心力衰竭。近年來,有較多研究發(fā)現(xiàn)哇巴因在器官損傷、免疫反應(yīng)及腫瘤治療中發(fā)揮重要作用。目前,哇巴因在急性肺損傷中是否具有保護(hù)作用還未見報(bào)道。本研究的目的是探討哇巴因是否抑制脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的急性肺損傷,并初步探尋其潛在機(jī)制。研究方法8-12周雄性C57BL/6小鼠(20g-25g)隨機(jī)分為三組:對(duì)照組(Control);肺損傷組(LPS);哇巴因組(LPS+OUB)。對(duì)照組和肺損傷組小鼠腹腔注射無菌PBS溶液,連續(xù)3天;哇巴因組小鼠腹腔注射哇巴因,連續(xù)3天。第3天腹腔注射哇巴因1 h后,肺損傷組和哇巴因組小鼠在七氟醚麻醉下,經(jīng)鼻吸入溶解于無菌PBS的LPS溶液,對(duì)照組小鼠吸入等體積PBS溶液。LPS吸入6 h和24 h后,使用二氧化碳吸入法處死小鼠,收集各組小鼠肺組織和肺泡灌洗液進(jìn)行肺損傷相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.LPS處理6 h和24 h后,肺組織HE染色病理切片顯示肺損傷組小鼠肺間質(zhì)水腫、出血、肺間隔增厚或受損以及顯著的炎細(xì)胞浸潤(rùn);哇巴因組小鼠的肺組織HE染色切片顯示肺組織病變程度減輕。肺損傷病理評(píng)分也表明哇巴因組病理評(píng)分顯著低于肺損傷組,這說明哇巴因可降低LPS造成的肺組織損傷。2.LPS顯著增加小鼠肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β和IL-6水平;而哇巴因可降低肺泡灌洗液中上述細(xì)胞因子的含量。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明,LPS可致小鼠肺組織TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá)升高,哇巴因可抑制上述細(xì)胞因子的mRNA水平。3.LPS處理后,小鼠肺組織濕/干比升高,哇巴因可改善ALI小鼠的濕/干比;LPS可顯著增加小鼠支氣管肺泡灌洗液蛋白含量,而哇巴因可減少小鼠支氣管肺泡灌洗液蛋白含量;Evans藍(lán)尾靜脈注射1 h后,肺損傷組小鼠肺組織Evans藍(lán)含量最高,而哇巴因可顯著下調(diào)肺組織Evans藍(lán)的含量。4.與對(duì)照組相比,肺損傷組小鼠肺泡灌洗液總細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞比例顯著增加,哇巴因可一定程度減少這些細(xì)胞浸潤(rùn)。此外,哇巴因也能降低小鼠肺組織MPO活性。5.肺損傷組小鼠肺組織NF-κB p65的磷酸化水平顯著高于對(duì)照組,哇巴因可降低肺組織NF-κB p65的磷酸化水平;哇巴因組小鼠肺組織磷酸化的ERK、JNK和p38表達(dá)高于對(duì)照組,但低于肺損傷組。結(jié)論哇巴因可改善LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷嚴(yán)重程度,其機(jī)制可能與哇巴因抑制ERK、JNK、p38和NF-κB p65磷酸化水平相關(guān),從而調(diào)控TNF-α、IL-1β和IL-6等炎癥因子分泌并抑制炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
【圖文】：

圖 1 哇巴因?qū)?LPS 誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺組織鏡下病理表現(xiàn)及病理評(píng)分A：LPS 處理 6 h；B：LPS 處理 24 h；C：LPS 處理 6 h 病理評(píng)分；D：LPS 處理 24 h 病# P<0.05，##P<0.01 vs Control group; *P<0.05 vs LPS group巴因?qū)?LPS 誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺組織通透性的(一) 烘干法檢測(cè)小鼠肺組織濕/干比測(cè)肺組織濕/干比可評(píng)估肺組織液體滲出以及肺組織水腫情況，這也可組織通透性，是急性肺損傷的一個(gè)重要病理表現(xiàn)[17]。如圖所示（圖 2導(dǎo)急性肺損傷 6 h 和 24 h 后，相比于肺損傷組，哇巴因組小鼠肺組織濕定程度的降低（P＜0.05），這證明哇巴因有效緩解 LPS 造成的肺水腫。

圖 1 哇巴因?qū)?LPS 誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺組織鏡下病理表現(xiàn)及病理評(píng)分A：LPS 處理 6 h；B：LPS 處理 24 h；C：LPS 處理 6 h 病理評(píng)分；D：LPS 處理 24 h 病理評(píng)# P<0.05，##P<0.01 vs Control group; *P<0.05 vs LPS group巴因?qū)?LPS 誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺組織通透性的影) 烘干法檢測(cè)小鼠肺組織濕/干比肺組織濕/干比可評(píng)估肺組織液體滲出以及肺組織水腫情況，這也可進(jìn)一織通透性，是急性肺損傷的一個(gè)重要病理表現(xiàn)[17]。如圖所示（圖 2A, B急性肺損傷 6 h 和 24 h 后，相比于肺損傷組，哇巴因組小鼠肺組織濕/干程度的降低（P＜0.05），這證明哇巴因有效緩解 LPS 造成的肺水腫以及
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R563

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本文編號(hào)：2599560