【摘要】：背景和目的特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是最為常見(jiàn)的特發(fā)性間質(zhì)性肺炎,其預(yù)后比多數(shù)肺癌差,中位生存期從確診之日起為2-5年,5年生存率僅為20%,其最近幾十年來(lái)發(fā)病率一直在上升,目前還沒(méi)有治愈的方法。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)是一種表達(dá)較為普遍的lncRNA,可以促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲過(guò)程,并且可以參與肝臟纖維化進(jìn)展過(guò)程,然而,目前尚未見(jiàn)到有關(guān)lncRNA MALAT1在IPF中的作用的相關(guān)研究,肺成纖維細(xì)胞增殖及向肌成纖維細(xì)胞分化是影響IPF發(fā)生的關(guān)鍵過(guò)程之一,為此,本研究就lncRNA MALAT1在人肺成纖維細(xì)胞增殖分化中的作用展開(kāi)了研究。材料與方法培養(yǎng)人肺成纖維細(xì)胞HFL-1,應(yīng)用二苯基四氮唑溴鹽(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)作用不同時(shí)間對(duì)HFL-1細(xì)胞增殖的影響,確定TGF-β1最佳作用濃度和時(shí)間;在以上實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用5ug/L TGF-β1作用于HFL-1細(xì)胞48h,將其定義為藥物組,未進(jìn)行任何處理的細(xì)胞定義為對(duì)照組,實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)(real-time quantitative PCR detecting system,qPCR)技術(shù)檢測(cè)兩組lncMALAT1表達(dá)水平;將細(xì)胞分為空白對(duì)照組TGF-β1組陰性轉(zhuǎn)染組和siMALAT1組:空白對(duì)照組不做任何處理,TGF-β1組采用5ug/L的TGF-β1處理,陰性轉(zhuǎn)染組采用TGF-β1和siMALAT1 NC共處理,siMALAT1組采用TGF-β1和siMALAT1共處理,qPCR檢測(cè)不同組別α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle activation protein,α-SMA)Ⅰ型膠原(collagen1,COL1)mRNA及l(fā)ncMALAT1的表達(dá)水平;Western-blot法檢測(cè)以上四組α-SMACOL1蛋白的表達(dá)情況;MTT法檢測(cè)四組HFL-1細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果(1)在244872h,不同濃度TGF-β1刺激時(shí)HFL-1細(xì)胞的增殖均呈現(xiàn)出先增后減的趨勢(shì)(P0.05);TGF-β1作用48h時(shí),不同濃度組別間細(xì)胞增殖活力有差異(P0.05);5ug/LTGF-β1作用48h為最適藥物作用濃度和時(shí)間。(2)藥物組lncMALAT1相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組(P0.05)。(3)四組α-SMACOL1mRNA及l(fā)ncMALA的相對(duì)表達(dá)量具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);TGF-β1組陰性轉(zhuǎn)染組上述RNA相對(duì)表達(dá)量均高于空白對(duì)照組和siMALAT1組(P0.05),陰性轉(zhuǎn)染組各RNA相對(duì)表達(dá)量同TGF-β1組相比無(wú)差異(P0.05)。(4)四組α-SMACOL1蛋白的相對(duì)表達(dá)量具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);TGF-β1組陰性轉(zhuǎn)染組蛋白相對(duì)表達(dá)量均高于空白對(duì)照組和siMALAT1組(P0.05),陰性轉(zhuǎn)染組和TGF-β1組相比無(wú)差異(P0.05)。(5)四組HFL-1細(xì)胞增殖活力有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);TGF-β1組陰性轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖活力高于空白對(duì)照組和siMALAT1組(P0.05),陰性轉(zhuǎn)染組同TGF-β1組相比無(wú)差異(P0.05)。結(jié)論(1)lncMALAT1在TGF-β1刺激HFL-1細(xì)胞后表達(dá)水平升高。(2)lncMALAT1基因沉默后,經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)活化的人肺成纖維細(xì)胞中α-SMACOL1的mRNA和蛋白表達(dá)水平下降。(3)lncMALAT1基因沉默可以抑制人肺成纖維細(xì)胞的增殖活力。(4)深入探索lncMALAT1的作用機(jī)制及其影響的分子通路并進(jìn)行靶向調(diào)控可能為IPF的治療提供新的治療手段。
【圖文】：

P=0.054），，詳見(jiàn)圖 5，圖 6圖 5 不同組別 α-SMACOL1 蛋白相組和 siMALAT1 組比較 P<0.05****ontrol group TGF-β1 group negativetransfection gOL1 α-SMA
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R563

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本文編號(hào)：2598976