發(fā)布時(shí)間：2020-03-24 20:02

【摘要】：目的:長鏈非編碼RNA((lncRNA)作為調(diào)控基因可參與調(diào)控多種生理過程,NANCI屬于基因間lncRNA,主要表達(dá)于發(fā)育中的肺、甲狀腺和腹側(cè)前腦組織內(nèi),其表達(dá)模式與Nkx2.1相似。Nkx2.1可參與肺發(fā)育的生理過程,并對維持肺組織的正常形態(tài)起著重要作用,Nkx2.1作為重要的轉(zhuǎn)錄因子受多種通路調(diào)控,包括Wnt通路,其中Wnt5a屬于Wnt蛋白家族非經(jīng)典通路蛋白,對穩(wěn)定肺泡結(jié)構(gòu)形態(tài)和促進(jìn)肺泡上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化起重要的調(diào)控作用。急性肺損傷(ALI)是各種因素導(dǎo)致的急性低氧性呼吸功能不全,具有較高的病死率,其病理改變主要是由于肺泡和毛細(xì)血管受到損傷,導(dǎo)致的頑固性低氧血癥和非心源性肺水腫,病理上可表現(xiàn)出肺間質(zhì)增厚、肺泡建構(gòu)紊亂。那么Wnt5a、NANCI和Nkx2.1三者在ALI病理情況下是否存在聯(lián)系,且它們之間是通過何種機(jī)制進(jìn)行相互調(diào)控的。方法:將80只4到6周小鼠隨機(jī)分成模型組和對照組,通過向小鼠氣管內(nèi)滴入LPS構(gòu)建急性肺損傷模型,并在給藥后3h、6h、12h、24h和48h收集肺組織,通過顯微鏡觀察肺組織形態(tài)改變,通過PCR、免疫熒光雙染及免疫印跡檢測Wnt5a、Nkx2.1、SPC和AQP5的表達(dá)水平,通過PCR檢測NANCI表達(dá)。在細(xì)胞水平,通過慢病毒構(gòu)建Wnt5a或NANCI低表達(dá)的細(xì)胞系,收集細(xì)胞通過PCR、免疫熒光以及免疫印跡檢測相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄與翻譯情況,收集培養(yǎng)基通過ELISA檢測分泌到培養(yǎng)基內(nèi)的Wnt5a的表達(dá)水平。結(jié)果:在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,與對照組相比,模型組從6h后其組織形態(tài)逐漸出現(xiàn)改變,在6h時(shí)出現(xiàn)肺間質(zhì)增厚,而后出現(xiàn)肺泡結(jié)構(gòu)改變。與對照組相比,模型組的NANCI、Nkx2.1、SPC和AQP5表達(dá)水平無論基因水平還是蛋白水平均下降(p0.05),并且不同時(shí)間點(diǎn)其表達(dá)水平不完全一致,Wnt5a在基因水平轉(zhuǎn)錄受到抑制(p0.05),但在3h、24h和48h時(shí)其蛋白水平上有一個(gè)輕度的上調(diào)趨勢(p0.05)。在體外實(shí)驗(yàn)中,當(dāng)NANCI表達(dá)受到抑制時(shí)(p0.05),Nkx2.1和SPC表達(dá)均受到明顯抑制(p0.05),Wnt5a在mRNA和蛋白水平均表現(xiàn)出上調(diào)趨勢(p0.05)。而當(dāng)Wnt5a表達(dá)受到抑制時(shí)(p0.05),NANCI、Nkx2.1以及SPC均下調(diào)(p0.05)。結(jié)論:Wnt5a、NANCI和Nkx2.1均參與急性肺損傷,尤其是肺泡損傷的致病過程,且NANCI通過調(diào)控Nkx2.1的表達(dá)參與急性肺損傷的病理過程,且其表達(dá)受Wnt5a的調(diào)控,與Wnt5a之間存在反饋調(diào)控。
【圖文】：

肺組織形態(tài)學(xué)肺組織HE染色，模型組與對照組相比肺間質(zhì)增厚，肺泡結(jié)構(gòu)異常，標(biāo)尺為100μm

5 廣泛表達(dá)于細(xì)胞漿內(nèi)。與對照組相比，模型組的 Nkx2.1、SPC、AQP5 熒光豐度減弱、表達(dá)范圍減小且趨勢相一致（圖2.1A.B），Wnt5a 變化不明顯（圖 2.2A.B）。3.3 PCR 測定組織內(nèi) Wnt5a、NANCI、Nkx2.1、SPC 和 AQP5 的表達(dá)與對照組相比，模型組的 SPC（圖 3A）和 AQP5（圖 3B） mRNA 水平表達(dá)呈下降趨勢，SPC 從 6h 開始下降（p<0.01），在 24h 達(dá)到下降最明顯（p<0.01），且 6h以后模型組與 3h 相比均明顯下降（p<0.01）；AQP5 在 6h 時(shí)下降最明顯（p<0.01），隨后模型組的下降趨勢雖不如 6h 時(shí)明顯，，但與同時(shí)間點(diǎn)的對照組及 3h 模型組相比明顯下降（p<0.05）。與對照組相比
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R563

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 江林敏；熊彬；李 多

本文編號：2598791